이식편 문화 치아 세균의 개발을 다음과 같은 사항에 대해 슬라이스 문화 방법
Summary
여기에 디테일이 조직 헬기를 이용하여 하악 조각 문화 치아 세균에 방법을 우리는. 이 방법은 전통적인 배양 방법을 사용하여 사용 가능한 조작과 혈통 추적하지를위한 절호의 기회를 제공하고, 개발하는 동안 치아에 고유 한 액세스 할 수 있습니다.
Abstract
이식편의 문화는 특정 시점에서 장기를 개발하고 조작 따라서 발달 생물학을위한 중요한 방법입니다 수 있습니다. 많은 기관의 경우는 체외 배양시 모니터링 할 수 있도록 개발 조직에 접근하기가 어렵습니다. 슬라이스 문화 방법은 수 있습니다 조직에 액세스 할 수 있도록 형태 형성의 움직임이 따라 할 수있는 특정 세포 집단이 조작 또는 계보 추적 대상이 될 수있다.
본 논문에서 우리는 종의 범위에서 치아 세균의 문화에 매우 성공적이었다 슬라이스 문화의 방법을 설명합니다. 방법은 다른 턱 조직으로 둘러싸인 생체 내에서 관찰되는 것과 유사한 비율로 개발 치아 세균에 우수한 액세스를 제공한다. 이것은 치아와 주위 조직 사이의 조직 상호 작용을 모니터링 할 수있다. 이 논문은 치아 세균에 집중되지만, 동일한 프로토콜이 수의 개발을 수행하도록 적용될 수있다이러한 침샘, 메켈의 연골, 코 분비, 혀, 귀 등 다른 장기의.
Introduction
실험의 번호는 문화 조직 생체 개발을 따르도록하는 것이 중요합니다. 조직 개발 농경 개발의 정의 기간에 액세스를 제공하고, 배양 배지에 요소를 첨가하여 유전자의 조작, 또는로드 구슬 및 형질 및 일렉트로 하나의 사용에 의해 허용한다. 많은 실험을 위해 그것이 성장함 조직 형태 형성을 겪는다로서 혈통 표지화 된 세포의 운명을 따라, 예를 들어, 조직을 시각화 할 수있는 것이 중요하다. 이 배아에서 조직의 블록을 배양 할 때 분명하지 않은 깊은 배아 내 개발 조직에 특히 문제가 될 수 있습니다. 그들은 하악, 상악과 정면 코 프로세스 내에서 개발로 이빨이 좋은 예입니다. 전체 하악이 배양되면 고정 된 조직으로 구획 한 후, 치아의 표면 구조는 볼 수 있지만, 형태 변화만을 분석 할 수있다 <s업> 2. 우리는 우리가 치아 세균의 개발을 수행 할 수 있도록 개발 중에 치아의 다른 부분에 대한 액세스를 제공하는 라이브 슬라이스 문화 기술을 적용했다. Trowell에서 변성 방법 3을 사용하여 기체 – 액체 계면에서 기술 배양 치아 세균 조각. 이러한 슬라이스 문화를 직접 치아의 형태 형성을 다음과 같은 에나멜 매듭 치과 유두와 여포 1,4-7과 같은 별개의 구성 요소의 혈통 추적을 수있는 매우 유용하고있다. 기술은 마우스 배아에 한정되지 않고 성공적으로 돼지의 배양 라이브 슬라이스 및 뱀 치과 티슈 8,9에 사용되어왔다. 치아 전개를 시각화 할 수 있다는 장점 외에, 슬라이스 방법은 또한 조직의 얇은 조각은 인큐베이터에서 중형 및 공기로부터 영양분에 대한 액세스를 증가 이점을 갖는다. 이것은 생체 내에서 개발을 일치 치아 세균 및 쇼 invas의 개선 된 성장 결과돌기 (7)에 내피 세포의 이온. 반면, 전체 하악 문화 치아 세균 생체 내에서보다 느린 개발하고, 문화의 중심지 장기 문화에 괴사가 많습니다. 슬라이스 문화, 치아는 턱의 조각에서 개발하고 주변 개발 뼈와 다른 조직과의 상호 작용을 모니터링 할 수 있습니다. 우리의 방법으로 조직을 똑바로 지지체 (10, 11)에 포함 할 필요하고 도마에 조직을 연결하는 모든 시스템에 대한 필요와 절개 후 다진된다. 상기 방법은 많은 턱뼈가 한 세션에서 절개 할 수 있도록, 따라서 비 침습적 신속한이다.
Protocol
Representative Results
Discussion
치아 배양이 방법은 치아의 세균에 대한 액세스 장점은 정확한 계보가 상피 세포 또는 중간 엽에서 추적 및 구슬의 배치를 허용, 우수한 있습니다. 개발 치아 세균의 정의 영역은 따라서 구체적으로 타겟팅 할 수 있습니다. 배양 중에 치아 세균의 변화 형태는 다음 될 수 있고, 조작의 효과는 빠르게 평가.
이 정확하게 다진 할 수있는 방법은, 그러나, 이러한 덴틴과 에나멜과 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
사라 A. Alfaqeeh은 치과, 전문대, 교육부, 사우디 아라비아 왕국의 종류 사우드 대학 재정 지원됩니다.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Ethanol | VWR | 101077Y | 100% ethanol was diluted in distilled H2O to 70%. |
| DMEM F12 | Gibco | 12634-010 | Advanced Dulbecco's Modified Eagle Medium F12 |
| GlutaMAX | Gibco | 35050-061 | |
| Invitrogen | |||
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P0781 | |
| DiI (Molecular probes) | Vybrant | V-22885 | Cell-labeling solution |
| Invitrogen | Cell tracker CM-DiI, C-7000 | ||
| DiO (Molecular probes) | Vybrant | V22886 | |
| Invitrogen | |||
| Geminator 500 | Thomas | Thomas No. 3885A20 | Dry-heat sterilization |
| McIlwain tissue chopper | Ted Pella, Inc. | 10180 | Standard table |
| Organ culture dish (Center-Well Organ Culture Dish) | Falcon | 353037 | |
| Membranes (Cell Culture Inserts, 0.4 μm pore size) | BD Falcon | 353090 | PET track-etched membrane, 6-well format |
| Metal grids (Stainless Steel – AISI 304 – Mesh) | Goodfellow | FE228710 | (Fe/Cr18/Ni10) |
| AutoFlow Direct Heat CO2 Incubator | Nuaire | NU-5500 | |
| Picospritzer III | Intracel Ltd | 051-0500-900 0-100 psi | Single channel picospritzer III |
| Glass capillary with filament 1 mm | WPI | TW100F-4 | |
| Tungsten wire 0.1 mm | Goodfellow | W005138 | |
| Tungsten wire 0.38 mm | Goodfellow | W005155 | |
| Aspirator tubes | Sigma | A5177 | Used for mouth aspiration lineage tracers |
References
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