誰が誰ですか？非侵襲的な方法に個別にセックス·アンド·ザ·マーク·晩成性の雛
Summary
このプロトコルは、孵化直後にマーキング極めて迅速、簡単、非侵襲的、信頼性の高い鳥の低コスト、分子性決定とそれらの非侵襲的、迅速、安全かつ容易に認識可能にする方法の便利なセットを提供します。雛の限られた処理が必要となります。メソッドのこの便利なツールボックスは、RRR-ガイドラインに完全に準拠しています。
Abstract
多くの実験は、初期の子孫の性別を決定するだけでなく、初期の個体識別のための新生児のマーキングが必要です。該当するときはいつでも、動物福祉のガイドラインによれば、非侵襲的な技術が優先されるべき。私たちのグループでは、研究室で、現場での曲の鳥の異なる種で動作し、我々が正常なセックスに非侵襲的方法を適用し、個別に雛をマーク。本論文では、総合的な非侵襲的なツールボックスが表示されます。鳥を雌雄鑑別することは前に第二次性徴形質発現をPCRのためのDNA含有物質の収集を必要とします。私たちは、口腔スワブからDNAを抽出することにより、あらゆる年齢（ポスト孵化）の性鳥への迅速かつ簡単な方法を確立した。結果は、3時間以内に得ることができる。のための個々のマーキングひよこのダウン羽が孵化順序内での高速同定を可能にする特定のパターンでトリムされます。メソッドのセットは、標準装備の研究室でも容易に適用され、働いに特に適し特別な機器などの分野でのGはサンプリングと保存のために必要とされている。雛の取扱いを最小限にし、マーキングおよび性判別技術は、非侵襲的、それによって動物福祉ガイドラインのRRR原理を支援しています。
Introduction
個人認識、性判別およびジェノタイピングは、実験的研究の様々な基本的な前提条件である。 DNAの軸受材料を得て、（でも早い年齢で）明確に被写体をマーキング生理、行動、生存への影響を最小限に抑える必要があります。可能な限り、侵襲的処置はRRR原理1によれば避けるべきである。
非侵襲的な方法だけでなく、動物のために有益であるだけでなく、動物が少ない治療法の影響を受けているようにして得られたデータを向上することがあります。
鳥類では、DNAの性判別が糞2、羽毛3,4または口腔スワブ3,5,9などの非侵襲的に得られる材料の数に基づいて行うことができる。彼らは実行が容易であるために関係なく、患者の状態や年齢頬スワブの鳥類の雌雄鑑別のための選択の方法はほとんど失敗しないと取り扱いが短い、、である。
口腔スワブからこれまでのところ、DNAいずれかの市販のキット3,6又は時間3,6-8標準的なDNA抽出プロトコールを消費で抽出した。キットだけでなく、かなり高価ですが、彼らのプロトコルは、フィールドワークのための課題を課すことができる。いくつかの手続きの詳細、 例えば乾燥およびサンプルのインキュベーションは、フィールドには実用的ではない。特に実験プロトコルは、早ければ数分後孵化などからセックス依存の治療を必要とする設定で、結果を得るために、迅速な非侵襲的、信頼性が高く、簡単な方法のために促すとされている。
鳥類の分類群間でマーキング個人のためのかなりのツールボックスは、10を開発してきた。利用可能な技術の広い配列は、研究目的、種や予算のさまざまなを占めています。しかし、小さな雛をマークすると、新たな課題を研究者に直面しています。いくつかの種（ 例えばスズメ目）のヒヨコは、レッグバンドを適用するには小さすぎる、代替方法を必要とする親の子孫の動作を変更しないでください。フィールドと実験室での研究で動物福祉や技術の改善に意識や関心が高まっているように、非侵襲性の技術を使用することを強く奨励して好ましい。
このプロトコルは、個々に、レッグバンドを適用する前に、非常に若い雛をマークするために非侵襲的、迅速かつ容易に認識永続方法を提供することは可能である。このマーキング方法は、最も重要な鳥類の実験室モデルの種の一つ、ゼブラフィンチ（Taeniopygia滴状 ）11月13日に導入されている。プロトコルは、個々のマーキング技術10のための以前に発表され目標のすべてに準拠しており、すでに正常14,15を適用されている。
Protocol
Representative Results
Discussion
キレックスを用いた口腔スワブから雌雄鑑別は非常に高い成功率を示した。脚バンディングが可能になるまで切削雛のダウンの羽毛は、雛の間で差別化を可能にしました。
口腔スワブからのキレックス-DNA抽出に成功し、分子性判別を実行するための十分なDNAが得られた。性的二型羽によって検証としての性決定は正しい100％だった。ここで報告された成功率は2これまで…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
精神的な支援のための美しいジェル用とトビアス·クラウスのウラKobalzを引き続き支援するためJanettビルケンフェルトの分野で熱狂的なサンプル収集のためのジルケキッパー、サラ·キーファー、マイケル·ワイスコニーBartschのとジルケフォークト·Heuckeに感謝、、。
Materials
| Whatman 3MM Chromatography paper | e.g. Fisher Scientific | No.:3030-153 | |
| Chelex 100 Resin | Biorad | #143-2832 | |
| Taq polymerase | addgene | http://www.addgene.org/25712/ | |
| leg band (Flexi number rings for birds, diameter 2,5 mm) | Horst Stengel & Sohn |
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