교양 공감 뉴런의 돌기 성장을 유도
Summary
우리는 선택적으로 perinatal 쥐의 우수한 경추 신경 (SCG)에서 dissociated 주요 동정 뉴런의 돌기 성장을 유도하는 뼈 morphogenetic 단백질 7 (BMP-7) 또는 Matrigel을 사용하는 프로토콜을 설명합니다.
Abstract
모수 석의 아버의 형태는 신경 세포가 1-3받을 수 총 시냅스 입력을 결정하고, 종류와 이들 입력 4-6의 분포에 영향을 미칩니다. 돌기 성장과 소성의 변경된 패턴은 실험적인 모델 7의 장애 neurobehavioral 기능과 관련되며, neurodevelopmental 장애의 8-10과 neurodegenerative 질병 11-13 모두에서 관찰 임상 증상에 기여할 것으로 생각됩니다. 이러한 관찰은 정확하게 돌기 형태와 규제의 기능적 중요성을 강조하고, 돌기 성장을 제어하는 메커니즘을 파악하는 것은 오직 정상적인 발달 기간 동안 규제하는 방법의 연결을 연결의 이해를 향상하지 않을뿐만 아니라, 다양한 신경 질환에 대한 새로운 치료 전략에 대한 통찰력을 제공할 수도 것이 좋습니다.
돌기 성장 기계론의 연구는 크게 가용성 O에 의해 용이하게됩니다뉴런은 실험적으로 그들이 그들의 생체내의 대응에의 비교 돌기 아버을 자세히 설명하는 하나 dendrites을 연장되지 않는 상태에서 전환 수 있습니다 FA 모델 시스템입니다. perinatal 설치류의 우수한 경추 신경 (SCG)에서 dissociated 교감 신경의 차 문화는 이러한 모델을 제공합니다. 혈청 및 ganglionic glial 세포의 부재에서 정의된 중간에 배양해 때 교감 신경은 axonal은 단일 프로세스를 확장,이 unipolar 국가는 문화 14,15의 개월 주 동안 지속. 그러나 문화 매체 중 뼈 morphogenetic 단백질 7 (BMP-7) 16,17 혹은 Matrigel 18 또한이 dendrites 위해 morphologic, 생화 학적 및 기능적 기준에 부합하는 여러 프로세스를 확장하려면 다음 뉴런을 트리거합니다. 공감 perinatal 설치류의 SCG에서 dissociated 뉴런과 정의된 조건 하에서 재배는 뉴런 19 동질적인 인구이다Matrigel, BMP-7 decapentaplegic (dpp)과 60A subfamilies 17,18,20,21의 다른 BMPs의 dendrite-증진 활동에 균일하게 반응니다. 중요한 것은, Matrigel 및 BMP 유발 dendrite 형성은 세포 생존 또는 axonal 성장 17,18의 변화의 부재에서 발생합니다.
여기, 우리는 그들이 Matrigel 또는 BMPs의 선택적 dendrite-촉진 활동으로 반응하도록 perinatal 쥐의 SCG에서 파생된 동정 뉴런의 dissociated 문화를 설정하는 방법에 대해 설명합니다.
Protocol
Discussion
이 모델의 장점은 다음과 같습니다 () 문화가 다른 세포 유형 17,23의 찾아볼 수없는 교감 신경의 동질적인 인구로 구성되며, (b)는 교감 신경의 성장 인자 요구 사항의 사용을 허용하는, 잘 설립 있습니다 정의 매체 및 정의된 다양한 미디어와 기판이 23 증가하고 교감 신경을 유지하기 위해 잘 작동, (다) 이러한 문화의 뉴런은 Matrigel, BMP-7 dpp의 다른 BMPs의 dendrite-증진 활동에 균일하?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 국립 보건원 (보조금 R21 NS45037와 R01 ES014901)에서 기금에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Glass coverslips | Bellco | 1943-10012 | 12 mm Round Coverslip #1 Thickness, German glass |
| Bent tip pipets | Bellco | 1273-50003 | |
| Poly-D-lysine | Sigma | P0899-100MG | Stock solution 1 mg/ml |
| Distilled water | Gibco | 15230 | |
| Fine forceps Dumont no. 4 and 5 | Fine Science Tools (FST) | 11252-30 11241-30 | |
| 20-gauge needles | Becton Dickinson | 305176 | |
| Leibovitz’s L-15 medium | Invitrogen | 11415 | |
| Collagenase | Worthington | 4176 | 1 mg/ml |
| Dispase | Roche | 04942078001 | 5 mg/ml |
| Hank’s balanced salt solution( -Ca,-Mg) | Invitrogen | 14185-052 | |
| DMEM Low glucose | Invitrogen | 11885 | |
| L-Glutamine | Invitrogen | 25030 | 20 mM |
| Insulin/Transferrin/ Selenium | Invitrogen | 51500-056 | 100X |
| Fatty-acid free BSA | Calbiochem | 126609 | |
| NGF | Harlan Bioproducts | 5017 | |
| Ham F-12 nutrient medium (F-12) | Invitrogen | 11765 | |
| Cytosine arabinoside | Sigma | C1768 | |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | Avoid repeated freeze-thaw cycles |
| BMP-7 | R&D Systems Curis, Inc. | 345-BP BMP7-07H | BMPs 4, 5 and 6 work equally as well as BMP-7 and are sometimes easier to obtain commercially |
| Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | |
| Triton X-100 | Fisher | BP151-500 | |
| Mouse anti-rat MAP2 antibody | Sternberg Monoclonals Inc. | SMI52 | 1/5000 |
| Alexa Fluor 546 goat-anti-mouse | Invitrogen | A11003 | 1/10000 |
| Mounting media | Prolong Antifade kit Molecular Probes | P7481 |
Table 1. Materials.
References
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