Здесь мы демонстрируем наш протокол для выделения базальной и подслизистого железы воздуховодов клетки из мышиных трахеи. Мы также продемонстрировать метод инъекционного стволовых клеток в спинной панели жира мыши, чтобы создать<em> В естественных условиях</em> Модель подслизистого регенерации железы.
Большая дыхательных путей непосредственно в контакте с окружающей средой и, следовательно, подвержены травмам от токсинов и инфекционных агентов, которые мы дышим в 1. Большая дыхательных путей, следовательно, требуют эффективного механизма ремонт защитить наш организм. Этот процесс восстановления происходит из стволовых клеток в дыхательных путях и выделения стволовых клеток из дыхательных путей имеет важное значение для понимания механизмов восстановления и регенерации. Это также важно для понимания ненормального ремонт, который может привести к заболеваниям дыхательных путей 2. Цель этого метода заключается в изоляции роман популяции стволовых клеток из мышей трахеи подслизистого протоки железы и разместить эти клетки в пробирке и в естественных системах модель для определения механизма ремонт и восстановление подслизистых желез 3. Это производство показывает методы, которые могут быть использованы для выделения и анализа канала и базальных стволовых клеток из больших дыхательных путей 3. Это позволит намдля изучения заболеваний дыхательных путей, таких как муковисцидоз, бронхиальная астма и хроническая обструктивная болезнь легких. В настоящее время не существует методов для выделения подслизистых желез канала клетки и нет в естественных моделей для изучения регенерации подслизистых желез.
Этот метод, чтобы изолировать воздуховод и базальных клеток из дыхательных путей имеет важное значение для улучшения нашего понимания ремонт дыхательных путей и регенерацию и заболеваний дыхательных путей. Методы, описанные здесь, включают в себя несколько важных этапов. Во-первых, э?…
The authors have nothing to disclose.
Мы хотели бы отметить широкие Stem Cell Research Center FACS и особенно поблагодарить Джессика Скоулз и Felicia Codrea за помощь сортировки клеток. Работа финансировалась CIRM RN2-00904-1, K08 HL074229, Американского торакального общества / ХОБЛ фонда ATS-06-065, концерн фонда, UCLA Jonsson Comprehensive Cancer Центр торакальной онкологии программы / Рак легких SPORE, Университет Калифорнии рака Исследования Координационного комитета и Гвинн Hazen Cherry Мемориал Laboratories (BG).
Name of the reagent | Company | Catalog number |
Complete medium 10: DMEM-F-12 , 50/50, 1X) |
Mediatech | 15-090-CV |
Hepes (15 mM) | Invitrogen | 15630 |
Sodium bicarbonate (3.6mM or 0.03%) | Invitrogen | 25080 |
L-glutamine (4 mM) | Mediatech | 25-005-Cl |
Penicillin (100 U/ml) | Mediatech | 30-001-CI |
Streptomycin (100 μg/m) | Mediatech | 30-001-CI |
Amphotericin B (0.25 μg/ ml) | Lonza | 17-836R |
Insulin (10 μg/ml) | Sigma | I6634 |
Transferrin (5 μg/ml) | Sigma | T1147 |
Cholera toxin (0.1 μg/ml) | Sigma | C8052 |
Epidermal Growth Factor (25 ng/ml) | BD | 354001 |
Bovine Pituitary Extract (30 μg/ml) | Invitrogen | 13028-014 |
Fetal Bovine Serum (5%) | Fisher | SH3008803HI |
Retinoic acid (0.05 μM) | Sigma | R2625 |
Growth Factor Reduced Matrigel | BD | 354230 |
Table 1. Complete media components.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Pronase | Roche | 10165921001 | Used at 0.15%: -o/n at 4 °C digestion to isolate total tracheal cells (for ALI culture) -4 hr digestion 4 °C to isolate SMG |
Dispase | BD Biosciences | 354235 | Used at 16 Units: 30 min at RT |
DNase I | Sigma | DN25 | Used at 0.5 mg/ml: 20-30 min at RT |
Table 2. Enzymes used for enzymatic digestion of the trachea.