Chi è Chi? Metodi non invasivi per Sex autonomamente e Mark altricial Chicks
Summary
Questo protocollo fornisce un insieme di metodi conveniente, che consente estremamente veloce, semplice, non invasivo, affidabile ea basso costo, determinazione del sesso molecolare degli uccelli e la loro non-invasivo, rapido, sicuro e facilmente riconoscibile marcatura poco dopo la schiusa. È necessaria solo la gestione limitata dei pulcini. Questo comodo toolbox di metodi del tutto conforme alle RRR linee guida.
Abstract
Molti esperimenti richiedono la determinazione precoce del sesso della prole, così come anticipato marcatura dei neonati per il riconoscimento individuale. Secondo le linee guida sul benessere degli animali, tecniche non invasive dovrebbero essere preferiti quando applicabili. Nel nostro gruppo, lavoriamo su diverse specie di uccelli canori in laboratorio e in campo, e ci applichiamo con successo metodi non invasivi al sesso e individualmente segnalo pulcini. Questo articolo presenta una tool-box non invasivo completo. Sexing uccelli prima della espressione dei tratti sessuali secondari richiede la raccolta di materiale DNA-cuscinetto per la PCR. Abbiamo stabilito un metodo rapido e semplice per gli uccelli di sesso di ogni età (post schiusa) estraendo il DNA dai tamponi buccali. I risultati possono essere ottenuti entro 3 ore. Per piume singolo pulcino marcatura sono rivestiti in modelli specifici che consentono di identificare rapidamente all'interno dell'ordine schiusa. Questo insieme di metodi è facilmente applicabile in un laboratorio standard dotato e particolarmente adatto per working nel campo come attrezzatura speciale è richiesta per il campionamento e memorizzazione. Manipolazione dei pulcini è ridotto al minimo e le tecniche di marcatura e sessaggio sono non-invasive sostenendo così il RRR-principio di linee guida sul benessere degli animali.
Introduction
Riconoscimento individuale, sessaggio e la genotipizzazione sono requisiti fondamentali in una varietà di studi sperimentali. Ottenere DNA materiale del cuscinetto e marcatura soggetti senza ambiguità (anche in tenera età) dovrebbe avere un impatto minimo sulla fisiologia, il comportamento e la sopravvivenza. Quando possibile, procedure invasive dovrebbero essere evitati secondo il principio RRR 1.
Metodi non invasivi non sono solo benefici per l'animale, ma anche potrebbe migliorare i dati ottenuti da animali risentono meno dei trattamenti.
Negli uccelli, sessaggio del DNA può essere eseguita su una serie di materiali ottenibili non invasivo come escrementi 2, piume 3,4 o tamponi buccali 3,5,9. Indipendentemente dalla condizione ed età tamponi buccali del soggetto sono il metodo di scelta per sessaggio aviaria, perché sono facili da eseguire, raramente sicuro e la gestione è breve.
Finora, il DNA da tamponi buccaliera o estratto con kit disponibili in commercio o 3,6 in termini di tempo protocolli di estrazione del DNA standard di 3,6-8. I kit non solo sono piuttosto costosi, ma i loro protocolli possono imporre sfide per il lavoro sul campo. Alcuni dettagli procedurali, ad esempio l'essiccazione e l'incubazione dei campioni, non sono pratici nel campo. Specialmente in un ambiente dove protocolli sperimentali richiedono sesso trattamento dipende da come presto come pochi minuti dopo la schiusa, c'è sollecitare un metodo rapido, non invasivo, affidabile e facile da ottenere risultati.
Dall'altra parte taxa aviaria una notevole toolbox per gli individui di marcatura è stato sviluppato 10. La vasta gamma di tecniche disponibili rappresenta la varietà degli obiettivi della ricerca, delle specie e dei bilanci. Tuttavia, la marcatura piccoli nidiacei ha affrontato ricercatori con ulteriori sfide. In alcune specie (es. passeriformi) pulcini sono troppo piccoli per applicare le bande gambe e richiedono metodi alternativi, chenon alterare il comportamento del genitore-prole. Come la consapevolezza e l'interesse per migliorare il benessere e le tecniche in studi sul campo e di laboratorio sugli animali è in crescita, l'uso di tecniche non invasive è fortemente incoraggiata e preferiva.
Questo protocollo fornisce un metodo rapido, facilmente riconoscibile e persistente non invasivo per contrassegnare individualmente molto giovani nidiacei prima di applicare fasce gamba è fattibile. Questo metodo di marcatura viene introdotto in uno dei più importanti specie aviarie modello di laboratorio, la Zebra Finch (Taeniopygia guttata) 11-13. Il protocollo soddisfa tutti gli obiettivi precedentemente pubblicati per singole tecniche di marcatura 10 ed è stata già applicata con successo 14,15.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sexing da tamponi buccali utilizzando Chelex hanno mostrato un tasso estremamente elevato di successo. Piume di taglio del hatchling abilitati differenziazione tra nidiacei fino gamba banding era possibile.
Estrazione Chelex-DNA dai tamponi buccali ceduto abbastanza DNA per eseguire con successo sessaggio molecolare. Determinazione del sesso è stata del 100% preciso convalidato dal piumaggio dimorfismo sessuale. Il tasso di successo riportato qui è nettamente superiore al tasso riportato d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Molte grazie a Silke Kipper, Sarah Kiefer, Michael Weiss, Conny Bartsch e Silke Voigt-Heucke per la raccolta del campione entusiasta nel campo, per Janett Birkenfeld per l'assistenza continua, a Ulla Kobalz per le belle gel e Tobias Krause per il supporto morale.
Materials
| Whatman 3MM Chromatography paper | e.g. Fisher Scientific | No.:3030-153 | |
| Chelex 100 Resin | Biorad | #143-2832 | |
| Taq polymerase | addgene | http://www.addgene.org/25712/ | |
| leg band (Flexi number rings for birds, diameter 2,5 mm) | Horst Stengel & Sohn |
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