실험실 마우스에 미숙한 하드 진드기 단계 감염에 대 한 캡슐 기반 모델
Summary
이 연구에서는 실험실 마우스에 부착된 캡슐을 사용하여 하드 틱의 님프및 애벌레 단계를 위한 먹이 시스템이 개발되었습니다. 수유 캡슐은 유연한 재료로 만들어졌으며 적어도 일주일 동안 마우스에 단단히 부착되어 있어 진드기 공급에 대한 편안한 모니터링을 가능하게 합니다.
Abstract
진드기는 발달의 모든 단계에서 의무적인 혈액 공급 기생충 (계란 제외) 및 각종 병원체의 벡터로 인식됩니다. 진드기 연구에서 마우스 모델의 사용은 그들의 생물학 및 진드기 호스트 병원체 상호 작용을 이해하기 위해 중요합니다. 여기서 우리는 실험실 마우스에 단단한 진드기의 미숙한 단계의 공급에 대한 비 힘든 기술을 보여줍니다. 이 방법의 장점은 단순성, 짧은 기간 및 실험의 다른 시점에서 진드기를 모니터링하거나 수집하는 기능입니다. 또한, 이 기술은 동일한 마우스에 두 개의 개별 캡슐을 부착할 수 있으며, 이는 두 개의 서로 다른 진드기 그룹이 동일한 동물에게 먹이를 주도록 요구되는 다양한 실험에 유익합니다. 자극적이지 않고 유연한 캡슐은 쉽게 접근할 수 있는 재료로 만들어졌으며 실험 동물의 불편함을 최소화합니다. 더욱이, 안락사는 필요하지 않으며, 마우스는 실험 후에 완전히 회복되고 재사용이 가능합니다.
Introduction
진드기는 몇몇 병원체의 중요한 벡터이고 동물과 인간 건강에 심각한 리스크를 나타냅니다1. 효과적인 공급 시스템을 설정하는 것은 생물학, 진드기 숙주 병원체 상호 작용을 연구하거나 효과적인 통제 조치를 수립할 때 중요합니다. 현재, 살아있는 동물의 사용을 피하는 몇몇 인공 공급 시스템은 진드기2,,3,,4에 유효하며 실험 조건이 허용할 때마다 활용되어야 합니다. 그러나, 다양한 실험 환경에서 이러한 시스템은 특정 생리적 특징을 적절히 모방하지 못하며 살아있는 동물의 사용은 관련 결과를 얻기 위해 필요하다.
실험실 마우스는 일반적으로 많은 생물학적 시스템의 연구에 사용되며 정기적으로 진드기 를 공급하기위한 호스트로활용5,,6,,7,,8,,9. 마우스에 미숙한 진드기를 공급하는 두 가지 가장 일반적인 방법은 무료 감염과 마우스에 부착 된 감금 챔버의 사용을 포함한다. 무료 감염은 주로 애벌레 단계에 사용되며, engorged 진드기는 복구 할 수있는 영역으로 떨어질 수 있습니다. 감금 챔버는 일반적으로 마우스의 뒷면에 붙어 아크릴 또는 폴리 프로필렌 캡으로 구성되어 있습니다. 첫 번째 기술은 진드기 공급에 효과적인 자연 시스템이지만 개별 진드기가 숙주 신체의 다른 부분에 분산되기 때문에 실험 중에 면밀한 모니터링을 허용하지 않습니다. 또한, 회복부위에 떨어뜨리는 진드기는 대변과,,소변(10,11,12,,13,,14)으로 오염되어 진드기의 체력에 심각한 영향을 미칠 수 있거나 동물과 회복영역(15)의 분리가 없는 경우 마우스에 의해 손상되거나 먹을 수 있다.15 챔버 기반 시스템은 정의된 영역에 진드기의 감금을 허용하지만, 접착제 공정은 힘들고 캡은 종종 접착제를 약하게 부착하여 실험16,,17,,18,,19동안 종종 분리된다. 캡은 또한 뻣뻣하고 불편하며 피부 반응으로 이어지므로 마우스의 재사용을 방지하고 실험 후 안락사를 필요로합니다.
이전 연구에서는 실험실 토끼20에진드기를 먹이기 위한 에틸렌 비닐 아세테이트(EVA) 폼으로 만든 챔버를 사용하여 효과적인 시스템을 성공적으로 개발했습니다. 본 원에서, 우리는 마우스 모델에이 시스템을 적응하고 EVA-폼으로 만든 폐쇄 캡슐에 미숙한 하드 틱 단계를 공급하는 간단하고 깨끗한 방법을 제안한다. 특히, 당사시스템은 면도된 마우스에 접착된 탄성 EVA-foam 캡슐을 빠른 건조(3분) 비자극성 라텍스 접착제로 사용합니다. 이 기술은 실험 마우스에 캡슐의 단단하고 오래 지속되는 부착뿐만 아니라 실험의 전체 과정에서 효과적인 진드기 감염 / 수집을 할 수 있습니다. 플랫 캡슐은 유연한 재료로 만들어졌으며 혈액 수집 또는 기타 목적을 위해 마우스조작을 방해하지 않습니다. 이 시스템은 주로 님프 틱 단계에 적합하지만 약간의 수정으로 유충을 먹이는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법은 경험이 풍부한 한 사람이 완료 할 수 있으며 광범위한 교육이 필요하지 않습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
프로토콜에서 가장 중요한 단계는 캡슐을 마우스 피부에 단단히 붙이는 것입니다. 따라서 라텍스 접착제는 캡슐의 전체 EVA-foam 표면에 균질하게 적용되어야 하며 3분 동안 일정한 압력을 가해야 하며, 특히 캡슐의 왼쪽과 오른쪽에 적용되어야 한다. 또한 후면 발을 사용하여 마우스에 의한 제거를 피하기 위해 가능한 한 앞으로 캡슐을 배치하는 것이 좋습니다. 실험에서 EVA 폼과 라텍스 접착제가 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 알랭 버니어 프랑스 국립 농업 연구소 (INRAE) 및 오세안 르 비델 (ANSES)의 기술 지원을 인정합니다. 연구 결과는 DIM One 건강에 의해 지원되었습니다 – 레기온 일 드 프랑스 (프로젝트의 약어: NeuroPaTick). 마우스는 ANSES에 의해 구입하였다. 제프리 엘 블레어 박사는 원고의 이전 버전을 검토한 것으로 인정됩니다.
Materials
| EVA-foam 2 mm thick, (low density) | Cosplay Shop | EVA-45kg (950/450/2 mm) | It can be ordered also via Amazon (ref. no. B07BLMJDXD) |
| Heat Shrink Tubing Electric Wire Wrap Sleeve | Amazon | B014GMT1AM | Different diameters of Heat Shrink Tubing are available via Amazon. |
| Mice BALB/cByJ | Charles River | Strain code 627 | |
| Mice C57BL/6 | Charles River | Strain code 664 | |
| No-toxic Latex Glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | Also available also via Amazon (ref. no. B001RQCTUU) |
| Punch Tool Hand Art Tool | Amazon | B07QPWNGBF | Saled by amazon as Leather Working Tools 1-25mm Round Steel Leather Craft Cutter Working for Belt Strap |
| PVC Binding Covers Transparent | Amazon | B078BNLSNP | Any transparent PVC sheet of ticknes between 0.150 mm to 0.180 mm is suitable |
| Self Adhesive Pad Sponge Double Coated Foam Tape | Amazon | B07RHDZ35J | Saled by amazon as 2 Rolls Double Sided Foam Tape, Super Strong White Mounting Tape Foam |
| Transparent seal stickers (20 mm diameter circles) | Amazon | B01DAA6X66 |
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