Un modelo basado en cápsulas para la infestación por etapas inmaduras de garrapatas duras en ratones de laboratorio
Summary
En este estudio, se desarrolló un sistema de alimentación para las etapas ninfa y larval de la garrapata dura utilizando una cápsula unida al ratón de laboratorio. La cápsula de alimentación está hecha de materiales flexibles y permanece firmemente unida al ratón durante al menos una semana y permite un monitoreo cómodo de la alimentación de las garrapatas.
Abstract
Las garrapatas son parásitos obligatorios de alimentación sanguínea en todas las etapas del desarrollo (excepto los huevos) y se reconocen como vectores de diversos patógenos. El uso de modelos de ratón en la investigación de garrapatas es fundamental para comprender su biología y las interacciones tick-host-patógeno. Aquí demostramos una técnica no laboriosa para la alimentación de etapas inmaduras de garrapatas duras en ratones de laboratorio. El beneficio del método es su simplicidad, corta duración y la capacidad de monitorear o recoger ticks en diferentes puntos de tiempo de un experimento. Además, la técnica permite la fijación de dos cápsulas individuales en el mismo ratón, lo que es beneficioso para una variedad de experimentos donde se requieren dos grupos diferentes de garrapatas para alimentarse del mismo animal. La cápsula no irritante y flexible está hecha de materiales de fácil acceso y minimiza las molestias de los animales experimentales. Además, la eutanasia no es necesaria, los ratones se recuperan completamente después del experimento y están disponibles para su reutilización.
Introduction
Las garrapatas son vectores importantes de varios patógenos y representan un grave riesgo para la salud animal y humana1. La creación de un sistema de alimentación eficaz es crucial al estudiar su biología, interacciones garrapata-huésped-patógeno, o el establecimiento de medidas de control eficaces. Actualmente, varios sistemas de alimentación artificial, que evitan el uso de animales vivos están disponibles para las garrapatas2,3,4 y estos deben ser utilizados siempre que las condiciones experimentales lo permitan. Sin embargo, en diversos entornos experimentales estos sistemas no imitan adecuadamente las características fisiológicas específicas y el uso de animales vivos es necesario para lograr resultados relevantes.
Los ratones de laboratorio se utilizan comúnmente para el estudio de muchos sistemas biológicos y se utilizan rutinariamente como huéspedes para la alimentación de garrapatas5,6,7,8,9. Los dos métodos más comunes de alimentación de garrapatas inmaduras en ratones incluyen infestaciones libres y el uso de cámaras de confinamiento unidas al ratón. Las infestaciones libres se utilizan principalmente para las etapas larvales y las garrapatas engordadas pueden caer a un área donde se pueden recuperar. Las cámaras de confinamiento generalmente se componen de tapas de acrílico o polipropileno que se pegan a la espalda del ratón. La primera técnica es un sistema natural eficaz para la alimentación de garrapatas, pero no permite un seguimiento estrecho durante el experimento porque las garrapatas individuales se dispersan en diferentes partes del cuerpo huésped. Además, las garrapatas engordadas que caen a un área de recuperación pueden contaminarse con heces y orina10,11,12,13,14 que pueden afectar gravemente a la aptitud de la garrapata o pueden ser dañadas o consumidas por el ratón si no hay separación entre el animal y la zona de recuperación15. Los sistemas basados en la cámara permiten el confinamiento de garrapatas a un área definida, sin embargo, el proceso de encolado es laborioso y las tapas son a menudo débilmente adherentes al pegamento y por lo tanto a menudo se separan durante el experimento16,17,18,19. Las tapas también son rígidas, incómodas y conducen a reacciones cutáneas, que impiden la reutilización de los ratones y requieren su eutanasia después del experimento.
En nuestro estudio anterior, desarrollamos con éxito un sistema eficaz utilizando cámaras hechas de espuma de acetato de etileno-vinilo (EVA) para alimentar garrapatas en conejos de laboratorio20. Aquí, adaptamos este sistema a un modelo de ratón y proponemos un método simple y limpio para alimentar etapas inmaduras de garrapata dura en cápsulas cerradas hechas de espuma de EVA. Específicamente, nuestro sistema utiliza cápsulas elásticas de espuma eva pegadas a los ratones afeitados con secado rápido (3 min), pegamento de látex no irritante. Esta técnica permite la fijación firme y duradera de cápsulas al ratón experimental, así como la infestación/colección efectiva de garrapatas durante todo el curso del experimento. La cápsula plana está hecha de materiales flexibles y no impide la manipulación del ratón para la recolección de sangre u otros fines. El sistema es adecuado principalmente para las etapas de la garrapata ninfa, pero con una ligera modificación se puede utilizar para alimentar larvas también. El método puede ser completado por una sola persona experimentada y no se requiere una amplia formación.
Protocol
Representative Results
Discussion
El paso más crítico en el protocolo es el encolado firme de la cápsula a la piel del ratón. Por lo tanto, el pegamento de látex debe aplicarse homogéneamente a toda la superficie de espuma de EVA de la cápsula y se debe aplicar presión constante durante 3 minutos, especialmente en el lado izquierdo y derecho de la cápsula. También recomendamos la colocación de la cápsula tan lejos hacia adelante en la parte posterior como sea posible para evitar su eliminación por el ratón utilizando sus patas traseras. En …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Reconocemos la asistencia técnica de Alain Bernier Instituto Nacional francés de Investigación Agrícola (INRAE), y Océane Le Bidel (ANSES). El estudio fue apoyado por el DIM One Health – Région éle-de-France (Acrónimo del proyecto: NeuroPaTick). Los ratones fueron comprados por ANSES. El Dr. Jeffrey L. Blair es reconocido por revisar la versión anterior del manuscrito.
Materials
| EVA-foam 2 mm thick, (low density) | Cosplay Shop | EVA-45kg (950/450/2 mm) | It can be ordered also via Amazon (ref. no. B07BLMJDXD) |
| Heat Shrink Tubing Electric Wire Wrap Sleeve | Amazon | B014GMT1AM | Different diameters of Heat Shrink Tubing are available via Amazon. |
| Mice BALB/cByJ | Charles River | Strain code 627 | |
| Mice C57BL/6 | Charles River | Strain code 664 | |
| No-toxic Latex Glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | Also available also via Amazon (ref. no. B001RQCTUU) |
| Punch Tool Hand Art Tool | Amazon | B07QPWNGBF | Saled by amazon as Leather Working Tools 1-25mm Round Steel Leather Craft Cutter Working for Belt Strap |
| PVC Binding Covers Transparent | Amazon | B078BNLSNP | Any transparent PVC sheet of ticknes between 0.150 mm to 0.180 mm is suitable |
| Self Adhesive Pad Sponge Double Coated Foam Tape | Amazon | B07RHDZ35J | Saled by amazon as 2 Rolls Double Sided Foam Tape, Super Strong White Mounting Tape Foam |
| Transparent seal stickers (20 mm diameter circles) | Amazon | B01DAA6X66 |
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