3 차원 Heterotypic<em> 체외에서</em난소 암 개시 및 진행하는 동안 Stromal - 상피 조직의 상호 작용> 모델링
Summary
우리는 구축 방법을 설명<em> 체외에서</em> 난소 섬유 아세포 및 일반 난소의 표면이나 난소 암 상피 세포를 포함하는 heterotypic 입체 모델. 우리는 난소 암 개발하는 동안 발생하는 stromal-상피 상호 작용을 연구하기 위해 이러한 모델의 사용에 대해 설명합니다.
Abstract
상피 난소 암 (EOCs)는 서양 사회에서 부인과 종에서 죽음의 주요 원인입니다. 수술 치료 및 향상된 백금 기반 chemotherapies의 발전에도 불구하고, 이상 40 년의 1,2에 대한 EOC 생존 요금에 약간의 개선이있었습니다. 무대하는 동안 I 종양은 5 년 생존 율이> 85 %, 스테이지 III / IV 질환의 생존 요금은 <40% 있습니다. 종양은 이전보다 치료할 수, 단계 3-5에서 감지 된 경우 따라서, EOC에 대한 사망률의 높은 비율이 크게 감소 될 수 있습니다. 현재 초기 단계의 질병 개발의 분자 유전 및 생물학적으로는 제대로 이해된다. 더 구체적으로, 작은은 종양 개시시 microenvironment의 역할에 대해 잘 알려져 있습니다,하지만 EOCs (예 : 나이와 패리티)에 대한 알려진 위험 요소는 microenvironment이 EOCs의 초기 기원에 중요한 역할을하는 것이 좋습니다. 따라서 입체 heterotypic 모델을 개발정상적인 난소 모두와 초기 단계의 난소 암의. 정상 난소를 들어, 공동 교양 일반 난소 표면 상피 (잃을)와 문화에서 이러한 세포의 수명을 연장하기 위해 인간의 telomerase의 holoenzyme (hTERT)의 촉매 subunit의 retrovrial 도입에 의해 불후의 일반 stromal 섬유 아세포 (INOF) 세포. 난소 상피 세포의 변형, 잃을 셀의 CMYC 종양 유전자의 overexpression, 다시 INOF 세포와 공동 배양의 초기 단계를 모델링합니다. 이 heterotypic 모델은 상피 세포의 변화와 침략에 노화와 노화의 효과를 조사하는 데 사용되었다. 여기 이러한 3 차원 모델의 개발 방법론 단계를 설명 할 수있다;이 방법은 정상 난소와 난소 암 조직의 발전에 해당하지 않습니다, 그리고 stromal 및 상피 세포의 상호 작용이 기본 위치를 다른 조직 유형을 연구하는 데 사용할 수 있습니다 조직 유지 보수 및 디의 측면sease 개발.
Protocol
Discussion
초기 단계의 상피 난소 암 (EOC)의 생물은 제대로 이해된다. 아마도 몇 년 동안이 분야의 주요 장애물 중 하나는 조직의 특정 질병의 기원과 EOC 개발 microenvironment의 역할의 중요성에 대한 이해의 부족이었다. 지난 몇 년 동안, EOC는 아마 다른 하위 유형에 대해 서로 다른 세포의 기원에 여러 별개의 histophathological 하위 유형과 이기종 질병입니다 분명이되었습니다 있습니다. 예를 들어, 현재의 데이?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 의학의 중사 님 학교, 캘리포니아, 미국 대학, 대학 대학 런던, 영국에서 수행되었다. KL는 건강 기금 5 U19 CA148112-02의 국립 연구소에 의해 지원을 받고 있습니다. BG는 이브 어필 부인과 종양학 자선 (UK)에서 프로젝트 교부금으로 운용되었다. UCLH / UCL에서 수행이 작업 중 일부는 부분적으로 건강의 NIHR 바이오 메디컬 연구 센터 자금 제도의학과에서 자금을 대고있었습니다.
Materials
| Reagent | Supplier | Catalogue Number |
| PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
| Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
| Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
| MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
| Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
| Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
| Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
| Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
| pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
| PBS | VWR | 12001-766 |
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
| Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
| Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
| Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
| Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
| TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
| TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.
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