Üç boyutlu heterotipik<em> In Vitro</emYumurtalık Kanseri Başlatma ve İlerleme sırasında Stromal-Epitel Etkileşimleri> Modelleme
Summary
Biz kurulması için metodolojiler tarif<em> In vitro</em> Over fibroblastlar ve normal over yüzey ya da yumurtalık kanseri epitel hücrelerinde oluşan heterotipik üç boyutlu modelleri. Biz over kanseri gelişimi sırasında meydana stromal-epitelyal etkileşimleri çalışmak için bu modellerin kullanımını tartışmak.
Abstract
Epitelyal over kanserleri (EOCs) Batı toplumlarında jinekolojik malignite ölüm önde gelen nedenidir. Cerrahi tedaviler ve geliştirilmiş platin bazlı kemoterapi ilerlemelere rağmen, fazla dört yıl 1,2 için EOC sağkalım oranları çok az bir gelişme olmuştur. Sahnelemeye Iken Ben tümörleri 5-yıllık sağkalım oranları>% 85, evre III / IV hastalığı için sağkalım oranları <% 40 vardır. Tümörler daha erken, daha tedavi edilebilir, aşamaları 3-5 tespit edildi Böylece, EOC için mortalite yüksek sıklığında önemli derecede azalma olabilir. Şu anda, erken evre hastalık gelişimi moleküler genetik ve biyolojik temeli tam anlaşılamamıştır. Daha spesifik olarak, küçük bir tümör başlangıcı sırasında mikroçevresinin rolü hakkında bilinir fakat EOCs (örneğin yaş ve parite) için bilinen risk faktörleri mikroçevresindeki EOCs erken oluşumunda önemli bir rol oynadığını düşündürmektedir. Bu nedenle, üç-boyutlu heterotipik modelleri geliştirilmiştirNormal yumurtalık hem de ve erken evre over kanserlerinin. Normal over için, eş-kültürlü, normal over yüzey epitel (kaybetmek) ve kültür bu hücrelerin ömrünü uzatmak için insan telomeraz holoenzyme (hTERT) ve katalitik alt birimi retrovrial transdüksiyon tarafından ölümsüzleştirdi Normal stromal fibroblast (INOF) hücreleri. Over epitel hücre transformasyonu, kaybetmek hücrelerde CMYC onkogen ekspresyonu, yine INOF hücreleri ile birlikte kültüre en erken aşamalarında modellemek için. Bu heterotipik modeller epitel hücrelerinin dönüşümü ve işgali üzerine yaşlanma ve yaşlanma etkilerini araştırmak için kullanıldı. İşte bu üç boyutlu model geliştirme metodolojik adımları açıklamak; Bu metodolojiler, normal yumurtalık ve yumurtalık kanseri dokuların gelişimi özgü değildir ve stromal ve epitelyal hücre etkileşimleri temel nerede diğer doku türleri incelemek için kullanılan olabilir doku bakım ve di yönüolgunun hastalığı gelişme.
Protocol
Discussion
Erken evre epitelyal over kanseri (EOC) biyolojisi tam anlaşılamamıştır. Belki de uzun yıllar bu alanda başlıca engellerden biri doku spesifik hastalığın kökeni ve EOC geliştirme mikroçevresinin rolünün önemi ve anlayış eksikliği olmuştur. Son birkaç yılda, EOC muhtemelen farklı alt tipi için farklı hücresel kökeni ile birden çok farklı histophathological alttiplere ile heterojen bir hastalık olduğu açıktır haline gelmiştir. Örneğin, mevcut veri yüksek dereceli seröz EOCs fallop t…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu araştırma Tıp Keck School, California, USA Üniversitesi ve University College London, İngiltere yapıldı. KL Sağlık hibe 5 U19 CA148112-02 Ulusal Enstitüsü tarafından finanse edilmektedir. BG Eve Temyiz jinekolojik onkoloji sadaka (İngiltere) bir proje hibe ile finanse edildi. UCLH / UCL'de yürütülen çalışmaların bir kısmı kısmen Sağlık NIHR Biyomedikal Araştırma Merkezi finansman planının Bölümü fon oldu.
Materials
| Reagent | Supplier | Catalogue Number |
| PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
| Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
| Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
| MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
| Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
| Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
| Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
| Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
| pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
| PBS | VWR | 12001-766 |
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
| Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
| Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
| Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
| Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
| TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
| TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.
References
- Jelovac, D., Armstrong, D. K. Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer. CA Cancer J. Clin. , (2011).
- Office for National Statistics. . Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008. , (2011).
- Köbel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications. Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).
- Köbel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies. PLoS Med. 5, e232 (2008).
- Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier. Cancer. 104, 1398-1407 (2005).
- Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR. Nucleic Acids Res. 39, e134 (2011).
- Kim, N. W., Wu, F. Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP. Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).
- Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer. Neoplasia. 12, 317-325 (2010).
- Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells. Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).
- Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers. Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).
- Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer. Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).
- Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC. Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).
- Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology. Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).
- Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers. Neoplasia. 12, 579-589 (2010).
- Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact. J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).
- Kurman, R. J., Shih, I. e. M. Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer–shifting the paradigm. Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).
