四塩化炭素(CCl4)を介したラットの急性肝損傷を誘発する(CCl4)オロ胃管による暴露
Summary
このプロトコルは、オロ胃管を介してCCl4曝露を介して急性肝傷害(ALI)を誘発する一般的かつ実現可能な方法を記述する。CCl4曝露は、肝臓におけるその生体変換中に活性酸素種の形成を通じてALIを誘導する。この方法は、ALIの病態生理を分析し、異なる肝保護戦略を調べるために使用されます。
Abstract
急性肝障害(ALI)は、肝性脳症やタンパク質合成障害などの合併症を含む重度の肝機能障害を特徴とする肝不全の発症に重要な役割を果たしています。適切な動物モデルは、ALIのメカニズムと病態生理をテストし、異なる肝保護戦略を調査するために不可欠です。化学変換を行う能力により、四塩化炭素(CCl4)は、活性酸素種の形成を通じてALIを誘導するために肝臓で広く使用されています。CCl4露光は、腹腔内、吸入、または経胃または口腔胃管を介して行うことができる。ここでは、アリがオロ胃管を介したCCl4曝露によって誘導されるげっ歯類モデルについて述べている。この方法は安価で、容易に実行され、危険有害性を最小限に抑えます。このモデルは再現性が高く、潜在的な肝保護戦略の有効性を判断し、肝臓損傷のマーカーを評価するために広く使用することができます。
Introduction
肝臓に対する毒性侮辱の頻度は、特にアルコールや薬物乱用によるもので、増加している。急性肝障害(ALI)は高い死亡率に関連しており、臨床的な懸念を引き起こしている1,2。毒性傷害は肝臓の死シグナル伝達経路につながり、肝細胞アポトーシス、壊死、またはピロプトーシスを引き起こします。ALIは肝不全の発症において重要な役割を果たしており、肝性脳症やタンパク質合成障害などの合併症を含む重度の肝機能障害を特徴とする33,4。4最近の研究では、肝不全に伴う生理学的および病理学的変化に関する知識が増えているが、細胞死のメカニズムに影響を与える病的分子の特徴を完全に説明しているわけではない。さらに、ALI患者の進行性悪化を逆転させる薬は現在のところ利用できない。現在、唯一の有意に有効な治療法は、肝臓移植55,66である。
ALIのメカニズムと病態生理を調査し、異なる肝保護戦略をテストするために、異なる動物モデルがALIを誘導するために使用される。ALIの好ましい動物モデルは、信頼性の高い、検証済み、安価で適用しやすい方法を介して疾患の病理学的プロセスを模倣すべきである。実験モデルの例としては、肝毒性剤、全肝切除術などの外科的処置、完全または一過性の脱血管検査、および感染性処置77、8、98,9が含まれる。既知の肝毒性物質は、ガラクトサミン、アセトアミノフェン、チオアセアセタミド、アゾキシメタンおよびCCl4を含む。このうち、CCl4は、10、11、12、13,11,12をまだ十分に特徴づけられていないが広く用いられている13。4
CCl4は、甘い香りと低い温度でほとんど燃焼性のない有機無色液体化合物です。CCl4の高濃度への暴露は、肝臓および腎臓の悪化を含む中枢神経系への損傷を引き起こす可能性がある。CCl4は、活性酸素種を形成する肝臓での生体変換を通じてALIを誘導する。これは、P450シトクローム酵素2E1を介して起こり、活性代謝産物を形成し、高分子結合による細胞損傷をもたらし、脂質過酸化の増強および細胞内カルシウム恒常性14の障害をもたらす。また、CCl4モデル4は、RNA合成15のレベルでアストロサイトを刺激するために使用することができる。この肝毒素は、腹腔内、門内、口腔内、および胃内経路16によって投与されている。
このプロトコルでは、我々は、オロ胃管を介してラットにおけるCCl4誘導ALIについて詳細に説明する。この方法は、ALIの病因を調査するために使用できる堅牢で再現性のあるALIを誘導する。肝疾患の重症度の測定は、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)、グルタミン性オキサロア酢酸トランスアミナーゼ(GOT)酵素および総ビリルビン(TB)ならびにヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色された肝臓組織による決定的な組織学的診断によって監視される。胃内アクセスによるCCl4への暴露は、危険を最小限に抑えた実用的で安価で低侵襲的な方法を可能にする。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコルにおいて、CCl4は、ラットにおいてアリを誘導する肝臓毒素として用いられる。ALIは、肝臓の代謝および合成機能の肝性パレンチマの喪失とその後の調節不整合によって特徴付けられる。薬物、ウイルス、毒素、自己免疫疾患、代謝性疾患、および血管障害はすべて肝細胞死を誘発し、その後の炎症反応はALIの病因に寄与する。
肝臓に対する最初?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、ネゲブのベングリオン大学保健学部ソロカ医療センター病理学部ベルタ・デルガドが、研究室や組織学分析に協力してくれたことを感謝している。
Materials
| 22 G catheter BD Neoflon TM | Becton Dickinson Infusion Therapy AB | ||
| 4% buffered formaldehyde solution | Sigma – Aldrich lab materials technologies | ||
| BD Microtainer SST TM Tubes | Becton Dickinson and Company | ||
| Carbone tetrachloride | Sigma – Aldrich lab materials technologies | CAS 56-23-5 | |
| Isofluran, USP 100% | Piramamal Critical Care, Inc | ||
| Olympus AU2700 Chemistry-Immuno Analyzer | Olympus (MN, USA) | Analysis of blood samples was done by the fluorescence method | |
| Olympus BX 40 microscope | Olympus | ||
| RAT Feeding Needles | ORCHID SCIENTIFICS | ||
| SYRINGE SET 1 and 2 ml MEDI -PLUS | Shandong Zibo Shanchuan Medical Instruments Co., Ltd |
References
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