Assay תחרות צלחת כמו הערכה ראשונית מהירה של דיכוי מחלות
Summary
המוצג הוא פרוטוקול עבור assay תחרות הצלחת לזהות אם קומפוסט ספציפי הוא עשוי להכיל חיידקים ופטריות לדיכוי צמיחה של Rhizoctonia solani.
Abstract
המטרה הייתה לפתח, לייעל את פשוט, זול ויעיל bioassay לזהות מחלה היכולת המדכא של קומפוסט ספציפיים כנגד קטילת פטריות Rhizoctonia solani. Solani ר הוא. חיידק של מגוון רחב של צמחים מארחים ברחבי העולם. הפטרייה שרד בקרקעות כמו saprophyte, גדל במהירות במדיה אגר מים פשוטים. צלחת וזמינותו היא שיטה מהירה כדי להשוות composts ליכולתם להאט את הצמיחה של ר’ solani. וזמינותו מופיע גם עם דיכוי של פתוגנים אחרים פטרייתי קטילת לשרוד כמו saprophytes בקרקעות כגון Alternaria מוקדם פגע רע, Fusarium ווילט, כימשון root רוט Pythium root רוט.
Introduction
Rhizoctonia מייצג את מתחם רחב של פטריות, של אילו Donk הקוקומריס Thanatephorus (פרנק) (anamorph = Rhizoctonia solani Kühn) היא המחלה גורמת root רוט, המתלים-off1. Rhizoctonia solani הוא של פתוגן אגרסיבי, saprophyte שיכולים לשרוד כמו sclerotia תחת בתנאי סביבה קיצוניים1. כתוצאה מכך, יש פיזור גלובלי והוא יכול לגרום למחלה על מגוון רחב של צמחים מארחים כולל סולניים, קטניות, מורכבים מצליבים וכתוצאה מכך רציני הפסדים כלכליים.
קומפוסט יש את היכולת הנמל סוכנים/מוצרים חדשים עבור מסוימים פתוגנים צמח2. עם זאת, לא כל composts דומים ולא משפיעים על כל הפתוגנים באופן דומה3. עץ מבוססי פחמן יש ליגנין גבוה יותר כדי תאית יחסי מאשר חציר או קש-פחמן המבוסס composts. רבי solani מעדיף זמינים פחמן נמצא קש. לעומת זאת, פטריות הדברה ביולוגית, כגון Trichoderma spp., יעילים יותר אם פחמן זמין פחות בקלות. מועיל פטריות וחיידקים לדשן יכול לדכא במחלות צמחים באמצעות תחרות, אנטגוניזם או ויסות גדילה הצמח3. הבדיקה המוצעת מזהה בעיקר אנטגוניזם שנוצרו על-ידי ייצור של אנטיביוטיקה, ecoenzymes או chelators הפוגעים בזכויות הפתוגן.
צמח bioassays הם תקן הזהב כדי לקבוע אם composts טובה או להרתיע גידול הצמח4. עם זאת, צמח bioassays הן זמן רב (שבועות עד חודשים) כדי להשלים את אשר עשוי להיות יותר זמן ממה הרצוי והוא דורש עוד עבודה כדי לחלץ צמחים בעלי שורשים כדי לכמת את החומרה של מערכות השורשים. וזהובה חזקים, אך מהיר יותר (ימים) מבחני יהיה אידיאלי עבור תוכניות בקרת איכות. המטרה של המאמר היא להפגין בדיקה מדויקת ומהירה יחסית כדי לנבא פוטנציאל המדכא של קומפוסט. השיטה הייתה בדוגמת אחרי אלפאנו. et al. 5 עם שתי חריגות, תמציות קומפוסט היו מדולל, אגר מים שימש במקום תפוחי אדמה דקסטרוז אגר (PDA). Solani ר גדל במהירות במדיה אגר מים פשוט ואילו PDA קידום התפתחותם של חיידקים ופטריות אחרים מזוהמים תרבות6.
זה וזמינותו צלחת מגישה כמחוון של דיכוי שחל על מגוון של פתוגנים צמח לשרוד בקרקע כמו saprophytes כולל solani ר7, Alternaria מוקדם פגע רע, Fusarium ווילט, כימשון root רוט Pythium root רוט. הצלחת התחרות וזמינותו שימושי למסך מגוון של מוצרים דשן המכיל קהילות של חיידקים זה לשמש הדברה ביולוגית סוכנים של פתוגנים בקרקע. וזמינותו היה אחד האינדיקטורים הכי עקבי של דיכוי המחלה ב קומפוסט מסחרי-מוצרים-6,–8. המוצרים נבחרו שלהם וריאציה מתכון, בגרות, ואת תהליך הייצור.
Protocol
Representative Results
Discussion
אנחנו יודעים ממחקרים קודמים, כי composts מסוימים יעילים דיכוי solani רבי , כי ההשפעות מדכאים הם עקב חיידקים חיים של קומפוסט, לא את המאפיינים והאביוטיים של קומפוסט6,8. השימוש autoclaving כאמצעי ‘ להרוג ‘ microbiota ביקורת כי זה משפיע הפחמן הכימיה של מדיה10. השוו?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ורמונט החקלאי ניסוי תחנת תחרותי הפתח תוכנית VT-HO1609 מימנה את המחקר. פאנג לין השתמש בשיטת במסגרת עבודת הדוקטורט שלה טרשת נפוצה ב אוניברסיטת ורמונט6.
Materials
| autoclavable narrow-neck glass conical flask | Fisher Scientific | 10-040D | 125-mL |
| dehydrated granulated agar | Fisher Scientific | DF0145-17-0 | 500 g quantity |
| heat resistant gloves | Fisher Scientific | MEMGG1314WL | several brands available |
| Parafilm (strips of 2-3 cm wide) | Fisher Scientific | PM992 13-374-16 | 5 or 10 cm widths work |
| disposable polystyrene petri dishes | Fisher Scientific | R80116 | comes in sleeves of 20/ea or cases of 500 |
| dehydrated potato dextrose agar | Fisher Scientific | DF0013-15-8 | comes in quantities of 100, 500 and 2000 grams |
| benchtop reciprocal shaker | Thomas Scientific | 1227Y31 | other models will work |
| water bath | ThermoScientific | S37363 | 5L general purpose |
| clear ruler, flat, at least 10 cm | Any | use metric rule | |
| ATCC culture | American Type Culture Collection | ATCC 10154 | teleomorph Thanatephorus cucumeris (Frank) (ATCC 10154) or MYA 4031; |
| lab tape | Fisher Scientific | 15935 | autoclavable and removable, 1" wide preferred |
| water resistant marker | office or scientific supply | Sharpie fine tip | write sample number on tape |
References
- Gonzalez Garcia, G., Onco, M. A. P., Susan, V. R. Review. Biology and systematics of the form genus Rhizoctonia. Spanish Journal of Agricultural Research. 4 (1), 55-79 (2006).
- Bonanomi, G., Antignani, V., Pane, C., Scala, E. Suppression of soilborne fungal diseases with organic amendments. Journal of Plant Pathology. 89, 311-324 (2007).
- Noble, R. Risks and benefits of soil amendment with composts in relation to plant pathogens. Australasian Plant Pathology. 40, 157-167 (2011).
- Wichuk, K. M., McCartney, D. Compost stability and maturity evaluation – a literature review. Canadian Journal of Civil Engineering. 37, 1505-1523 (2010).
- Alfano, G., Lustrato, G., Lima, G., Vitullo, D., Ranalli, G. Characterization of composted olive mill wastes to predict potential plant disease suppressiveness. Biological Control. 3, 199-207 (2011).
- Fang, L. . Biological indicators of compost-mediated disease suppression against the soilborne plant pathogen Rhizoctonia solani. , (2015).
- Bonanomi, G., Antignani, V., Capodilupo, M., Scala, F. Identifying the characteristics of organic soil amendments that suppress soilborne plant diseases. Soil Biology and Biochemistry. 42, 136-144 (2010).
- Neher, D. A., Fang, L., Weicht, T. R. Ecoenzymes as indicators of compost to suppress Rhizoctonia solani. Compost Science and Utilization. 25 (4), 251-261 (2017).
- . ATCC® Mycology Culture Guide Available from: https://www.atcc.org/~/media/PDFs/Culture%20Guides/Mycology_Guide.ashx (2018)
- Berns, A. E., Phillip, H., Narres, H. -. D., Burauel, P., Vereecken, H., Tappe, W. Effect of gamma-sterilization and autoclaving on soil organic matter structure as studied by solid state NMR, UV and fluorescence spectroscopy. European Journal of Soil Science. 59, (2008).
