नेत्र सतह रोगों के उपचार के लिए प्लेटलेट समृद्ध प्लाज्मा लाइसेट
Summary
प्लेटलेट लाइसेट ओकुलर सतह रोगों के उपचार के लिए एक उभरते उपकरण का प्रतिनिधित्व करते हैं। यहां, हम प्लेटलेट दाताओं से एकत्र किए गए प्लेटलेट लाइसेट की तैयारी, वितरण, भंडारण और लक्षण वर्णन के लिए एक विधि का प्रस्ताव करते हैं।
Abstract
विभिन्न ओकुलर सतह रोगों का इलाज रक्त-व्युत्पन्न आंखों की बूंदों के साथ किया जाता है। उनका उपयोग नैदानिक अभ्यास में उनके मेटाबोलाइट और विकास कारक सामग्री के कारण पेश किया गया है, जो आंखों की सतह पुनर्जनन को बढ़ावा देता है। रक्त-आधारित आंखों की बूंदों को विभिन्न स्रोतों (यानी, पूरे रक्त या प्लेटलेट एफेरेसिस दान) के साथ-साथ विभिन्न प्रोटोकॉल (जैसे, विभिन्न कमजोर पड़ने और फ्रीज / पिघलना चक्र) से तैयार किया जा सकता है। यह परिवर्तनशीलता नैदानिक प्रोटोकॉल के मानकीकरण और परिणामस्वरूप, उनकी नैदानिक प्रभावकारिता के मूल्यांकन में बाधा डालती है। पद्धतिगत प्रक्रियाओं का विवरण और साझा करना सामान्य दिशानिर्देशों को परिभाषित करने में योगदान दे सकता है। पिछले वर्षों में, एलोजेनिक उत्पाद ऑटोलॉगस उपचार के विकल्प के रूप में अलग हो रहे हैं क्योंकि वे उच्च प्रभावकारिता मानकों की गारंटी देते हैं; उनमें से, प्लेटलेट समृद्ध प्लाज्मा लाइसेट (पीआरपी-एल) आई ड्रॉप सरल विनिर्माण प्रक्रियाओं के साथ तैयार किए जाते हैं। एयूएसएल-आईआरसीसीएस डी रेजियो एमिलिया, इटली में आधान चिकित्सा इकाई में, पीआरपी-एल प्लेटलेट-एफेरेसिस दान से प्राप्त किया जाता है। इस उत्पाद को शुरू में0.9 % NaCl में 0.3 x 10 9 प्लेटलेट्स / एमएल (1 x 109 प्लेटलेट्स / एमएल की औसत एकाग्रता से शुरू होता है) तक पतला किया जाता है। पतला प्लेटलेट्स जमे हुए / पिघलाए जाते हैं और बाद में, मलबे को खत्म करने के लिए सेंट्रीफ्यूज किए जाते हैं। अंतिम मात्रा को 1.45 एमएल एलिकोट में विभाजित किया जाता है और -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाता है। रोगियों को वितरित करने से पहले, आंखों की बूंदों को बाँझपन के लिए परीक्षण किया जाता है। रोगी प्लेटलेट लाइसेट को 1 महीने तक -15 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर कर सकते हैं। विकास कारक संरचना का मूल्यांकन यादृच्छिक रूप से चयनित एलिकोट से भी किया जाता है, और औसत मूल्यों को यहां रिपोर्ट किया गया है।
Introduction
रक्त-व्युत्पन्न उत्पादों का व्यापक रूप से घाव देखभाल1, मैक्सिलोफेशियल और आर्थोपेडिक सर्जरी में और विभिन्न ओकुलर सतह रोगों के उपचार के लिए उपयोग किया जाता है2 जैसे शुष्क आंख रोग (डीईडी)3। डीईडी में, आंसू उत्पादन और ओकुलर सतह अखंडता 4,5 में शामिल विभिन्न कारकों के असामान्य कामकाज के परिणामस्वरूप आंसू फिल्म होमियोस्टेसिस बिगड़ा हुआ है।
डीईडी को कारणों और गंभीरता 6,7,8 में विविधता की विशेषता है और यह उम्र बढ़ने, सेक्स9, संपर्क लेंस, सामयिक या प्रणालीगत दवाओं 10, या स्जोग्रेनसिंड्रोम 10 जैसी पूर्व-मौजूदा स्थितियों जैसे विभिन्न कारकों का परिणाम हो सकता है। हल्के लक्षण होने के बावजूद, डीईडी दुनिया भर में लाखों लोगों को प्रभावित करता है, जिससे उनके जीवन की गुणवत्ता और स्वास्थ्य प्रणाली भी प्रभावितहोती है।
इस विकृति के लिए कई उपचार बताए गए हैं, लेकिन अभी भी सबसे प्रभावी समाधान12 पर कोई सहमति नहीं है। आज तक, कृत्रिम आँसू आंसू फिल्म की जलीय संरचना को बहाल करने के उद्देश्य से चिकित्सा की पहली पंक्ति है, हालांकि इन विकल्पों में प्राकृतिक आँसू 6,11 के मुख्य जैविक रूप से सक्रिय विलेय शामिल नहीं हैं। प्लेटलेट-आधारित उत्पादों को कृत्रिम आँसूके लिए एक वैध विकल्प माना जाता है, हालांकि उनकी नैदानिक प्रभावकारिता, उपयोग के लिए सिफारिशें, और तैयारी के तरीके अभीभी बहस का विषय हैं।
रक्त आधारित उत्पाद आंसुओं के साथ मेटाबोलाइट्स14, प्रोटीन, लिपिड, विटामिन, आयन, विकास कारक (जीएफ), एंटीऑक्सिडेंट यौगिक11 और ऑस्मोलरिटी (300 एमओएसएम / एल) 11 के संदर्भ में एक समान संरचना साझा करते हैं। अपने घटकों की सहक्रियात्मक गतिविधि के माध्यम से, वे कॉर्नियल एपिथेलियम के उत्थान को बढ़ावा देते हैं, भड़काऊ साइटोकिन्स की रिहाई को रोकते हैं, और गोब्लेट कोशिकाओं की संख्या और नेत्रश्लेष्मला 2,3 में म्यूसिन की अभिव्यक्ति में वृद्धि करते हैं।
अब तक, नेत्र रक्त-आधारित उत्पादों में विषमता को साहित्य में प्रलेखित किया गया है; इन उत्पादों को रक्त दाताओं की उत्पत्ति, यानी, ऑटोलॉगस, या एलोजेनिक, साथ ही रक्त स्रोत, यानी परिधीय रक्त, कॉर्ड रक्त, सीरम, या प्लेटलेट्स के अनुसार वर्गीकृत किया जा सकता है।
यद्यपि ऑटोलॉगस उत्पाद सबसे व्यापकथे 3, एलोजेनिक अब पसंदीदा विकल्प बन रहे हैं, क्योंकि वे लागत 16,17 में महत्वपूर्ण कमी के साथ उच्च प्रभावकारिता और सुरक्षामानकों को सुनिश्चित करते हैं। पिछले अध्ययनों ने वास्तव में साबित किया कि ऑटोइम्यून और / या प्रणालीगत बीमारियों वाले रोगियों से प्राप्त रक्त-आधारित उत्पाद परिवर्तित गुणवत्ता और कार्यक्षमता 6,16,17 दिखा सकते हैं। इस तथ्य के बावजूद कि सीरम-आधारित आई ड्रॉप सबसे व्यापक हैं, प्लेटलेट्स-आधारित उत्पाद हाल ही में एक वैध विकल्प के रूप में पुष्टि की जा रही हैं, क्योंकि प्रभावकारिता 3,11 के महत्वपूर्ण स्तर को बनाए रखते हुए उन्हें आसानी से तैयार किया जा सकता है। वर्तमान में उपलब्ध प्लेटलेट-आधारित उत्पादों को प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा (पीआरपी), प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा लाइसेट (पीआरपी-एल), और विकास कारकों (पीआरजीएफ) 3 में समृद्ध प्लाज्मा में विभाजित किया जा सकता है।
उनमें से, पीआरपी-एल को लंबे समय तक जमे हुए उत्पाद होने का लाभ है। पीआरपी-एल को एफेरेसिस, बफी-कोट, या यहां तक कि समाप्त प्लेटलेट्स (पीएलटी) 18,19 से भी तैयार किया जा सकता है, जो उनकी बर्बादी को कम करता है। एलिकोट को रक्त आधान केंद्रों में -80 डिग्री सेल्सियस पर महीनों तक या यहां तक कि रोगियों के घरों में -15 डिग्री सेल्सियस पर छोटी अवधि के लिए संग्रहीत किया जा सकता है।
पीआरपी-एल जीएफ में अत्यधिक समृद्ध हैं, जो आंखों की सतह पुनर्जनन12,20,21 को प्रोत्साहित करने के लिए साबित हुए हैं। फिर भी, इस क्षेत्र में केवल कुछ नैदानिक अध्ययन हैं, और उनमें से सभी ने ऑटोलॉगस स्रोतों 3,22 का उपयोग किया। पीआरपी-एल को अभी भी आंखों की सतह के रोगों के उपचार के लिए नियमित रूप से उपयोग किए जाने से पहले और सत्यापन और लक्षण वर्णन की आवश्यकता है, क्योंकि इसकी तैयारी, वितरण और भंडारणके लिए कोई मानकीकृत दिशानिर्देश नहीं हैं।
इसमें, एयूएसएल-आईआरसीसीएस डी रेजियो एमिलिया, इटली में ट्रांसफ्यूजन मेडिसिन यूनिट में उपयोग किए जाने वाले पीआरपी-एल के उत्पादन और डीईडी के रोगियों के लिए वितरण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल साझा किया गया है। हमारा उद्देश्य वैज्ञानिक समुदाय को तैयारी के मानक तरीकों को विकसित करने में मदद करना है, जो दुनिया भर में अध्ययन और नैदानिक दृष्टिकोण में एकरूपता और स्थिरता बढ़ा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
हाल के वर्षों में, ओकुलर सतह विकृति के लिए प्लेटलेट-आधारित उत्पादों का नैदानिक उपयोग बढ़ गया है, लेकिन वैज्ञानिक मजबूती की कमी से उनका प्रसार बाधित होता है। यह मुख्य रूप से दाता स्रोतों और तैयारी प्रोट?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक दाता-व्युत्पन्न प्लेटलेट एकाग्रता प्रदान करने के लिए “कासा डेल डोनो डी रेजियो एमिलिया” को धन्यवाद देना चाहते हैं।
Materials
| Equipments | |||
| CompoSeal Mobilea II | Fresenius Kabi, Germany | bag sealer | |
| HeraSafe hood | Heraeus Instruments, Germany | Class II biohazard hood | |
| MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System | Haemonetics, Italy | automated plasma and multicomponent collection equipment for donating platelet, red cell, plasma, or combination blood components | |
| Platelet shaker, PF396i | Helmer, USA | Platelet shaker | |
| Raycell X-ray Blood Irradiator | MDS Nordion, Canada | X-ray Blood Irradiator | |
| ROTIXA 50RS | Hettich Zentrifugen, Germany | High speed entrifuge | |
| Sysmex XS-1000i | Sysmex Europe GMBH, Germany | haemocytometer for platelet count | |
| Warm bath, WB-M15 | Falc Instruments, Italy | Warm bath | |
| Materials | |||
| ACD-A anticoagulant solution A | Fenwal Inc., USA | DIN 00788139 | anticoagulant solution for platelet apheresis (1000 ml) |
| BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | BD 442020 | Sterility assay |
| BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | 442020 | At least 2 vials for sterility assay |
| BD Luer Lok Syringe | BD Plastipack, USA | 300865 | At least 4 sterile syringes (50 ml) |
| Bio-Plex Human Cancer Panel 1 | BioRad Laboratories, USA | 171AC500M | Standard panel for PDGF isoforms assessment |
| Bio-Plex Human Cancer Panel 2 | BioRad Laboratories, USA | 171AC600M | Standard panel for EGF assessment |
| Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader | BioRad Laboratories, USA | Magpix | This instrument allows multiple immunoassays using functionalized magnetic beads. |
| Bio-Plex Pro TGF-b Assay | BioRad Laboratories, USA | 10024984 | Set and standards for TGFb isoforms assessment |
| BioRet | ARIES s.r.l., Italy | A2DH0020 | At least 4 piercing spike for blood bags |
| Blood collection tube | BD Vacutainer, USA | 367835 | 1 tube, necessary to perform platelet counts |
| Eye drops kit. COL Medical Device for the application and preservation of eye drops from haemocomponents | Biomed Device s.r.l., Italy | COLC50 | Eye drops kit. At least 2 kits for each PRP unit collected |
| Human Cancer PDGF-AB/BB Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC511 | Set for PDGF isoforms assessment |
| Human Cancer2 EGF Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC603M | Set for EGF assessment |
| NaCl 0.9% sterile solution | Baxter S.p.A., Italy | B05BB01 | 1000 ml |
| OSDI Questionnaire | Allergan Inc., USA | OSDI | Ocular Surface Disease Index Questionnaire |
| Piercing spike | BioRet ARIES s.r.l., Italy | BS051004 | Spike |
| Platelet Additive Solution A+ T-PAS+ | TERUMO BCT Inc., Italy | 40842 | preservative solution for platelet concentrates (1000 ml) |
| Software Excel | Microsoft, USA | Excel | Data analysis software |
| Teruflex Transfer bag 1000 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*T100BM | 1 for PRP dilution |
| Teruflex Transfer bag 300 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*030CM | At least 6 for each PRP unit collected |
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