Kültür sempatik nöronlar bulunan dendritik Büyüme indükleyen

Summary

Bu seçici perinatal sıçan üstün servikal gangliya (SCG) ayrışmış primer sempatik nöronlar, dendritik büyümesini teşvik etmek için kemik morfogenetik protein-7 (BMP-7) veya Matrigel kullanmak için bir protokol açıklanmaktadır.

Abstract

Dendritik çardak şekli bir nöron ^1-3 alabilirsiniz toplam sinaptik girdi belirler ve türleri ve bu girişlere ^4-6 dağılımı etkiler. Dendritik büyüme ve plastisite Altered desen deneysel modellerde ⁷ bozulmuş nörodavranışsal fonksiyonu ile ilişkilidir ve nörogelişimsel bozukluklar ^8-10 ve nörodejeneratif hastalıkların ^11-13 hem de görülen klinik belirtiler katkıda düşünülmektedir. Bu gözlemler kesin dendritik morfoloji düzenleyen fonksiyonel öneminin altını ve dendritik büyümesini kontrol mekanizmalarının belirlenmesi sadece normal gelişimi sırasında nasıl düzenlendiği sinirsel bağlantıda anlayışını ileriye değil, aynı zamanda çeşitli nörolojik hastalıklar için yeni tedavi stratejileri üzerinde fikir verir olabileceğini düşündürmektedir.

Dendritik büyüme Mekanik çalışmalar büyük ölçüde durumu o tarafından kolaylaşırdınöronlar deneysel onlar kendi vivo nüsha ile kıyaslanabilir bir dendritik çardak detaylandırmak hangi birine dendritler uzatmak değil bir devlet değişimi yapılmasına olanak fa modeli sistemi. Perinatal kemirgenler üstün servikal gangliya (SCG) ayrışmış sempatik nöronların primer kültürlerinde böyle bir model oluşturacaktır. Serum ve ganglionik gliyal hücreleri yokluğunda tanımlandığı besiyerine zaman, sempatik nöronlar akson olan tek bir süreç uzanır ve bu durum unipolar kültürü ^14,15 in ay hafta sürer. Bununla birlikte, kültür ortamına ya kemik morfogenetik protein-7 (BMP-7) veya ^16,17 Matrigel ¹⁸ ilavesiyle dendritler için morfolojik, biyokimyasal ve fonksiyonel kriterlerini karşılamak birden çok işlem genişletmek için, bu nöronlar tetikler. Sempatik perinatal kemirgen SCG ayrışmış nöronlar ve tanımlanmış koşullar altında yetiştirilen nöronların ¹⁹ homojen bir nüfus vardırMatrigel, BMP-7 ve decapentaplegic (DPP) ve 60A alt familyaya ^17,18,20,21 diğer BMP ve dendrit terfili aktivite düzgün cevap verdiğini. Önemli olarak, Matrigel-ve BMP indüklenen dendrit oluşumu hayatta hücre büyümesi ya akson ^17,18 değişiklik olmaksızın ortaya çıkar.

Burada, biz onlar Matrigel veya BMP seçici dendrit destekleyici aktivite duyarlı böylece perinatal sıçanların SCG türetilen sempatik nöronların ayrışmış kültürleri nasıl ayarlanacağını açıklar.

Protocol

1. Kültür ortamının hazırlanması (C2 ortamı)

1. Steril, tek kullanımlık 500 ml Erlenmeyer şişesine, listelenen sırada, aşağıdakileri ekleyin: ....

   Miktar	Bileşen	Nihai konsantrasyon
   190 ml	DMEM (düşük glukoz)	N / A
   10 ml	yağ asidi serbest BSA (DMEM 20mg/ml)	50 mcg / ml
   2.8 ml	L-Glutamine	1.4 mM
   4 ml	insülin / transferrin / selenyum (100x)	10 ug / ml insülin 5.5 ug / ml transferrin 38.7 nM selenyum

Discussion

Bu model avantajları şunlardır: (a) kültürler, diğer hücre tipleri ^17,23 yoksun sempatik nöronlar, homojen bir nüfusu oluşur, (b) simpatetik nöronlar büyüme faktörü gereksinimleri kullanımına olanak sağlamaktadır ki, iyi kurulmuş bulunmaktadır tanımlanan orta ve tanımlanan çeşitli medya ve yüzeyler ²³ büyüyen ve sempatik nöronlar sürdürmek için iyi çalışır; (c) Bu kültürlerinde nöronlar Matrigel, BMP-7 ve DPP diğer BMP ve dendrit terfili aktivite düzgün cevap ve 60A ^17,18,20,21 alt famil.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reaktif Adı	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Cam lamelleri	Bellco	1943-10012	12 mm Yuvarlak Coverslip # 1 Kalınlık, Alman cam
Bent ucu pipetleri	Bellco	1273-50003
Poli-D-lizin	Sigma	P0899-100mg	Stok solüsyonu 1 mg / ml
Damıtılmış su	Gibco	15230
Hiçbir Güzel forseps Dumont. 4 ve 5	Güzel Bilim Araçlar (FST)	11252-30 11241-30
20 gauge iğne	Becton Dickinson	305176
Leibovitz L-15 orta	Invitrogen	11415
Kollajenaz	Worthington	4176	1 mg / ml
Dispase	Roche	04942078001	5 mg / ml
Hank'in dengeli tuz çözeltisi (-Ca, Mg-)	Invitrogen	14185-052
DMEM Düşük glukoz	Invitrogen	11885
L-Glutamine	Invitrogen	25030	20 mM
İnsülin / Transferrin / Selenyum	Invitrogen	51500-056	100X
Yağ-asitsiz BSA	Calbiochem	126609
NGF	Harlan Bioproducts	5017
Ham F-12 besleme ortamında (F-12)	Invitrogen	11765
Sitozin arabinozide	Sigma	C1768
Matrigel	BD Biosciences	356234	Tekrarlanan donma-erime döngüleri kaçının
BMP-7	R & D Systems Curis, Inc	345-BP BMP7-07h	BMP 4, 5 ve 6 eşit yanı BMP-7 olarak çalışmak ve ticari olarak elde etmek için bazen kolay
Paraformaldehyde	Sigma	P6148
Triton X-100	Balıkçı	BP151-500
Fare anti-sıçan antikoru map2	Sternberg Monoclonals A.Ş.	SMI52	1/5000
Alexa Fluor 546 keçi-anti-fare	Invitrogen	A11003	1/10000
Montaj medya	Antifade kiti Moleküler Probları Prolong	P7481