Apolipoprotein E-불충분 한 쥐에 Mineralocorticoid 수용 체의 활성화를 통해 동맥 경 화성 플 라크의 유도
Summary
우리는 호르몬의 지속적인 출시를 통해 atherogenic 다이어트 먹이 ApoE-/- 쥐의 대동맥 루트에서 동맥 경화를 유발 하는 프로토콜을 설명 합니다. 또한 플 라크 구성 하는 방법은 설명 합니다.
Abstract
동맥 경화 혈관 내 피에 영향을 미치는 만성 염증 반응 때문 이며 고혈압, dyslipidemia, 당뇨병 등 여러 가지 요인에 의해 추진 된다. 날짜 하려면, 심혈 관 질환의 개발에 대 한 위험 요인으로 호르몬 순환에 대 한 역할을 지 원하는 증거를 있다. 유전자 변형 마우스 모델 생성 동맥 경화로 이어지는 세포질과 분자 과정 연구. 이 원고에서 우리 ApoE-/- 생쥐에서 호르몬의 지속적인 주입의 활용 및 치료 4 주 후 대동맥 루트에서 동맥 경 화성 플 라크를 생성 하는 프로토콜을 설명 합니다. 우리는, 따라서, 정량화 및 대동맥 루트 수준에서 동맥 경 화성 병 변의 특성화 하는 방법을 보여 줍니다. 부가 가치 호르몬 주입의 치료 4 주 후 동맥 경 화성 병 변 풍부한 지질과 염증 세포의 생성으로 표시 됩니다. 우리 플 라크 안에서 지질 및 macrophage 콘텐츠 계량 얼룩 절차 자세히 설명. 특히,이 프로토콜에 우리 심장 심장 조직의 antigenicity을 보존 하 고 관심의 항 원의 검출을 용이 하 게 하기 위해 10 월에 조직 포함을 수행 합니다. 플 라크의 표현 형의 분석 동맥 경화 증 개발의 이상 공부 하 고 반대로 atherogenic 약물의 개발에 대 한 새로운 약리 목표를 식별 하는 유효한 접근 방식을 나타냅니다.
Introduction
동맥 경화는 사망률과 질병 률 세계1의 주요 원인 중 하나입니다. 그것은 혈관 혈액 지질과 동맥 경 화성 플 라크의 형성을 결정 하는 백혈구에 의해 침투는 만성 염증 성 상태에 의해 특징입니다. 대부분의 급성 심장 이벤트 패 파열 때문 thrombotic 이벤트와 연결 됩니다. 플 라크 파열 하는 경향이 “취약” 정의 그리고 프로-염증 성 백혈구, 괴 사 성 코어 얇은 섬유 뚜껑2증가 침투에 의해 특징입니다. 마지막 십 년간에서 임상과 실험적인 연구는 질병의 복잡 한 이상 명백 하 게. 여러 동물 모델 롬3의 유도에 관련 된 분자 메커니즘을 조사 하는 데 사용 됩니다. 현재, 마우스는 종의 차이가 인 간에 비해 그 이상에도 불구 하 고 동맥 경화 연구에 가장 자주 사용 되 종. 특히, 콜레스테롤을 순환 주로 구성 되어 고밀도 지 단백질 (antiatherogenic 속성)을 사용 하 여 마우스 모델에서 인간에서 회람 콜레스테롤은 주로 수송 저밀도 지 단백질 (LDL)로 하는 동안 아마 왜 야생-타입 마우스 자연 경화4를 개발 하지 않습니다 주된 이유를 나타내는. 또한, 야생 타입 마우스 인간 규정식 콜레스테롤4의 50% 정도 흡수 하는 반면 일반적으로 저항 다이어트에서 콜레스테롤을 흡수 하는. 이러한 한계를 극복 하기 위해 몇 가지 유전자 변형된 마우스 모델 생성. Apolipoprotein E-결핍 마우스 (ApoE−/−)와 LDL 수용 체-결핍 마우스 (LDLr−/−) 널리 이용 된다. 높은 콜레스테롤 수치, 높은 지방 다이어트, ApoE−/− 마우스 빠르게 LDLr−/−마우스에 비해 더 많은 플 라크를 개발 하 고 이런 이유로, ApoE−/− 마우스의 사용은 LDLr−/−마우스5,6의 보다 더 광범위 한 ApoE−/− 마우스 동맥 경화 증의 어떤 단계에서 장애를 개발 하 고 마우스 패 불안정 형7을 표시 하지 않습니다 있지만 인간에서 관찰을 비교할 수 있습니다. 일반적으로, ApoE−/− 마우스 저절로 아 테 롬을 개발 하 고이 과정 서 부 다이어트3가속. 동맥 경화 증의 심각도의 경 동맥, 폐, 대 퇴 및 brachiocephalic 동맥 및 대동맥 루트6수준에서 평가할 수 있습니다. 특히, 대동맥 루트는 해 부 사이트를 생쥐에서 동맥 경 화성 병 변을 개발 하는 경향이 나타냅니다. 이러한 이유로, 그것은이 지역에서 동맥 경 화성 플 라크의 형성 평가 하 관행 이다.
몇몇 연구는 호르몬 아 테 롬8,,910의 개발에 연루 나타났습니다. ApoE−/− 쥐 먹이 atherogenic 다이어트 호르몬 주입 대동맥 루트 동맥 경 화성 병 변 염증 및 지질 부유한 패 형성10유도의 개발을 가속 화 합니다.
요약, 우리는 호르몬 주입, atherogenic 다이어트 먹이, ApoE-/- 생쥐에서 심장 조직, 정량화 및 동맥 경 화성 병 변의 특성의 포함을 포함 하는 프로토콜을 설명 합니다. 이 절차는 염증, 지질이 풍부한 동맥 경 화성 플 라크의 효율적인 형성을 촉진 하 고 atherogenesis의 연구에 대 한 귀중 한 모델을 나타냅니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
동맥 경화 증 여러 세포 유형, 대 식 세포, T 세포, 내 피 세포 및 평활 근 세포1등 간의 상호 작용을 포함 하는 대형 및 중형 배와 관련 된 만성 염증 성 질환 이다. Murine atherogenic 모델의 한계에도 불구 하 고 동맥 경 화성 프로세스에 대 한 증거의 큰 몸은 사용할 수 있는. 이러한 모델 특정 나이 및 성별 실험 동료를 빠르게 생성의 이점이 있다. 마우스도 정의 하 고 균질 유전 배경?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 이탈리아의 보건 (검색 전류 GR-2009-1594563, 엠씨에 PE-2011-02347070)에서 교부 금에 의해 지원 되었다
Materials
| Adjusted calories diet (42 % from fat) | Envigo | TD.88137 | atherogenic diet |
| Osmotic minipump with filling tube | Alzet | model 1004 | for continous realase |
| Aldosterone | SIGMA | A9477 | hormone |
| Ethanol | SIGMA | 34852-M | solvent |
| Alchol Preps saturated with 70 % Isopropyl Alcohol | Kendal Webcol | 6818 | Disinfectant |
| Surgery wire (Vicryl 6.0) | Demas | 500004 | surgery |
| 10% Povidone/iodine ointment | Aplicare-Meriden | 52380-0026-1 | Antiseptic |
| Formalin 10% | SIGMA | HT5012 | to fix vascolature |
| Cryomold | Bio-Optica | 07-MP1515 | for embedding |
| O.C.T. Compound | Sakura Finetek | 4583 | for embedding |
| Cryostat | Leica | CM1900 | instrument for sectioning |
| Dulbecco's Phosphat Buffered Saline | Aurogene | AU-L0615-500 | buffer solution |
| Adhesion Slides Polysine | VWR | 631-0107 | microscope glasses |
| Cover Glasses | Bio-Optica | 72015 | cover glasses |
| Formaldehyde 37% | SIGMA | 252549 | solvent |
| Oil Red O solution (0.5 % in isopropanol) | SIGMA | O1391 | staining solution |
| Mayer’s Hematoxylin | SIGMA | MHS32 | staining solution |
| Lithium Carbonate | SIGMA | 62470 | washing buffer |
| Acqueous Mounting Medium | Thermo Scientific | TA-125-AM | mounting solution |
| Acetone | SIGMA | 179124 | solvent |
| Phosphomolybdic acid solution | SIGMA | HT153 | for hystology |
| Direct Red 80 (Picrosirius Red) | SIGMA | 365548 | staining solution |
| Bio Clear (clearing agent of terpene origin) | Bio-Optica | 06-1782D | product for the preparation of histological samples |
| Eukitt Quick Hardening mounting medium (Poly(butyl methacrylate-co-methyl methacrylate) | SIGMA | 3989 | mounting solution |
| Sodium Dodecyl Sulfate | Fluka | 71725 | powder |
| Hydrogen Peroxide solution (30 %) | SIGMA | H1009 | solution |
| Vectorstain ABC KIT including: anti-rabbit IgG ABC, normal rabbit serum, Secondary-biotinylated Anti-Rat IgG , | Vector Laboratories | PK-6100 | staining solution |
| 3-amino-9-ethylcarbazole | Vector Laboratories | SK-4200 | staining solution |
| Mac3 antibody | BD Biosciences | 553322 | antibody |
| ImagePro Premier 9 | Media Cybernetics | 050910000-2534 | software to analyze images |
References
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