في هذه الدراسة ، تم تطوير نظام تغذية للمراحل الحورية واليرقات من القراد الصلب باستخدام كبسولة تعلق على فأر المختبر. تتكون كبسولة التغذية من مواد مرنة وتظل مربوطة بقوة بالماوس لمدة أسبوع واحد على الأقل وتسمح بمراقبة مريحة لتغذية القراد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج يستند إلى كبسولة لمراحل القراد الثابت غير ناضجة الإصابة على الفئران المختبرية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
القراد هي طفيليات تغذية الدم الإلزامية في جميع مراحل التنمية (باستثناء البيض) ومعترف بها كمواقل لمختلف مسببات الأمراض. إن استخدام نماذج الماوس في أبحاث القراد أمر بالغ الأهمية لفهم بيولوجيتها وتفاعلاتها بين مضيف مسببات الأمراض. هنا نبرهن على تقنية غير شاقة لتغذية المراحل غير الناضجة من القراد الصلب على فئران المختبر. والفائدة من هذه الطريقة هي بساطتها، وقصر مدتها، والقدرة على رصد أو جمع القراد في نقاط زمنية مختلفة من التجربة. بالإضافة إلى ذلك ، تسمح التقنية بتعلق كبسولتين فرديتين على نفس الماوس ، وهو أمر مفيد لمجموعة متنوعة من التجارب حيث يلزم مجموعتين مختلفتين من القراد لإطعام نفس الحيوان. يتم إجراء كبسولة غير مزعجة ومرنة من مواد يمكن الوصول إليها بسهولة ويقلل من عدم الراحة من الحيوانات التجريبية. وعلاوة على ذلك ، القتل الرحيم ليست ضرورية ، والفئران استرداد تماما بعد التجربة ومتاحة لإعادة استخدامها.
المقدمة
القراد هي ناقلات هامة من عدة مسببات الأمراض وتمثل خطرا كبيرا على صحة الحيوان والإنسان1. إن إنشاء نظام فعال للتغذية أمر بالغ الأهمية عند دراسة بيولوجيتها، أو التفاعلات بين مضيفي مسببات الأمراض، أو وضع تدابير فعالة للرقابة. حاليا، العديد من أنظمة التغذية الاصطناعية، والتي تجنب استخدام الحيوانات الحية متوفرة للقراد2،,3،,4 وينبغي أن تستخدم هذه كلما الظروف التجريبية تسمح. ومع ذلك، في بيئات تجريبية مختلفة تفشل هذه الأنظمة في محاكاة السمات الفسيولوجية المحددة بشكل مناسب، واستخدام الحيوانات الحية ضروري لتحقيق النتائج ذات الصلة.
فئرا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يرجى ملاحظة أن هذا البروتوكول لا يمكن تطبيقه إلا عندما يتم استيفاء جميع تدابير الرعاية والسلامة في المختبر. تلقى هذا البروتوكول إذنا لاستخدام الفئران لتغذية القراد من قبل لجنة الأخلاقيات للتجارب الحيوانيةكومو أنسيس /ENVA/UPEC، أرقام تصاريح E 94 046 08. بالنسبة لنقطة النهاية، تعرضت الحيوانات لCO2 لمدة 9 دقائق في مرحلتين من 4 و 5 دقائق لكل واحد.
1. إعداد الكبسولة
- عصا 2 مم سميكة إيفا رغوة لاصقة مزدوجة اللزجة معا(الشكل 1A).
- باستخدام 20 مم قطرها ثقب الجلود لكمة، وقطع دائرة من القطع الرغوة الملتصقة. ثم، وذلك باستخدام لكمة ثقب قطرها 12 ملم، وقطع الداخلية لإنشاء دائرة رغوة مزدوجة (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
نقترح طريقة مفصلة خطوة بخطوة لتغذية مراحل القراد الثابت غير ناضجة في كبسولات إيفا رغوة تطبيقها على ظهر الماوس(الشكل 2). هذا البروتوكول غير الشاق هو مناسبة لأنواع مختلفة من التجارب عندما يتطلب رصد دقيق للقراد وجمع. المزايا الرئيسية لهذا الأسلوب هي بساطته ، ويمكن الوصول إليها بسهولة من حيث التكلفة ، والمواد ، وقصيرة المدة. وبالإضافة إلى ذلك، نجحنا في إرفاق كبسولتين لفرد واحد من الفأرة(الشكل 2K)مما يسمح لنا لتغذية مجموعتين مختلفتين من القراد على نفس الحيوان. استخدا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الخطوة الأكثر أهمية في البروتوكول هو التصاق ثابت من الكبسولة إلى جلد الماوس. لذلك ، يجب تطبيق الغراء اللاتكس بشكل متجانس على سطح رغوة إيفا بأكمله من الكبسولة والضغط المستمر لمدة 3 دقائق ، خاصة إلى الجانب الأيسر والأيمن من الكبسولة. نوصي أيضا وضع الكبسولة إلى الأمام بقدر الإمكان على ظهره لتجنب إزالتها من قبل الماوس باستخدام الكفوف الخلفية. في تجاربنا، تم التحقق من صحة التصاق رغوة إيفا واللخامة لبشرة الماوس فقط، ولا يمكننا ضمان تحقيق نفس النتائج باستخدام مواد مختلفة.
خلال تجاربنا، لم يتم ملاحظة .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
نحن نقدر المساعدة الفنية من معهد آلان بيرنييه الوطني الفرنسي للبحوث الزراعية (INRAE) ، و Océane Le Bidel (ANSES). وقد دعمت الدراسة من قبل خافت واحد الصحة -- Région إيل دو فرانس (اختصار للمشروع : NeuroPaTick). تم شراء الفئران من قبل ANSES. الدكتور جيفري ل. بلير هو من المسلم به لمراجعة النسخة السابقة من المخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| رغوة EVA بسمك 2 مم ، (منخفضة الكثافة) | متجر تأثيري | EVA-45 كجم (950/450/2 مم) | يمكن طلبه أيضا عبر أمازون (المرجع رقم B07BLMJDXD) غلاف |
| التفاف الأسلاك الكهربائية بأنابيب الانكماش الحراري 31 مم / 1.22 بوصة | أمازون | B0848S3S6T | أقطار مختلفة من أنابيب الانكماش الحراري عبر أمازون. |
| الفئران BALB / cByJ | نهر تشارلز | 627 | |
| الفئران C57BL / 6 | نهر تشارلز | 664 | |
| غير سام اللاتكس الغراء | المسيل للدموع | النسيج & لاصق جلدي | متاح أيضا عبر أمازون (المرجع رقم B001RQCTUU) |
| أداة لكمة أداة الفن اليدوية | أمازون | B07QPWNGBF | محذرة من قبل أمازون كأدوات عمل جلدية 1-25 مم قاطع جلدي دائري يعمل لحزام |
| أغطية تجليد PVC شفافة | أمازون | B078BNLSNP | أي ورقة PVC شفافة من القراد بين 0.150 مم إلى 0.180 مم مناسبة |
| وسادة ذاتية اللصق إسفنجة مزدوجة المغلفة الشريط الرغوي | أمازون | B07RHDZ35J | Saled من أمازون ك2 لفات شريط رغوي مزدوج الوجهين ، شريط تثبيت أبيض قوي |
| ملصقات ختم شفافة (دوائر قطرها 20 مم) | أمازون | B01DAA6X66 |
المراجع
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Biology of Ticks. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
