Intubación endotraqueal en ratones<em> Vía</em> La laringoscopia directa utilizando un otoscopio
Summary
Hemos desarrollado un método simple, fiable, y relativamente barato para la intubación endotraqueal en ratones a través de la laringoscopia directa utilizando un otoscopio con un espéculo 2,0 mm. Esta técnica es atraumática y se puede utilizar para mediciones repetidas en experimentos crónicos. Nos resulta superior a la traqueotomía o previamente informó técnicas no quirúrgicas.
Abstract
Los ratones, tanto de tipo salvaje y transgénicos, son el modelo de mamíferos principal en la investigación biomédica en la actualidad. La intubación y la ventilación mecánica son necesarios para los experimentos con animales enteros que requieren cirugía bajo anestesia profunda o mediciones de la función pulmonar. La traqueotomía ha sido el estándar para la intubación de la vía aérea en estos ratones para permitir la ventilación mecánica. Intubación orotraqueal se ha informado, pero no ha sido utilizado con éxito en muchos estudios debido a la dificultad técnica sustancial o un requisito para un equipo altamente especializado y caro. Aquí mostramos una técnica de laringoscopia directa utilizando un otoscopio equipado con un espéculo 2,0 mm y el uso de un catéter intravenoso 20 G como un tubo endotraqueal. Hemos utilizado esta técnica extensamente y fiable que intubar y llevar a cabo una evaluación precisa de la función pulmonar en los ratones. Esta técnica ha demostrado ser seguro, esencialmente sin pérdida de animales en manos experimentadas. Por otra parte, esta técnicapuede ser utilizado para estudios repetidos de ratones en modelos crónicos.
Introduction
El ratón de laboratorio ha suplantado a prácticamente todas las especies de mamíferos como el modelo principal de la biología y la biopatología. El ratón de laboratorio es la especie de mamífero más pequeño que se ha demostrado de forma clara y extensamente para ser de valor como modelo de enfermedades humanas y ha demostrado ser invaluable en los avances de nuestra comprensión de la biología humana y las enfermedades. El tiempo de gestación corto y sustancialmente menor costo ha permitido el desarrollo y estudio de ratones nulos y transgénicos como una herramienta común en la investigación biomédica. Sin embargo, el tamaño del ratón de laboratorio media (20-25 g) ha limitado su estudio en los estudios basados fisiológicamente o quirúrgicamente y, en consecuencia, algunos investigadores estudian las especies de mamíferos más grandes. Un impedimento para el uso de ratones en estos estudios es la dificultad encontrada con técnicas de intubación que permitan mediciones fisiológicas o procedimientos quirúrgicos extensos bajo anestesia profunda. Traqueotomía 1 se ha utilizado como un estándar TEchnique lugar de intubación debido a la mayor facilidad de realización de esta técnica y habilidad modesta requerido. Sin embargo, la traqueostomía no es propicio para los estudios de cirugía crónicas o de recuperación; Por lo tanto, se limita a experimentos agudos. Traqueotomía también puede ser una variable de confusión en la investigación en las que la inflamación o los reflejos fisiológicos sensibles son importantes.
Nuestro laboratorio ha probado la mayoría de las técnicas descritas por otros investigadores y los encontró inadecuada para una variedad de razones. La traqueotomía es demasiado traumático y provoca sangrado y la inflamación de las vías respiratorias. Mucho más problemático es que no se puede repetir factible. Muchas técnicas relativamente no invasivas que requieren una modesta inversión en equipos no son suficientemente fiables. Otras técnicas requieren equipos costosos que es difícil de justificar, sin saber si el equipo va a trabajar en una aplicación específica. Por lo tanto, tratamos de desarrollar una técnica no traumática que requiere no más tHan una modesta inversión en equipos especializados, podría llevarse a cabo de forma rápida y fiable, se podría repetir en modelos crónicos, y podría ser utilizado en un gran número de animales. Aquí mostramos una técnica de este tipo.
Protocol
Representative Results
Discussion
En este informe se describe una técnica sencilla y fiable para intubar ratones que es no traumática y puede ser utilizado en varias ocasiones en el mismo animal. Esta técnica se puede lograr con un simple laboratorio o equipos médicos que se pueden comprar por una suma modesta. La técnica de la laringoscopia directa, originalmente reportado por Hastings y colegas 4, también se puede utilizar para una variedad de propósitos, pero principalmente para entregar con precisión sustancias de ensayo en el tra…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Una Beca Mérito del Departamento de Asuntos de Veteranos y una subvención T32-HL098062 del NHLBI de los Institutos Nacionales de Salud apoya este trabajo. Queremos reconocer y agradecer el asesoramiento de Randolph H. Hasting, MD, Ph.D. y el asesoramiento y apoyo de la Unidad de Medicina Veterinaria de la VA Healthcare System San Diego.
Materials
| Operating Otoscope Head | Welch Allyn | 21700 | $188.98 |
| Otoscope Handle | Welch Allyn | 71000 | $112.20 |
| Reuseable Speculum | Welch Allyn | 22002 | $ 3.98 |
| Fine Forceps | Miltex | 18-779 | $107.18 |
| Small clamp stand to hold otoscope | |||
| Optional Equipment | |||
| Isoflurane Vaporizer (multiple circuit with vacuum waste gas handling) | Summit Medical | $3,000 | |
| Flexivent (Animal Ventilator) | SCIREQ | $35,000 | |
| Supplies | |||
| Intravenous catheter (20 ga x 1 inch) | BD | 381233 | $ 9.62 |
| Polyethylene tubing (PE10) (0.011 inch I.D., 0.024 inch O.D.) 100 ft | Intramedic, Clay-Adams | 427401 | $115.70 |
| Ketamine 100 mg/ml (10 ml bottle) | Butler | 23061 | $10.00 |
| Xylazine (100 ml bottle) | Vedco | 24105 | $20.00 |
| Isoflurane (250 ml bottle) | $15.00 | ||
| vecuronium bromide 10 mg/10 ml | Pfizer | NDC 0069-0094-01 | $15.00 |
References
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