JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Neuroscience

Окрашивание, визуализация и анализ грибковых, циркумваллятных и нёбных вкусовых рецепторов

Published: February 11, 2021
doi:
10.3791/62126
,
1Anatomical Sciences and Neurobiology,University of Louisville

Summary

В данной работе описываются методы подготовки тканей, окрашивания и анализа целых грибовидных, циркумваллятных и небных вкусовых рецепторов, которые последовательно дают целые и неповрежденные вкусовые рецепторы (включая нервные волокна, которые их иннервируют) и поддерживают отношения между структурами в вкусовых рецепторах и окружающим сосочком.

Abstract

Вкусовые рецепторы представляют собой наборы вкусовых трансдуцирующих клеток, специализированных для обнаружения подмножеств химических стимулов в ротовой полости. Эти трансдуцирующие клетки общаются с нервными волокнами, которые несут эту информацию в мозг. Поскольку вкусовые клетки непрерывно умирают и заменяются на протяжении всей взрослой жизни, среда вкусовых рецепторов является сложной и динамичной, требуя детального анализа ее типов клеток, их местоположения и любых физических отношений между ними. Подробные анализы были ограничены гетерогенностью и плотностью тканей языка, которые значительно снизили проницаемость антител. Эти препятствия требуют протоколов секционирования, которые приводят к расщеплению вкусовых рецепторов по секциям, так что измерения только аппроксимируются, а клеточные отношения теряются. Чтобы преодолеть эти проблемы, способы, описанные в настоящем описании, включают сбор, визуализацию и анализ целых вкусовых рецепторов и отдельных терминальных беседок из трех вкусовых областей: грибовидных сосочков, циркумваллятных сосочков и неба. Сбор целых вкусовых рецепторов уменьшает смещение и техническую изменчивость и может быть использован для представления абсолютных чисел по таким признакам, как объем вкусовых рецепторов, общая иннервация вкусовых рецепторов, количество трансдукирующих клеток и морфология отдельных терминальных беседок. Чтобы продемонстрировать преимущества этого метода, в данной работе приведены сравнения объемов вкусовых рецепторов и иннервации между грибовидными и циркумваллятными вкусовыми рецепторами с использованием общего маркера вкусовых рецепторов и этикетки для всех вкусовых волокон. Также предусмотрен рабочий процесс для использования разреженно-клеточной генетической маркировки вкусовых нейронов (с мечеными подмножествами вкусопередающих клеток). Этот рабочий процесс анализирует структуры отдельных вкусовых нервных беседок, номера типов клеток и физические отношения между клетками с помощью программного обеспечения для анализа изображений. Вместе эти рабочие процессы обеспечивают новый подход к подготовке тканей и анализу как целых вкусовых рецепторов, так и полной морфологии их иннервирующих беседок.

Introduction

Вкусовые рецепторы представляют собой совокупность 50-100 специализированных эпителиальных клеток, которые связывают подмножества химических вкусовых стимулов, присутствующих в ротовой полости. Обычно считается, что вкусопередающие клетки существуют как типы1,2,3,4,5,6,7,8,9,первоначально основанные на критериях электронной микроскопии, которые позже были коррелированы с молекулярными маркерами. Клетки типа II экспрессируют фосфолипазу C-бета 2 (PLCβ2)2 и транзиторный рецепторный потенциал катионного канала, подсемейства M член 51 и включают клетки, которые трансдуцируют сладкий, горький и умами1,10. Клетки iii типа экспрессируют карбоангидразу 4 (Car4)11 и синаптосомально-ассоциированный белок 258 и обозначают клетки, которые в первую очередь реагируют на кислый вкус11. Клетки, которые передают соленость, не были так четко очерчены12,13,14,но потенциально могут включать клетки типа I, типа II и типа III15,16,17,18,19. Среда вкусовых рецепторов сложна и динамична, учитывая, что вкусопередающие клетки непрерывно переворачиваются на протяжении всего взрослого возраста и заменяются базальными прародителями3,20,21. Эти вкусообразующие клетки соединяются с псевдоуниполярными нервными волокнами из геникулятных и петросальных ганглиев, которые передают вкусовую информацию стволу мозга. Эти нейроны в основном были классифицированы на основе типа информации о вкусе, которую онинесут 22,23, потому что информация об их морфологии была неуловимой донедавнего времени 24. Клетки типа II сообщаются с нервными волокнами через модулятор гомеостаза кальция 1 ионных каналов25,тогда как клетки типа III общаются через классические синапсы8,26. Дальнейшая характеристика клеток вкусовых почек, включая трансдуцирующие линии клеточного типа, факторы, влияющие на их дифференцировку, и структуры соединительных беседок являются областями активного исследования.

Исследования вкусовых рецепторов были затруднены несколькими техническими проблемами. Гетерогенные и плотные ткани, составляющие язык, значительно снижают проницаемость антител для иммуногистохимии27,28,29. Эти препятствия потребовали протоколов секционирования, которые приводят к расщеплению вкусовых рецепторов по секциям, так что измерения либо аппроксимируются на основе репрезентативных секций, либо суммируются по секциям. Ранее репрезентативные тонкие сечения использовались для аппроксимации как объемных значений, так и количества преобразовательных клеток30. Более толстое последовательное сечение позволяет получать изображения всех участков вкусовых рецепторов и суммировать измерения из каждой секции31. Вырезание таких толстых участков и отбор только целых вкусовых рецепторов склоняет выборку в сторону более мелких вкусовых рецепторов32,33,34. Оценки иннервации нервов из секционированных вкусовых рецепторов были основаны на анализе чисел пикселей13,35,если количественно оценить их на всех36,37,38. Эти измерения полностью игнорируют структуру и количество отдельных нервных беседок, потому что беседки расщепляются (и обычно плохо маркируются). Наконец, хотя удаление эпителия позволяет окрашивать целые вкусовые рецепторы39,40,оно также удаляет нервные волокна вкусовых рецепторов и может нарушить нормальные отношения между клетками. Поэтому исследования структурных отношений во вкусовых рецепторах были ограничены из-за этого нарушения, вызванного подходами окрашивания.

Сбор всей структуры устраняет необходимость в репрезентативных секциях и позволяет определять абсолютные значения измерений объемов, количества клеток и морфологий структуры41. Этот подход также повышает точность, ограничивает смещение и уменьшает техническую изменчивость. Этот последний элемент важен, потому что вкусовые рецепторы показывают значительную биологическую изменчивость как в пределах34,42, так и в регионах43,44,а анализы вкусовых рецепторов позволяют сравнивать абсолютные числа клеток между контрольными и экспериментальными условиями. Кроме того, способность собирать неповрежденные вкусовые рецепторы позволяет анализировать физические отношения между различными трансдуцирующими клетками и связанными с ними нервными волокнами. Поскольку вкусопередающие клетки могут общаться друг с другом45 и взаимодействовать с нервными волокнами46,эти отношения важны для нормальной функции. Таким образом, условия потери функции могут быть вызваны не потерей клеток, а изменениями в клеточных отношениях. Здесь представлен метод сбора целых вкусовых рецепторов для достижения преимуществ абсолютных измерений для уточнения объемных анализов как для вкусовых рецепторов, так и для их иннервации, количества и формы вкусовых клеток, а также для облегчения анализа отношений между трансдуцирующими клетками и морфологии нервно-беседки. Два рабочих процесса также представлены после этого нового метода приготовления тканей: 1) для анализа объема вкусовых рецепторов и общей иннервации и 2) для разреженно-клеточной генетической маркировки вкусовых нейронов (с помеченными подмножествами клеток, преобразующих вкус) и последующего анализа морфологии вкусово-нервных деревьев, количества типов вкусовых клеток и их форм, а также использование программного обеспечения для анализа изображений для анализа физических отношений между трансдуцирующими клетками и между трансдукцией. клетки и их нервные беседки. Вместе эти рабочие процессы обеспечивают новый подход к подготовке тканей и анализу целых вкусовых рецепторов и полной морфологии их иннервирующих беседок.

Protocol

ПРИМЕЧАНИЕ: Уход за всеми животными осуществлялся в соответствии с руководящими принципами, установленными Политикой Службы общественного здравоохранения США по гуманному уходу и использованию лабораторных животных и Руководством NIH по уходу за лабораторными животными и их использ?…

Representative Results

Окрашивание лингвального эпителия антителами к dsRed и кератину-8 (общий маркер вкусовых рецепторов) помечено как целыми вкусовыми рецепторами, так и всей иннервацией вкусовых рецепторов у мышей Phox2b-Cre:tdTomato50,51 (рисунок 3A). Визуализация этих в…

Discussion

Разработка подхода к последовательному сбору и окрашиванию целых вкусовых рецепторов из трех вкусовых областей полости рта (грибовидная, циркумвалляция и небо) обеспечивает значительные улучшения для анализа вкусовых клеток, отслеживания вновь включенных клеток, иннервации и отноше…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Мы благодарим Кависку Курупаранантху за ее вклад в окрашивание тканей и визуализацию циркумваллатных вкусовых рецепторов, Дженнифер Сюй за окрашивание и визуализацию иннервации в сосочек, Кайти Хорн за уход за животными и генотипирование и Ликун Ма за окрашивание тканей вкусовых рецепторов мягкого неба. Этот проект был поддержан R21 DC014857 и R01 DC007176 для R.F.K и F31 DC017660 для L.O.

Materials

2,2,2-Tribromoethanol ACROS Organics AC421430100
2-Methylbutane ACROS 126470025
AffiniPure Fab Fragment Donkey Anti-Rabbit IgG Jackson ImmunoResearch 711-007-003 15.5μL/mL
Alexa Fluor® 647 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG Jackson Immuno Research 712-605-150 (1:500)
AutoQuant X3 software  Media Cybernetics
Blunt End Forceps Fine Science Tools  FST 91100-12
Click-iT™ Plus EdU Cell Proliferation Kit Molecular Probes C10637 Follow kit instructions 
Coverglass Marienfeld 107242
Cytokeratin-8 Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB), (RRID: AB_531826)  Troma1 supernatant (1:50, store at 4°C)
Dissection Scissors (coarse) Roboz RS-5619
Dissection Scissors (fine) Moria MC19B
Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 ThermoFisher Scientific A21206 (1:500)
Donkey anti-Rabbit, Alexa Fluor® 555 ThermoFisher Scientific A31572 (1:500)
DyLight™ 405 AffiniPure Fab Fragment Bovine Anti-Goat IgG Jackson Immuno Research 805-477-008 (1:500)
Fluoromount G Southern Biotech 0100-01
Glass slides Fisher Scientific (Superfrost Plus Miscroscope Slides) 12-550-15
Goat anti-Car4 R&D Systems  AF2414 (1:500)
Imaris  Bitplane  pixel-based image analysis software
Neurolucida 360 + Explorer MBF Biosciences 3D vector based image analysis software
Normal Donkey Serum Jackson Immuno Research 017-000-121
Normal Rabbit Serum  Equitech-Bio, Inc SR30
Olympus FV1000 (multi-Argon laser with wavelengths 458, 488, 515 and additional HeNe lasers emitting 543 and 633)
Paraformaldehyde EMD PX0055-3 4% in 0.1M PB
Rabbit anti-dsRed Living Colors DsRed Polyclonal Antibody; Clontech Clontech Laboratories, Inc. (632496) 632496 (1:500)
Rabbit anti-PLCβ2  Santa Cruz Biotechnology Cat# sc-206 (1:500)
Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous Fisher Scientific BP332-500
Sodium Phosphate Monobasic Fisher Scientific BP330-500
tert-Amyl alcohol Aldrich Chemical Company 8.06193
Tissue Molds Electron Microscopy Sciences 70180
Tissue-Tek® O.C.T. Compound Sakura 4583
Triton X-100 BIO-RAD #161-0407
Zenon™ Alexa Fluor™ 555 Rabbit IgG Labeling Kit ThermoFisher Scientific Z25305 Follow kit instructions 
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Clapp, T. R., Medler, K. F., Damak, S., Margolskee, R. F., Kinnamon, S. C. Mouse taste cells with G protein-coupled taste receptors lack voltage-gated calcium channels and SNAP-25. BMC Biology. 4 (1), 7 (2006).
  2. Clapp, T. R., Yang, R., Stoick, C. L., Kinnamon, S. C., Kinnamon, J. C. Morphologic characterization of rat taste receptor cells that express components of the phospholipase C signaling pathway. The Journal of Comparative Neurology. 468 (3), 311-321 (2004).
  3. Delay, R. J., Roper, S. D., Kinnamon, J. C. Ultrastructure of mouse vallate taste buds: II. Cell types and cell lineage. The Journal of Comparative Neurology. 253 (2), 242-252 (1986).
  4. Finger, T. E. Cell types and lineages in taste buds. Chemical Senses. 30, 54-55 (2005).
  5. Kataoka, S., et al. The candidate sour taste receptor, PKD2L1, is expressed by type III taste cells in the mouse. Chemical Senses. 33 (3), 243-254 (2008).
  6. Murray, R. Fine structure of gustatory cells in rabbit taste buds. Journal of Ultrastructure Research. 27 (5-6), 444 (1969).
  7. Murray, R. G., Murray, A. Fine structure of taste buds of rabbit foliate papillae. Journal of Ultrastructure Research. 19 (3), 327-353 (1967).
  8. Yang, R., Crowley, H. H., Rock, M. E., Kinnamon, J. C. Taste cells with synapses in rat circumvallate papillae display SNAP-25-like immunoreactivity. The Journal of Comparative Neurology. 424 (2), 205-215 (2000).
  9. Yee, C. L., Yang, R., Böttger, B., Finger, T. E., Kinnamon, J. C. “Type III” cells of rat taste buds: Immunohistochemical and ultrastructural studies of neuron-specific enolase, protein gene product 9.5, and serotonin. Journal of Comparative Neurology. 440 (1), 97-108 (2001).
  10. Zhang, Y., et al. Coding of sweet, bitter, and umami tastes. Cell. 112 (3), 293-301 (2003).
  11. Chandrashekar, J., et al. The taste of carbonation. Science. 326 (5951), 443-445 (2009).
  12. Oka, Y., Butnaru, M., Von Buchholtz, L., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. High salt recruits aversive taste pathways. Nature. 494 (7438), 472-475 (2013).
  13. Stratford, J. M., Larson, E. D., Yang, R., Salcedo, E., Finger, T. E. 5-HT3A-driven green fluorescent protein delineates gustatory fibers innervating sour-responsive taste cells: A labeled line for sour taste. Journal of Comparative Neurology. 525 (10), 2358-2375 (2017).
  14. Baumer-Harrison, C., et al. Optogenetic stimulation of type I GAD65(+) cells in taste buds activates gustatory neurons and drives appetitive licking behavior in sodium-depleted mice. The Journal of Neuroscience. 40 (41), 7795-7810 (2020).
  15. Nomura, K., Nakanishi, M., Ishidate, F., Iwata, K., Taruno, A. All-electrical Ca(2+)-independent signal transduction mediates attractive sodium taste in taste buds. Neuron. 106 (5), 816-829 (2020).
  16. Ohmoto, M., Jyotaki, M., Foskett, J. K., Matsumoto, I. Sodium-taste cells require Skn-1a for generation and share molecular features with sweet, umami, and bitter taste cells. eneuro. 7 (6), (2020).
  17. Roebber, J. K., Roper, S. D., Chaudhari, N. The role of the anion in salt (NaCl) detection by mouse taste buds. The Journal of Neuroscience. 39 (32), 6224-6232 (2019).
  18. Oka, Y., Butnaru, M., von Buchholtz, L., Ryba, N. J., Zuker, C. S. High salt recruits aversive taste pathways. Nature. 494 (7438), 472-475 (2013).
  19. Lewandowski, B. C., Sukumaran, S. K., Margolskee, R. F., Bachmanov, A. A. Amiloride-insensitive salt taste is mediated by two populations of type III taste cells with distinct transduction mechanisms. The Journal of Neuroscience. 36 (6), 1942-1953 (2016).
  20. Beidler, L. M., Smallman, R. L. Renewal of cells within taste buds. The Journal of Cell Biology. 27 (2), 263-272 (1965).
  21. Hamamichi, R., Asano-Miyoshi, M., Emori, Y. Taste bud contains both short-lived and long-lived cell populations. Neuroscience. 141 (4), 2129-2138 (2006).
  22. Yarmolinsky, D. A., Zuker, C. S., Ryba, N. J. P. Common sense about taste: from mammals to insects. Cell. 139 (2), 234-244 (2009).
  23. Spector, A. C., Travers, S. P. The representation of taste quality in the mammalian nervous system. Behavoiral and Cognitive Neuroscience Reviews. 4 (3), 143-191 (2005).
  24. Huang, T., Ohman, L. C., Clements, A. V., Whiddon, Z. D., Krimm, R. F. Variable branching characteristics of peripheral taste neurons indicates differential convergence. bioRxiv. , (2020).
  25. Taruno, A., et al. CALHM1 ion channel mediates purinergic neurotransmission of sweet, bitter and umami tastes. Nature. 495 (7440), 223-226 (2013).
  26. Kinnamon, J. C., Taylor, B. J., Delay, R. J., Roper, S. D. Ultrastructure of mouse vallate taste buds. I. Taste cells and their associated synapses. The Journal of comparative neurology. 235 (1), 48-60 (1985).
  27. Dando, R., et al. A permeability barrier surrounds taste buds in lingual epithelia. American Journal of Physiology. Cell Physiology. 308 (1), 21-32 (2015).
  28. Mistretta, C. M. Permeability of tongue epithelium and its relation to taste. American Journal of Physiology. 220 (5), 1162-1167 (1971).
  29. Michlig, S., Damak, S., Le Coutre, J. Claudin-based permeability barriers in taste buds. The Journal of Comparative Neurology. 502 (6), 1003-1011 (2007).
  30. Kinnamon, S. C., Finger, T. E. Recent advances in taste transduction and signaling. F1000Research. 8, 2117 (2019).
  31. Meng, L., Huang, T., Sun, C., Hill, D. L., Krimm, R. BDNF is required for taste axon regeneration following unilateral chorda tympani nerve section. Experimental Neurology. 293, 27-42 (2017).
  32. Meng, L., Ohman-Gault, L., Ma, L., Krimm, R. F. Taste bud-derived BDNF is required to maintain normal amounts of innervation to adult taste buds. eneuro. 2 (6), (2015).
  33. Tang, T., Rios-Pilier, J., Krimm, R. Taste bud-derived BDNF maintains innervation of a subset of TrkB-expressing gustatory nerve fibers. Molecular and Cellular Neuroscience. 82, 195-203 (2017).
  34. Zhang, G. H., Zhang, H. Y., Deng, S. P., Qin, Y. M. Regional differences in taste bud distribution and -gustducin expression patterns in the mouse fungiform papilla. Chemical Senses. 33 (4), 357-362 (2008).
  35. Huang, T., Ma, L., Krimm, R. F. Postnatal reduction of BDNF regulates the developmental remodeling of taste bud innervation. Developmental Biology. 405 (2), 225-236 (2015).
  36. Nosrat, I. V., Margolskee, R. F., Nosrat, C. A. Targeted taste cell-specific overexpression of brain-derived neurotrophic factor in adult taste buds elevates phosphorylated TrkB protein levels in taste cells, increases taste bud size, and promotes gustatory innervation. Journal of Biological Chemistry. 287 (20), 16791-16800 (2012).
  37. Liebl, D. J., Mbiene, J. -. P., Parada, L. F. NT4/5 mutant mice have deficiency in gustatory papillae and taste bud formation. Developmental Biology. 213 (2), 378-389 (1999).
  38. Kumari, A., Yokota, Y., Li, L., Bradley, R. M., Mistretta, C. M. Species generalization and differences in Hedgehog pathway regulation of fungiform and circumvallate papilla taste function and somatosensation demonstrated with sonidegib. Scientific Reports. 8 (1), (2018).
  39. Venkatesan, N., Boggs, K., Liu, H. X. Taste bud labeling in whole tongue epithelial sheet in adult mice. Tissue Engineering. Part C, Methods. 22 (4), 332-337 (2016).
  40. Meisel, C. T., Pagella, P., Porcheri, C., Mitsiadis, T. A. Three-dimensional imaging and gene expression analysis upon enzymatic isolation of the tongue epithelium. Frontiers in Physiology. 11, 825 (2020).
  41. Schmitz, C., Hof, P. R. Design-based stereology in neuroscience. Neuroscience. 130 (4), 813-831 (2005).
  42. Guagliardo, N. A., Hill, D. L. Fungiform taste bud degeneration in C57BL/6J mice following chorda-lingual nerve transection. The Journal of Comparative Neurology. 504 (2), 206-216 (2007).
  43. Ohtubo, Y., Yoshii, K. Quantitative analysis of taste bud cell numbers in fungiform and soft palate taste buds of mice. Brain Research. 1367, 13-21 (2011).
  44. Ogata, T., Ohtubo, Y. Quantitative analysis of taste bud cell numbers in the circumvallate and foliate taste buds of mice. Chemical Senses. 45 (4), 261-273 (2020).
  45. Tomchik, S. M., Berg, S., Kim, J. W., Chaudhari, N., Roper, S. D. Breadth of tuning and taste coding in mammalian taste buds. Journal of Neuroscience. 27 (40), 10840-10848 (2007).
  46. Finger, T. E. ATP signaling is crucial for communication from taste buds to gustatory nerves. Science. 310 (5753), 1495-1499 (2005).
  47. Lau, J., et al. Temporal control of gene deletion in sensory ganglia using a tamoxifen-inducible Advillin-CreERT2 recombinase mouse. Molecular Pain. 7 (1), 100 (2011).
  48. Hirsch, M. -. R., D’Autréaux, F., Dymecki, S. M., Brunet, J. -. F., Goridis, C. APhox2b::FLPotransgenic mouse line suitable for intersectional genetics. genesis. 51 (7), 506-514 (2013).
  49. Perea-Martinez, I., Nagai, T., Chaudhari, N. Functional cell types in taste buds have distinct longevities. PLoS ONE. 8 (1), 53399 (2013).
  50. Ohman-Gault, L., Huang, T., Krimm, R. The transcription factor Phox2b distinguishes between oral and non-oral sensory neurons in the geniculate ganglion. Journal of Comparative Neurology. 525 (18), 3935-3950 (2017).
  51. Dvoryanchikov, G., et al. Transcriptomes and neurotransmitter profiles of classes of gustatory and somatosensory neurons in the geniculate ganglion. Nature Communications. 8 (1), (2017).
  52. Whitehead, M. C., Ganchrow, J. R., Ganchrow, D., Yao, B. Organization of geniculate and trigeminal ganglion cells innervating single fungiform taste papillae: a study with tetramethylrhodamine dextran amine labeling. Neuroscience. 93 (3), 931-941 (1999).
  53. Suemune, S., et al. Trigeminal nerve endings of lingual mucosa and musculature of the rat. Brain Research. 586 (1), 162-165 (1992).
  54. Rutlin, M., et al. The cellular and molecular basis of direction selectivity of Aδ-LTMRs. Cell. 159 (7), 1640-1651 (2014).
  55. Abraira, V. E., Ginty, D. D. The sensory neurons of touch. Neuron. 79 (4), 618-639 (2013).
  56. Feng, P., Huang, L., Wang, H. Taste bud homeostasis in health, disease, and aging. Chemical Senses. 39 (1), 3-16 (2014).
  57. Cooper, K. W., et al. COVID-19 and the chemical senses: supporting players take center stage. Neuron. 107 (2), 219-233 (2020).
  58. Barlow, L. A. Progress and renewal in gustation: new insights into taste bud development. Development. 142 (21), 3620-3629 (2015).
  59. Roper, S. D. Taste buds as peripheral chemosensory processors. Seminars in Cell & Developmental Biology. 24 (1), 71-79 (2013).
  60. Ma, H., Yang, R., Thomas, S. M., Kinnamon, J. C. BMC. Neuroscience. 8 (1), 5 (2007).
  61. Kinnamon, J. C., Sherman, T. A., Roper, S. D. Ultrastructure of mouse vallate taste buds: III. Patterns of synaptic connectivity. The Journal of Comparative Neurology. 270 (1), 1-10 (1988).
  62. Romanov, R. A., et al. Chemical synapses without synaptic vesicles: Purinergic neurotransmission through a CALHM1 channel-mitochondrial signaling complex. Science Signaling. 11 (529), 1815 (2018).
  63. Dani, A., Huang, B., Bergan, J., Dulac, C., Zhuang, X. Superresolution imaging of chemical synapses in the brain. Neuron. 68 (5), 843-856 (2010).
  64. Vandenbeuch, A., Clapp, T. R., Kinnamon, S. C. Amiloride-sensitive channels in type I fungiform taste cells in mouse. BMC Neuroscience. 9 (1), 1 (2008).
  65. Bartel, D. L., Sullivan, S. L., Lavoie, &. #. 2. 0. 1. ;. G., Sévigny, J., Finger, T. E. Nucleoside triphosphate diphosphohydrolase-2 is the ecto-ATPase of type I cells in taste buds. The Journal of Comparative Neurology. 497 (1), 1-12 (2006).
  66. Wilson, C. E., Vandenbeuch, A., Kinnamon, S. C. Physiological and behavioral responses to optogenetic stimulation of PKD2L1+ type III taste cells. eneuro. 6 (2), (2019).

Tags

Whole-mount StainingTaste BudsFungiformCircumvallatePalateLingual EpitheliumInnervationTransducing CellsOCT Compound
check_url/62126?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Ohman, L. C., Krimm, R. F. Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds. J. Vis. Exp. (168), e62126, doi:10.3791/62126 (2021).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image