एक<em> Vivo में</em> रक्त वाहिका पारगम्यता परीक्षण परख
Summary
हम पेश कर रहे हैं<em> Vivo में</em> रक्त वाहिका पारगम्यता परीक्षण परख. इस परख बीचवाला रिक्त स्थान में अपने प्रसार के डाई और बाद दृश्य की नसों में इंजेक्शन पर आधारित है.
Abstract
इस पद्धति का परीक्षण पशु मॉडल के रूप में चूहों में इवांस ब्लू की नसों में इंजेक्शन पर आधारित है. इवांस नीले एक डाई कि albumin बांधता है. शर्तों के तहत शारीरिक endothelium albumin के लिए अभेद्य है, तो रक्त वाहिकाओं के भीतर प्रतिबंधित इवांस नीले बाध्य albumin बनी हुई है. वैकृत शर्तों है कि बढ़ संवहनी पारगम्यता endothelial कोशिकाओं को बढ़ावा देने में आंशिक रूप से उनके निकट संपर्क खो और endothelium albumin जैसे छोटे प्रोटीन पारगम्य हो जाता है. इस हालत इवांस ब्लू के ऊतकों में परिस्त्राव के लिए अनुमति देता है. एक स्वस्थ पड़ोसी vascularized ऊतकों में endothelium डाई परिस्त्राव रोकता है. बढ़ पारगम्यता के साथ अंग बरकरार endothelium साथ अंगों की तुलना में काफी वृद्धि हुई नीले रंगाई दिखा देंगे. संवहनी पारगम्यता के स्तर साधारण दृश्य या रंग की मात्रात्मक माप प्रयोगात्मक पशु / ऊतक बनाम नियंत्रण के ऊतकों की milligram प्रति शामिल द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है. दो poweइस परख के rful पहलुओं अपनी सादगी और मात्रात्मक विशेषताओं हैं. इवांस ब्लू डाई Formamide में एक ऊतक के विशिष्ट राशि incubating द्वारा ऊतकों से निकाला जा सकता है. इवांस ब्लू absorbance अधिकतम 620 एनएम पर है और absorbance न्यूनतम 740 एनएम है. इवांस ब्लू के लिए एक मानक वक्र का उपयोग करके, ऑप्टिकल घनत्व माप milligram ऊतक के milligram प्रति कब्जा कर लिया डाई में परिवर्तित किया जा सकता है. सांख्यिकीय विश्लेषण संवहनी पारगम्यता में महत्वपूर्ण अंतर का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए.
Introduction
और चयनात्मक पारगम्य बाधाओं का गठन के रखरखाव के उचित अंग विकास और प्रदर्शन 1,2 के लिए आवश्यक हैं. Endothelial कोशिकाओं रक्त वाहिका लुमेन लाइन और अर्द्ध पारगम्य एक बाधा है कि रक्त और सभी अंगों के बीचवाला अंतरिक्ष के बीच परिवहन में चयनात्मक आवश्यक है के रूप में. एक पर्याप्त पारगम्यता बाधा तंग सेल करने वाली सेल जंक्शनों कि कड़ाई से वृद्धि कारकों, साइटोकिन्स और अन्य तनाव संबंधित 3 अणुओं द्वारा नियंत्रित कर रहे हैं के माध्यम से बनाए रखा है. Endothelial सेल बाधा के विघटन बढ़ पारगम्यता और संवहनी रिसाव में परिणाम कर सकते हैं. इन प्रभावों को विभिन्न रोग राज्यों में देखा जाता है और रेखांकित आणविक संकेतन की समझ multidisciplinary तरीकों 4,5 की आवश्यकता है. इस अनुच्छेद में, हम vivo एक माउस मॉडल का उपयोग करने के लिए पोत पारगम्यता माप पद्धति में एक का वर्णन करता है.
हम वर्णन कर रहे हैं, परख भी मीलों परख के रूप में जाना जाता है, एक अच्छी तरह से establ हैvivo में संवहनी पारगम्यता परीक्षण विधि दंडित. परख तथ्य यह है कि बेसल शारीरिक शर्तों के तहत, albumin endothelial बाधा पार नहीं करता है पर आधारित है. इवांस ब्लू, albumin लिए उच्च आत्मीयता के साथ एक azo डाई, एक प्रयोगात्मक जानवर के रक्त प्रवाह में इंजेक्ट किया जाता है, और शर्तों के तहत शारीरिक, यह रक्त वाहिकाओं के भीतर प्रतिबंधित होने की उम्मीद है. संवहनी पारगम्यता प्रोत्साहन जोड़ा जाता है, जब या तो topically या प्रणालीबद्ध, रक्त वाहिकाओं के लिए प्रोटीन का रिसाव शुरू करने और इस प्रकार, यह भी इवांस ब्लू कि albumin करने के लिए बाध्य है. ऊतकों कि पारगम्य वाहिकाओं है की एक तेजी से नीले रंगाई में यह परिणाम है.
माउस पार्श्व पूंछ नस में डाई के इंजेक्शन सफल प्रयोग के अच्छे परिणाम के लिए महत्वपूर्ण है. पूंछ नस इंजेक्शन तकनीक व्यापक अभ्यास की आवश्यकता है और पहले प्रयोग प्रारंभ करने में महारत हासिल किया जाना चाहिए.
पोत पारगम्यता और एक की उम्र और वजन पर अत्यधिक निर्भर हैimal, इसलिए जब अलग माउस उपभेदों की तुलना यह जरूरी है कि चूहों या अन्य परीक्षण विषयों के समान जन्म तिथि और वजन करीब है. अन्य कारकों कि endothelial बाधा की पारगम्यता को प्रभावित तापमान, नमी के रूप में पर्यावरण शर्तों रहे हैं, और बहुत महत्वपूर्ण है, माउस के तनाव से निपटने के. कारक है कि प्रयोग के परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं की भीड़ के कारण यह हमेशा सलाह दी जाती है कि प्रयोग को दोहराया है कम से कम तीन बार और सांख्यिकीय विश्लेषण किया.
इस परख या इस्तेमाल किया जा सकता है और पोत पारगम्यता चूहों कि आनुवंशिक रूप से संशोधित किया गया है, साथ ही विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ चूहों की तुलना. पारगम्यता उपस्थिति या एक प्रोत्साहन के अभाव में मूल्यांकन किया जा सकता है, जीन है कि संग्राहक के समारोह पर निर्भर करता है. इस परख भी या पोत पारगम्यता पर विभिन्न यौगिकों के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
संवहनी पारगम्यता रक्त वाहिनियों की स्थिति के लिए एक महत्वपूर्ण मार्कर है. बढ़ संवहनी पारगम्यता मधुमेह, उच्च रक्तचाप, और autoimmune 6,7,8 रोगों सहित कई प्रणालीगत रोगों में उपस्थित होना दिखाया गया है. बढ़ संव…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों, R01CA142928 से एक अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| REAGENT | |||
| EVANS BLUE | SIGMA | E2129 | |
| FORMAMIDE | INVITROGEN | 15515-026 | |
| PBS | 0.2M Phosphate 1.5M NaCl pH 7.4 |
||
| EQUIPMENT | |||
| SPECTROPHOTOMETER | EPPENDORF | 952000006 | |
| MOUSE RESTRAINT DEVICE | HARVARD APPARATUS | 340012 | |
| SYRINGE | BD | 309659 | |
| NEEDLES | BD | 305106 | The gauge of the needle depends on the size of the animal. |
| BALANCE | DENVER INSTRUMENT | TP-64 |
References
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