Использование CRISPR/Cas9 для выбивания GM-CSF в клетках CAR-T

Rosalie  M. Sterner; Michelle  J. Cox; Reona Sakemura; Saad S. Kenderian

doi:10.3791/59629

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Использование CRISPR/Cas9 для выбивания GM-CSF в клетках CAR-T

10.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59629

⸱

22 июля 2019 г.

Rosalie M. Sterner¹^,² , Michelle J. Cox³ , Reona Sakemura³ , Saad S. Kenderian²^,³

¹Mayo Clinic Medical Scientist Training Program, Mayo Clinic College of Medicine and Science, ²Department of Immunology, Mayo Clinic, ³Division of Hematology, Mayo Clinic

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для генетического отсвагивая клетки CAR-T через систему CRISPR/Cas9.

Аннотация

Химерный рецептор антигена T (CAR-T) клеточная терапия является передний край и потенциально революционный новый вариант лечения рака. Тем не менее, существуют значительные ограничения на его широкое применение в лечении рака. Эти ограничения включают в себя развитие уникальных токсичностей, таких как синдром высвобождения цитокинов (CRS) и нейротоксичность (NT) и ограниченное расширение, функции эффектора и противоопухолевую активность в твердых опухолях. Одной из стратегий повышения эффективности CAR-T и/или контроля токсичности клеток CAR-T является редактирование генома самих клеток CAR-T во время производства клеток CAR-T. Здесь мы описываем использование редактирования генов CRISPR/Cas9 в клетках CAR-T с помощью трансдукции с лентивирусной конструкцией, содержащей направляющий РНК к гранулоцитной колонии-стимулирующего фактора (GM-CSF) и Cas9. В качестве примера мы описываем CRISPR/Cas9 при посредничестве GM-CSF. Мы показали, что эти ГМ-CSF^{к / о} CAR-T клетки эффективно производят меньше ГМ-CSF при сохранении критической функции Т-клеток и привести к повышению противоопухолевой активности in vivo по сравнению с дикими клетками типа CAR-T.

Введение

Химерный рецептор антигена T (CAR-T) клеточная терапия демонстрирует большие перспективы в лечении рака. ¹ ^, ² Две CAR-T клеточной терапии ориентации CD19 (CART19) были недавно утверждены в Соединенных Заявленные и в Европе для использования в злокачественных новообразованиях клеток B после демонстрации поразительных результатов в многоцентровых клинических испытаний. ³ ^, ⁴ ^, ⁵ Барьерами для более широкого использования CAR-T-клеток являются ограниченная активность в твердых опухолях и связанных с ними токсичности, вк....