Qui est qui? Méthodes non-invasives pour Individuellement sexe et Mark nidicoles poussins
Summary
Ce protocole fournit un ensemble pratique de méthodes, ce qui permet extrêmement rapide, facile, non invasif, fiable et à faible coût, la détermination du sexe moléculaire des oiseaux et de leur non-invasive, rapide, sécurisé et facilement reconnaissable marquage peu après l'éclosion. Seulement manipulation limitée des poussins est nécessaire. Cette boîte à outils pratique de méthodes est conforme entièrement aux RRR-directives.
Abstract
De nombreuses expériences nécessitent détermination précoce du sexe de la progéniture ainsi que tôt le marquage des nouveau-nés pour la reconnaissance individuelle. Selon les directives de protection des animaux, les techniques non invasives devraient être privilégiées cas échéant. Dans notre groupe, nous travaillons sur différentes espèces d'oiseaux chanteurs dans le laboratoire et sur le terrain, et nous appliquons avec succès des méthodes non invasives pour le sexe et individuellement marquons poussins. Cet article présente une boîte à outil non invasif complet. Sexage des oiseaux avant l'expression de caractères sexuels secondaires nécessite la collecte de matériel ADN portant pour la PCR. Nous avons établi une méthode rapide et facile pour les oiseaux de tout âge (post-éclosion) de sexe par extraction d'ADN à partir d'un frottis buccal. Les résultats peuvent être obtenus dans les 3 heures. Pour les duvet de marquage individuel chiches sont garnis de motifs spécifiques permettant l'identification rapide dans l'ordre d'éclosion. Cet ensemble de méthodes est facilement applicable dans un laboratoire standard équipée et particulièrement adapté pour Working dans le domaine comme aucun équipement spécial n'est requis pour l'échantillonnage et le stockage. Manipulation des poussins est minimisée et le marquage et la détermination du sexe techniques sont non-invasive soutenant ainsi le RRR-principe de directives de protection des animaux.
Introduction
Reconnaissance individuelle, sexage et le génotypage sont des préalables fondamentaux à une série d'études expérimentales. Obtenir du matériel d'appui de l'ADN et le marquage des sujets clairement (même à un âge précoce) devrait avoir un impact minimal sur la physiologie, le comportement et la survie. Chaque fois que possible, des procédures invasives doivent être évitées selon le principe de RRR 1.
Les méthodes non-invasives ne sont pas seulement bénéfique pour l'animal, mais aussi peut améliorer les données obtenues car les animaux sont moins affectés par les traitements.
Chez les oiseaux, l'ADN sexage peut être effectuée sur un certain nombre de matériaux obtenus de façon non invasive les fientes, les plumes 2 3,4 ou frottis buccal 3,5,9. Indépendamment de la condition et de l'âge des écouvillons buccaux de question sont la méthode de choix pour le sexage aviaire, car ils sont faciles à réaliser, peu sûr et la manipulation est courte.
Jusqu'à présent, l'ADN de prélèvements buccauxa été extrait avec de l'une ou l'autre des kits disponibles dans le commerce ou 3,6 chronophages protocoles d'extraction d'ADN standards 3,6-8. Les kits sont non seulement assez cher, mais leurs protocoles peuvent imposer des défis pour le travail de terrain. Certains détails de la procédure, par exemple, le séchage et l'incubation des échantillons, ne sont pas pratiques dans le domaine. Surtout dans un contexte où les protocoles expérimentaux nécessitent un traitement dépendant du sexe à partir dès que quelques minutes après l'éclosion, il est instamment pour une méthode rapide, non invasive, fiable et facile d'obtenir des résultats.
Dans l'ensemble du taxons aviaire une boîte à outils considérable pour les personnes de marquage a été développé 10. Le large éventail des techniques disponibles représente la variété des objectifs de la recherche, des espèces et des budgets. Toutefois, le marquage des petits oisillons a été confrontée à des chercheurs avec des défis supplémentaires. Chez certaines espèces (par exemple les passereaux) poussins sont trop petits pour appliquer des bandes de jambe et nécessitent des méthodes alternatives, quine modifie pas le comportement des parents-enfants. La prise de conscience et l'intérêt dans l'amélioration du bien-être et les techniques dans des études de terrain et de laboratoire animal est de plus en plus, l'utilisation de techniques non invasives est fortement encouragée et préférée.
Ce protocole fournit une méthode non-invasive, rapide, facilement reconnaissable et persistant pour marquer individuellement les très jeunes oisillons avant d'appliquer des bandes de jambe est possible. Cette méthode de marquage est introduit sur l'une des espèces les plus importantes du modèle de laboratoire aviaire, le Finch Zebra (Taeniopygia de guttata) 11-13. Le protocole est conforme à tous les objectifs précédemment publiés pour les techniques de marquage individuels 10 et a déjà été appliquée avec succès 14,15.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sexage de frottis buccal à l'aide de Chelex ont montré un taux de réussite très élevé. Les duvet de nouveau-nés de coupe ont permis la différenciation entre les oisillons jusqu'à ce que la jambe bandes était possible.
Extraction Chelex-ADN à partir d'un frottis buccal a donné suffisamment d'ADN pour réaliser avec succès le sexage moléculaire. La détermination du sexe était de 100% correctes, validé par le plumage dimorphisme sexuel. Le taux rapporté ici de …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Un grand merci à Silke Kipper, Sarah Kiefer, Michael Weiß, Conny Bartsch et Silke Voigt-Heucke pour la collecte de l'échantillon enthousiaste dans le domaine, à Janett Birkenfeld d'une assistance continue, à Ulla Kobalz pour les beaux gels et Tobias Krause pour un soutien moral.
Materials
| Whatman 3MM Chromatography paper | e.g. Fisher Scientific | No.:3030-153 | |
| Chelex 100 Resin | Biorad | #143-2832 | |
| Taq polymerase | addgene | http://www.addgene.org/25712/ | |
| leg band (Flexi number rings for birds, diameter 2,5 mm) | Horst Stengel & Sohn |
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