Индукция лекарственно-индуцированного аутоиммунного гепатита у мышей BALB/c для изучения его патогенных механизмов

Dominic Thomas; Ting  Yu Wu; Merylin Cottagiri; Maeva Nyandjo; Dolores B. Njoku

doi:10.3791/59174

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Индукция лекарственно-индуцированного аутоиммунного гепатита у мышей BALB/c для изучения его патогенных механизмов

2.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59174

⸱

29 мая 2020 г.

Dominic Thomas¹ , Ting Yu Wu¹ , Merylin Cottagiri¹ , Maeva Nyandjo¹ , Dolores B. Njoku¹^,²

¹Department of Anesthesiology and Critical Care Medicine, Johns Hopkins University, ²Department of Pediatrics and Pathology, Johns Hopkins University

В этой статье

Краткое содержание

Мы описываем in vivo иммунизацию, трансляционную модель гепатита у мышей BALB / c, которая может быть использована для изучения патогенеза аутоиммунного гепатита, вызванного лекарственными средствами, включая половые различия, наблюдаемые при этом заболевании. Мы опишем, как эта модель демонстрирует воспроизводимый анализ с использованием экспериментальных методов in vivo и in vitro.

Аннотация

Медикаментозный аутоиммунный гепатит (DIH) является наиболее распространенным процессом гиперсенсибилизации печени, вызванным лекарственными средствами, наблюдаемым примерно у 9-12% пациентов с аутоиммунным гепатитом. Подавляющее большинство пациентов с DIH - женщины. Основные механизмы этих половых различий в распространенности неясны из-за нехватки животных моделей, которые имитируют болезни человека. Тем не менее, широко распространено мнение, что основные механизмы связаны с гаплотипами лейкоцитарного антигена человека и половыми гормонами. Напротив, используя модель мыши DIH, мы обнаружили, что IL-4 инициируют CD4 + Т-клетки, направленные против эпитопа цитохрома P450 2E1, индуцирует приток нейтрофилов, макрофагов и тучных клеток в печень самок мышей BALB / c. Используя эту модель, мы также показали, что IL-33-индуцированные FoxP3 + регуляторные Т-клетки обеспечивают защиту от DIH у самок и самцов мышей. Эта модель DIH индуцируется путем иммунизации мышей эпитопом CYP2E1, который был ковалентно изменен метаболитом лекарственного средства, который был связан с DIH. Этот эпитоп распознается пациентами с DIH. Наш метод индуцирует устойчивый и воспроизводимый гепатит и аутоантитела, которые могут быть использованы для изучения патогенеза DIH. В то время как исследования in vivo могут вызывать чрезмерную боль и дистресс у мышей при неправильном выполнении, преимущество модели in vivo заключается в способности оценивать патогенез заболевания у большого числа мышей. Кроме того, биологические эффекты измененных белков печени могут быть изучены с использованием инвазивных процедур. Добавление исследований in vitro к экспериментальной конструкции позволяет быстро повторять и механистически анализировать на клеточном уровне. Таким образом, мы продемонстрируем наш модельный протокол и то, как его можно использовать для изучения механизмов DIH in vivo и in vitro.

Введение

Целью этого метода является описание мышиной модели лекарственно-индуцированного аутоиммунного гепатита, который развивается in vivo, и демонстрация того, как его можно использовать для исследования молекулярной, иммунологической и генетической основы этого заболевания. Долгосрочная цель наших исследований состоит в том, чтобы выявить механизмы, ответственные за развитие хронического воспаления и повреждения печени, путем изучения DIH у восприимчивых пациентов. Заболевания печени и цирроз печени являются шестой наиболее распространенной причиной смерти у взрослых в возрасте от 25 до 64 лет. Идиосинкразический DILI, иногда называемый медикаментозным аутоиммунным гепати....