自动分离<em> C。线虫</em>可多段由细菌病原体殖民者
Summary
该wormsorter通过根据荧光记者表达分拣蠕虫有利于遗传筛选在秀丽隐杆线虫 。在这里，我们描述了一个新的使用：根据定植通过GFP表达病原体排序，我们用它来检查病原体识别在启动免疫反应的了解甚少的作用。
Abstract
该wormsorter是一种手段类似于用在秀丽隐杆线虫的研究，在FACS机器，通常进行排序基于荧光报道的表达蠕虫。在这里，我们重点介绍该仪器的另一种用法，根据由GFP表达他们的病原菌定植程度的排序蠕虫。这个新的使用使我们能够解决肠蠕虫和诱导的免疫应答的定植之间的关系。虽然C.线虫的免疫反应，以不同的病原体已被记录在案，仍是一个未知数，什么因素促使他们。两个主要的可能性（这并不相互排斥）是识别病原体相关的分子模式，并检测感染所引起的损伤。要在两个可能性区分，接触到的病原体必须从它所造成的损害进行分离。蠕虫的wormsorter启用分离的进行了广泛定植由革兰氏-Negative致病菌绿脓杆菌 ，有可能是由病原体负荷造成的损害，从蠕虫，亦放置，而不是，或轻微，定植。这些不同的群体被用来评估病原体负载和转录的免疫应答的诱导之间的关系。该结果表明，这两个解离，配套的病原体识别的可能性。
Introduction
蠕虫自动分拣很像流式细胞仪，通过在蠕虫（通常由记者蛋白的转基因表达提供）测量荧光信号，因为它通过拉直在管经营，允许根据重定向到任何一个收集管/孔或废物容器到门的研究员1设置参数。该wormsorter可以在许多方面促进研究，采用它作为分析工具的一个例子是一项研究，随后启动子活性的时空模式对近1000个基因2。
然而，wormsorter的主要用途是在遗传筛选，下列靶基因表达水平或荧光蛋白的沿蜗杆3-5的轴线定位。
在这里，我们描述了wormsorter一个新的应用程序，在由荧光标记的病原体以下蠕虫的殖民化。用此作为一种工具，我们专注于pathog之间的关系恩定植/负载和免疫反应，从而获得新的见解负责的蠕虫启动免疫反应的机制。
几乎在研究迄今所有的生物，先天免疫反应，病原微生物开始依赖于识别病原体相关分子模式（PAMP），和/或危险/损伤相关分子模式（抑）6,7。第一是保守的微生物结构，其包括微生物细胞壁，其鞭毛，或它的脂质双分子层6的部件，第二个，包括释放分子（ 如 ATP 8），改变的蛋白或改变的细胞过程9,10的其他标记。这两种类型的信号被指定为模式识别受体（模式识别受体），其在特定的图案分子的结合激活链导致的保护性反应事件的蛋白C。确认。 线虫一直作为tracta非常有用的BLE模型解剖的宿主 – 病原体相互作用的各个方面，但有一点还不是很清楚的是免疫应答是如何在蠕虫发起的。无推定的受体是同源模式识别受体（的PRRs）在其他生物体中已显示出结合的PAMP，许多的PRR是关键对于在其他生物中的免疫应答的直向同源物的展现给蠕虫病原体响应一个令人惊讶的贡献有限和电阻。例如，在果蝇 Toll受体，它是一种抗革兰氏阳性病原体必不可少的，表示以C由一个唯一同源物，TOL-1，这有助于保护从革兰氏阴性病原体沙门氏菌 11，但不从其他检测革兰氏阴性或阳性病原体11,12。这些观察，结合数据线虫表明免疫应答可以通过破坏细胞蛋白质翻译h内诱导为使一些人认为，C。线虫主要检测DAMPS 9,13,14。然而，描述的死病原体诱导的免疫应答能力的报告表明，PAMP结合可能有病原体识别在C的重要作用线虫 15,16。以前的工作重点是与年龄同步的基因完全相同C.免疫反应线虫种群，由细菌革兰氏阴性致病菌绿脓杆菌表现在肠道定植大的个体差异。
然而，转录谱研究处理这些可变定植人群作为一个实体17,18。利用这种变化，我们开发了一套集中的自动化wormsorter分离暴露在表达GFP的体育秀丽隐杆线虫的差异殖民地人口铜绿假单胞菌 。研究基因表达的不同定植人群FACI病原体负载（和相关联的损伤）和免疫应答和有关C.病原体识别提供了新的见解之间的关系litated评估线虫 19。下面我们介绍的协议，它可以应用到排序感染任何荧光标记的病原虫。
给潜在的用户应当注意的是，需要进行排序的蠕虫数目依赖于随后的分析和协议中使用的性质。例如，在微阵列基因表达分析的情况下，> 1,000蠕虫将需要获得足够的RNA，如果使用标准的协议，但〜100蠕虫就足够了，如果扩增采用，允许快速采集材料，因而应力最小化，以该蠕虫。
Protocol
Representative Results
Discussion
我们所描述的方法利用实体的荧光标记的蜗杆以外，遵循蠕虫和它的环境之间的相互作用。在我们目前的情况下，分离是基于病原体的标记和被雇用，以单独的蠕虫与那些没有（或轻）负荷沉重的病原体负荷。随后的基因表达分析中发现的免疫反应，两组表明它们是独立的病原体负载之间没有差异。启动该响应信号别处被证明在物理上与细菌相关的，而不是被分泌的，这表明这种信号可以是PAMP。…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者感谢埃利森医学基金会的支持。我们还要感谢艾比Dernburg实验室的成员，使用的wormsorter援助。
Materials
| M9 Buffer | Prepared in house | Recipe at wormbook.org |
| Rifampicin | Sigma | R3501 |
| Egg prep solution | Prepared in house | 50ml water ; 40ml bleach ; 10ml of 10N Sodium Hydroxide |
| NGM plates | Prepared in house | Recipe at wormbook.org |
| SKP plates | Prepared in house | Recipe same as NGM only 0.35% peptone instead of 0.25% |
| Control test particles | Union Biometrica | 310-5071-001 |
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