Luftstrupsintubation i möss<em> Via</em> Direkt laryngoskopi Använda ett otoskop

Summary

Vi har utvecklat en enkel, pålitlig och relativt billig metod för endotrakeal intubation hos möss via direkt laryngoskopi använder ett otoskop med en 2,0 mm spekulum. Denna teknik är atraumatisk och kan användas för upprepade mätningar i kroniska experimenten. Vi tycker att det är bättre att trakeostomi eller tidigare rapporterade icke-kirurgiska tekniker.

Abstract

Möss, både vildtyp och transgena, är den huvudsakliga däggdjursmodellen i den biomedicinska forskningen idag. Intubation och mekanisk ventilation är nödvändig för hela djurförsök som kräver kirurgi under djup anestesi eller mätningar av lungfunktionen. Trakeostomi har varit standard för intuberande luftvägarna i dessa möss för att möjliggöra mekanisk ventilation. Orotracheal intubation har rapporterats men har inte använts framgångsrikt i många studier på grund av den betydande tekniska svårigheter eller krav på högspecialiserad och dyr utrustning. Här rapporterar vi en teknik för direkt laryngoscopy använder en otoskop försedd med en 2,0 mm spekulum och med användning av en 20 G intravenös kateter såsom en endotrakealtub. Vi har använt denna teknik i stor omfattning och tillförlitligt intubera och genomföra korrekta bedömningar av lungfunktionen hos möss. Denna teknik har visat sig vara säker, med i stort sett inget djur förlust i erfarna händer. Dessutom är denna teknikkan användas för upprepade studier av möss i kroniska modellerna.

Introduction

Laboratoriet mus har ersatt nästan alla arter som huvudmodell av biologi och pathobiologyen däggdjur. Laboratoriet mus är den minsta däggdjursarter som har varit tydligt och utförligt visat sig vara av värde som en modell för mänskliga sjukdomar och har visat sig ovärderlig i förskott för vår förståelse för människans biologi och sjukdomar. Den korta dräktighetstiden och betydligt lägre kostnad har möjliggjort utvecklingen och studier av null och transgena möss som ett vanligt verktyg inom biomedicinsk forskning. Däremot har storleken på den genomsnittliga laboratorium mus (20-25 g) begränsat sin studie i fysiologiskt eller kirurgiskt baserade studier och därmed vissa forskare studerar större däggdjursarter. Ett hinder för att använda möss i dessa studier är svårigheten med intubation tekniker som skulle tillåta fysiologiska mätningar eller omfattande kirurgiska ingrepp under djup anestesi. Trakeostomi ¹ har använts som ett standard technique istället för intubering på grund av den större lätthet att utföra denna teknik och blyg färdighet som fordras. Dock är trakeostomi inte bidrar till kroniska eller återhämtnings kirurgi studier; alltså, är det begränsat till akuta experiment. Trakeostomi kan också vara en confounding variabel i forskning där inflammation eller känsliga fysiologiska reflexer är viktiga.

Vårt laboratorium har provat de flesta av de tekniker som beskrivits av andra forskare och fann dem otillräckliga för en mängd olika skäl. Trakeostomi är för traumatisk och inducerar blödning och luftvägsinflammation. Mycket mer problematisk är att den inte kan rimligen upprepas. Många relativt icke-invasiv teknik som kräver en blygsam investering i utrustning inte är tillräckligt tillförlitliga. Andra tekniker kräver dyr utrustning som är svår att motivera utan att veta om utrustningen kommer att fungera i en viss applikation. Således försökte vi utveckla en icke traumatisk teknik som krävs ingen mer tHan en blygsam investering i specialiserad utrustning, kan utföras snabbt och tillförlitligt sätt, skulle kunna upprepas i kroniska modeller, och kan användas i ett stort antal djur. Här rapporterar vi en sådan teknik.

Protocol

1. Djurpreparering Skaffa möss som är äldre än 8 veckor och mer än 20 g (mindre möss kan intuberade av en expert). Anestesi Injicera möss med 20 mg / kg, var och en, av ketamin och xylazin intraperitonealt som en preanesthetic. (Denna dos är tillräcklig för att helt söva musen, men underlättar säker överföring, efter intubation, till mekanisk ventilation.) Kan dock justering av doser vara nödvändiga enligt anestesisvar i samråd med den institutionella veterinär.) <li…

Representative Results

Intubation med ovanstående teknik är pålitlig och snabb. Lämplig placering av endotrakealtub är lättast att konstatera genom att observera expired gas bubblande från den nedsänkta utandnings delen av den av ventilatorkretsen (vanligtvis i ett PIP fälla) och negativa omläggningar på en luftvägstryck spårning (Figur 1). De negativa nedböjningar på luftvägstryck spårning är de mest tillförlitliga. Andra har använt förflyttning av en liten vätskedroppe i intravenösa slangen ansluten t…

Discussion

I denna rapport beskriver vi en enkel, tillförlitlig teknik för att intubate möss som är icke traumatisk och kan användas flera gånger i samma djur. Denna teknik kan åstadkommas med enkla laboratorium eller medicinsk utrustning som kan köpas för en blygsam summa. Tekniken att direkt laryngoscopy ursprungligen rapporterades av Hastings och kollegor ^4, kan också användas för en mängd olika ändamål, men främst för att exakt leverera testämnen till de nedre luftvägarna. Vi har funnit denna tekn…

Materials

Operating Otoscope Head	Welch Allyn	21700	$188.98
Otoscope Handle	Welch Allyn	71000	$112.20
Reuseable Speculum	Welch Allyn	22002	$ 3.98
Fine Forceps	Miltex	18-779	$107.18
Small clamp stand to hold otoscope
Optional Equipment
Isoflurane Vaporizer (multiple circuit with vacuum waste gas handling)	Summit Medical		$3,000
Flexivent (Animal Ventilator)	SCIREQ		$35,000
Supplies
Intravenous catheter (20 ga x 1 inch)	BD	381233	$  9.62
Polyethylene tubing (PE10) (0.011 inch I.D., 0.024 inch O.D.) 100 ft	Intramedic, Clay-Adams	427401	$115.70
Ketamine 100 mg/ml (10 ml bottle)	Butler	23061	$10.00
Xylazine (100 ml bottle)	Vedco	24105	$20.00
Isoflurane (250 ml bottle)			$15.00
vecuronium bromide 10 mg/10 ml	Pfizer	NDC 0069-0094-01	$15.00