면역 요법에 대한 종양 항원로드 성숙 수지상 세포의 준비
Summary
종양 면역 요법에 사용하기 위해자가 수지상 세포의 큰 숫자 (DCS)를 생성하기위한 가장 일반적으로 사용되는 방법을 설명합니다. 방법은 단핵 세포에서 수지상 세포를 분화하는 IL-4, GM-CSF를 사용합니다. 그들은 환자에게 다시 주입하기 전에 미성숙 수지상 세포는 성숙하고 항원과 함께로드를 자극한다.
Abstract
임상 연구는 항원 -로드 DC 백신은 안전하고 종양 1 유망한 치료 것을 설치하는 동안, 그들의 임상 효능은 확립되어야 남아있다. 이 방법은, 좋은 제조 공정 (GMP) 지침에 따라 준비, 아래에 설명 된 임상 연구 2 수지상 세포의 큰 숫자를 생성하기위한 가장 일반적인 전직 생체 제조 방법의 최적화입니다.
우리의 방법은 합성 TLR 3 작용제 수지상 세포를 자극하는 Polyinosinic-Polycytidylic 산성 폴리-L-라이신 카복시 메틸 셀룰로오스를 (폴리 ICLC)를 사용합니다. 우리의 이전 연구는 CD83과 CD86, 인터루킨-12의 유도 (IL-12), 종양 괴사 인자 (TNF), 인터페론 감마 유도의 상향 조절에 의해 평가로 폴리 ICLC 인간 DC에 대한 가장 강력한 개인의 성숙 자극이다 설립 단백질 10 (IP-10), interleukmin 1 (IL-1) 및 유형 I 인터페론 (IFN), 그리고 최소한의 인터루킨 10 (IL-10) 생산. </p>
수지상 세포는 채집 술에 의해 얻어진 림프구가 냉동 말초 혈액 단핵 세포 (말초 혈액)에서 차별화된다. 말초 혈액을 Ficoll 기울기 원심 분리하여 분리 및 분취에 고정되어 있습니다. 1 일에서 말초 혈액을 해동하고 ° C에서 조직 문화 인큐베이터 37 1-2 시간 배양 한 후 플라스틱 표면에 부착 단핵구를 위해 선택하는 조직 문화 플라스크에 도금. 배양 후 림프구는 씻어하고 부착 단핵 세포는 인터루킨-4의 존재 (IL-4)와 미성숙 수지상 세포로 분화하는 과립구 대 식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF) 5 일 동안 배양한다. 6 일에, 미성숙 수지상 세포는 백신의 품질에 대한 관리 역할 및 백신 3의 면역 원성을 높일 수있는 열쇠 구멍 삿갓 조개 헤 모시 아닌 (KLH) 단백질과 펄스 있습니다. 수지상 세포는 성숙 자극 펩티드 항원로드 하룻밤 배양한다. 7 일에 세포를 세척하고 포함 1 ML의 분주에 냉동4 – 제어 속도 냉동고를 사용하여 20 X 10 6 세포. 수지상 세포의 배치를위한 방출 시험이 수행되고 그들이 환자에 주입되기 전에 최소 사양을 충족해야합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
단계 I 및 II는 단핵구 유래 수지상 세포의 임상 시험은 환자 그러나 임상 적 성공은 1 제한되었습니다에 면역 반응을 유도하는 것으로 나타났습니다. 이 종양 immunotherapeutic 사용을위한 최적의 수지상 세포를 생성하는 방법에 대한 합의의 부족으로 인해 부분적으로 할 수 있습니다. 임상 등급 수지상 세포를 생성하는 여러 가지 방법이 있지만,이 방법은 단핵 세포 성숙을 유도하는 데 자극 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 폴리 ICLC의 선물 안드레스 살라을 (Oncovir, 주식 회사) 감사드립니다.
Materials
| Reagent/Supplies/Equipment | Manufacturer | Catalog No. | |
| RPMI-1640 medium with L-glutamine | BioWhittaker | 12-702F | |
| 1M HEPES buffered saline | BioWhittaker | 17-737E | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | BioWhittaker | 17-516F | |
| Human albumin, 25% solution USP | Aventis Behring | ||
| Ficoll-Hypaque PREMIUM | GE Healthcare | 17-5442-03 | |
| Human AB serum | Valley Biomedical | HP1022 | |
| Sterile saline USP | Hospira | ||
| CryoMACS DMSO | Miltenyi Biotec | 170-076-303 | |
| Leukine GM-CSF, 0.5 mg/ml | Berlex | A02266 | |
| MACS GMP IL-4 | Miltenyi Biotec | 170-076-101 | |
| Hiltonol, Poly-ICLC, 2 mg/ml | Oncovir | NA | |
| VACMUNE KLH | Biosyn | ||
| 225 sq cm EasyFlasks | Nalgene Nunc | 159934 | |
| Falcon 6-well tissue culture plates | Becton Dickinson | 353046 | |
| 1.8 ml CryoTube vials | Nalgene Nunc | 377267 | |
| Controlled Rate Freezer | Thermo | CryoMed |
References
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