使用 24 个井组织培养板 （EAgaL 板） 改进 了伊蚊 的丰度和生育率测定
Summary
描述的是一种节省时间和空间的方法，使用24个井组织培养板来计算卵子和确定单个蚊子的孵化率，从而大大提高肥大和生育检测的规模和速度。
Abstract
蚊子作为各种病原体的媒介，是一个严重的公共卫生问题。对于那些需要评估蚊子适应参数的研究，特别是鸡蛋的产生和个别水平的孵化率，由于高劳动强度和实验室空间要求，传统方法给调查人员带来了沉重的负担。描述是一个简单的方法，使用24个井组织培养板与每个井的糖和数字成像每个井，以确定鸡蛋数量和孵化率在个别水平，大大减少了时间和空间的要求。
Introduction
控制蚊子以保护人类免受病媒传播病原体的伤害是一项重要的公共卫生目标，主要是因为缺乏对蚊子携带的大多数病原体的有效疫苗。许多研究旨在减少蚊子的适应与一个领域适用的人口减少策略1，2，3。这包括广泛的研究，以创建转基因蚊子和/或CRISPR/Cas9淘汰赛线。这种人口调整方法需要详细评估个别的健身参数4。评估雌性蚊子健康状况的传统实验室技术包括：在100毫升容器5中单独密封配对、供血喂养的雌性蚊子，修改50毫升圆锥管，或使用湿棉和过滤纸盘（即蛋纸）1、2、6、7进行湿润表面改造的果蝇饲养管。这种方法需要相对较大的空间（例如，30厘米×30厘米x10厘米：W×L x H，最多100个果蝇管）（图1），以及操作单个蛋纸来计算卵子和孵化幼虫，这可能是劳动密集型的。这份手稿提出了一种计算蚊子卵子的方法，并用24个油井板确定孵化率，并作为卵子表面来规避这些问题。
同时，Ioshino等人9 描述了一种使用12个和24个井板进行从女性个体获得的卵子计数的详细方法。他们的协议代表了在节省时间和空间9的传统方法的重大改进。然而，他们描述的协议继续使用湿滤纸作为渗透的表面，这需要展开每个单个纸张来获得计数，因为鸡蛋经常在下面或褶皱中发现。他们的协议也不包括使用成像技术或幼虫计数的方法。
呈现的是一种改进的方法，用于执行卵号（即丰度）和孵化率（即生育率）的健身检测，使用 agarose 作为 24 井组织培养板格式的卵剂表面，用于 Ae. aegypti， 在潮湿表面上渗出。这些板块被命名为”EAgaL”板块，来自 Egg、 阿加玫瑰和 Larva。这24个井板为单个蚊子提供最小的表面产卵，从而简化和大大减少了计算和维持卵子和孵化幼虫几天所需的时间和精力。EAgaL板使用半透明的糖脂作为卵泡表面，无需处理蛋纸，并在孵化时找到卵子和幼虫：拍摄每口井都建立了结果的长期存档记录，并将时间和空间中的计数过程与时间通常有限的饲养/处理过程区分开来。
Protocol
Representative Results
Discussion
与英国《金融时报》的方法相比，EAgaL板块大幅减少了在伊蚊进行个体生育和生育检测的劳动、时间和空间。FT 方法与 EAgaL 板之间的初步比较导致所有步骤的使用时间缩短（成像技术应用于 FT 方法）（表 1）。作为参考，在表 2中提供了启动和每次检测（一个 24 井 EAgaL 板与 24 个 FTs）成本的估计值。
使用 EAgaL 板时需要考虑一些问题。最…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢德克萨斯州农业研究昆虫病媒疾病赠款计划的资金。我们还感谢阿德尔曼实验室成员在起草手稿时帮助开发这种方法和建议，以及凯文·迈尔斯实验室成员。我们还感谢评论者和编辑们的帮助，使他们的手稿更好。
Materials
| 1.6 mm Φ drill bit | alternatively heated nails can be used | ||
| 1000 μL pipette tips (long) | Olympus plastics | 24-165RL | |
| 24-well tissue culture plate | Thermo Scientific | 930186 | clear, flat-bottom with ringed lid plates |
| Agarose | VWR | 0710-500G | |
| Compact digital camera | Olympus | TG-5/TG-6 | |
| Computer (Windows, Mac or Linux) | |||
| Deionized water | |||
| Fiji (imageJ) software | download from: https://fiji.sc/ | ||
| Forceps | Dumont | sharp forceps may break mosquito's body | |
| Glass Petri dishes | VWR | ||
| Household bleach | |||
| Household electric drill | |||
| illuminator for stereomicroscope (gooseneck) | |||
| P-1000 pipette | Gilson | ||
| paint brushes | |||
| Rubber bands | |||
| SD card | to record digital camera images (DSHC, SDXC should be better) | ||
| Spreadsheet software (Microsoft Excel) | Microsoft | Any spreadsheet software works | |
| TetraMin fish food | Tetra | ground with coffee grinder, blender or morter & pestle | |
| Transfer pipetts | VWR | 16011-188 |
References
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