Ex Vivo Imaging multimodale basato su OCT di occhi di donatori umani per la ricerca sulla degenerazione maculare legata all'età
Summary
I test di laboratorio possono sfruttare il valore prognostico dell’imaging multimodale basato sulla tomografia a coerenza ottica longitudinale (OCT) della degenerazione maculare legata all’età (AMD). Gli occhi dei donatori umani con e senza AMD vengono ripresi utilizzando OCT, colore, oftalmoscopia laser a scansione di riflettanza nel vicino infrarosso e autofluorescenza a due lunghezze d’onda di eccitazione prima del sezionamento dei tessuti.
Abstract
Una sequenza di progressione per la degenerazione maculare legata all’età (AMD) appresa dall’imaging clinico multimodale basato sulla tomografia a coerenza ottica (OCT) (MMI) potrebbe aggiungere valore prognostico ai risultati di laboratorio. In questo lavoro, OCT e MMI ex vivo sono stati applicati agli occhi di donatori umani prima del sezionamento del tessuto retinico. Gli occhi sono stati recuperati da donatori bianchi non diabetici di età compresa tra ≥80 anni, con un tempo di morte per conservazione (DtoP) di ≤6 ore. I globi sono stati recuperati in loco, incisi con un trephine di 18 mm per facilitare la rimozione della cornea e immersi in paraformaldeide tamponata al 4%. Le immagini del fondo oculare a colori sono state acquisite dopo la rimozione del segmento anteriore con un cannocchiale da dissezione e una fotocamera reflex utilizzando l’illuminazione trans, epi- e flash a tre ingrandimenti. I globi sono stati collocati in un buffer all’interno di una camera progettata su misura con una lente da 60 diottrie. Sono stati fotografati con dominio spettrale OCT (cubo di macula di 30°, spaziatura di 30 μm, media = 25), riflettanza nel vicino infrarosso, autofluorescenza a 488 nm e autofluorescenza a 787 nm. Gli occhi AMD hanno mostrato un cambiamento nell’epitelio pigmentato retinico (RPE), con depositi di drusen o drusenoidi sottoretinici (SDD), con o senza neovascolarizzazione e senza evidenza di altre cause. Tra giugno 2016 e settembre 2017 sono stati recuperati 94 occhi destri e 90 occhi sinistri (DtoP: 3,9 ± 1,0 ore). Dei 184 occhi, il 40,2% aveva AMD, inclusa la AMD intermedia precoce (22,8%), atrofica (7,6%) e neovascolare (9,8%) e il 39,7% aveva macule insignificanti. Drusen, SDD, focolai iperriflettenti, atrofia e cicatrici fibrovascolari sono stati identificati utilizzando OCT. Gli artefatti includevano opacizzazione tissutale, distacchi (bacillare, retinica, RPE, coroideale), cambiamento cistico foveale, un RPE ondulato e danni meccanici. Per guidare la criosezione, sono stati utilizzati volumi OCT per trovare i punti di riferimento della fovea e della testa del nervo ottico e patologie specifiche. I volumi ex vivo sono stati registrati con i volumi in vivo selezionando la funzione di riferimento per l’eye tracking. La visibilità ex vivo della patologia osservata in vivo dipende dalla qualità della conservazione. Entro 16 mesi, 75 occhi rapidi di donatori di DtoP in tutte le fasi dell’AMD sono stati recuperati e messi in scena utilizzando metodi clinici MMI.
Introduction
Quindici anni di gestione della degenerazione maculare legata all’età (AMD) neovascolare con terapia anti-VEGF sotto la guida della tomografia a coerenza ottica (OCT) hanno offerto nuove conoscenze sulla sequenza di progressione e sulla microarchitettura di questa causa prevalente di perdita della vista. Un riconoscimento chiave è che l’AMD è una malattia tridimensionale che coinvolge la retina neurosensoriale, l’epitelio pigmentato retinico (RPE) e la coroide. Come risultato dell’imaging OCT dei pazienti dello studio e degli occhi dei pazienti della clinica trattati, le caratteristiche della patologia oltre a quelle viste dalla fotografia del fondo oculare a colori, uno standard clinico per decenni, sono ora riconosciute. Questi includono neovascolarizzazione intraretinica (neovascolarizzazione maculare di tipo 31, precedentemente proliferazione angiomatosa), depositi drusenoidi sottoretinici (SDD, chiamati anche pseudodrusen reticolari)2, vie multiple del destino RPE3,4 e cellule di Müller intensamente gliotiche nell’atrofia 5,6.
Sistemi modello privi di macule (cellule e animali) ricreano alcune fette di questa complessa malattia 7,8,9. Un ulteriore successo nel migliorare l’onere dell’AMD potrebbe venire dalla scoperta e dall’esplorazione della patologia primaria negli occhi umani, dalla comprensione della composizione cellulare unica della macula, seguita dalla traduzione in sistemi modello. Questo rapporto ritrae una collaborazione trentennale tra un laboratorio di ricerca accademica e una banca degli occhi. Gli obiettivi dei metodi di caratterizzazione tissutale descritti nel presente documento sono duplici: 1) informare la tecnologia diagnostica in evoluzione dimostrando le basi dell’aspetto del fondo oculare e delle sorgenti di segnali di imaging con la microscopia e 2) classificare i campioni di AMD per tecniche di scoperta molecolare mirate (immunoistochimica) e non mirate (spettrometria di massa di imaging, IMS e trascrittomica spaziale) che preservano la fovea a solo cono e la para- e perifovea ricche di bastoncelli. Tali studi potrebbero accelerare la traduzione in OCT clinico, per il quale una sequenza di progressione e un follow-up longitudinale sono possibili attraverso l’eye-tracking. Questa tecnologia, progettata per monitorare gli effetti del trattamento, registra le scansioni da una visita clinica all’altra utilizzando vasi retinici. Collegare l’OCT tracciato oculmente ai risultati di laboratorio ottenuti con tecniche distruttive potrebbe fornire un nuovo livello di valore prognostico ai risultati molecolari.
Nel 1993, il laboratorio di ricerca ha catturato fotografie a colori del fondo oscuro postmortem sulla pellicola10. Questo sforzo è stato ispirato dalla superba fotomicroscopia e istologia della retina periferica umana di Foos e colleghi 11,12,13 e dalle estese correlazioni clinico-patologiche AMD di Sarks et al.14,15. A partire dal 2009, è stato adottato l’imaging multimodale ex vivo (MMI) ancorato sul dominio spettrale OCT. Questa transizione è stata ispirata dagli sforzi simili di altri 16,17 e soprattutto dalla consapevolezza che gran parte dell’ultrastruttura descritta dai Sark era disponibile in tre dimensioni, nel tempo, nella clinica 18,19. L’obiettivo era quello di acquisire occhi con macule attaccate in un lasso di tempo ragionevole per studi ben potenziati dei fenotipi a livello cellulare nella retina, RPE e coroide. L’intento era quello di andare oltre le statistiche “per occhio” a “per tipo di lesione”, uno standard influenzato dai concetti di “placca vulnerabile” della malattia cardiovascolare20,21.
Il protocollo in questo rapporto riflette l’esperienza con quasi 400 paia di occhi di donatori accesi in diversi flussi. Nel 2011-2014 è stato creato il sito Web Project MACULA di istopatologia AMD, che include spessori di strato e annotazioni da 142 campioni archiviati. Questi occhi sono stati conservati dal 1996 al 2012 in un fissativo glutaraldeide-paraformaldeide per istologia epossi-resina ad alta risoluzione e microscopia elettronica. Tutti i fundi erano stati fotografati a colori quando ricevuti e sono stati ripresi da OCT poco prima dell’istologia. Un supporto per gli occhi originariamente progettato per gli studi sul nervo ottico22 è stato utilizzato per ospitare un punzone tissutale a tutto spessore di 8 mm di diametro centrato sulla fovea. Le scansioni OCT B attraverso il centro foveale e un sito 2 mm superiore, corrispondente all’istologia agli stessi livelli, sono state caricate sul sito web, oltre a una fotografia del fondo oculare a colori. La scelta dei piani OCT è stata dettata dalla preminenza della patologia AMD sotto la fovea23 e dalla prominenza degli SDD in aree ricche di bastoncelli superiori alla fovea24,25.
A partire dal 2013, gli occhi ripresi con MMI ancorato all’OCT durante la vita erano disponibili per correlazioni clinicopatologiche dirette. La maggior parte (7 donatori su 10) ha coinvolto pazienti in uno studio di riferimento della retina (autore: K.B.F.), che ha offerto un registro di direttive avanzate per i pazienti interessati a donare i loro occhi dopo la morte per scopi di ricerca. Gli occhi sono stati recuperati e conservati dalla banca degli occhi locale, trasferiti al laboratorio e preparati allo stesso modo degli occhi del Progetto MACULA. I volumi OCT clinici pre-mortem sono stati letti senza soluzione di continuità in laboratorio, allineando così le caratteristiche patologiche osservate durante la vita con le caratteristiche osservate al microscopio26.
A partire dal 2014, la raccolta oculare prospettica è iniziata con lo screening per AMD in occhi di donatori senza anamnesi clinica ma conservati entro un limite di tempo definito (6 ore). A tale scopo, il supporto dell’occhio è stato modificato per ospitare un intero globo. Ciò ha ridotto la possibilità di distacco attorno ai bordi tagliati del punzone da 8 mm precedentemente utilizzato. Gli occhi sono stati conservati in paraformaldeide tamponata al 4% per l’immunoistochimica e trasferiti all’1% il giorno successivo per la conservazione a lungo termine. Nel 2016-2017 (pre-pandemia) sono stati recuperati 184 occhi di 90 donatori. Le statistiche e le immagini in questo report sono generate da questa serie. Durante l’era della pandemia (lockdown e conseguenze del 2020), le raccolte prospettiche per la trascrittomica e le collaborazioni IMS sono proseguite a un ritmo ridotto, utilizzando essenzialmente i metodi del 2014.
Sono disponibili altri metodi per la valutazione dell’occhio del donatore. Il Minnesota Grading System (MGS)27,28 si basa sul sistema clinico AREDS per la fotografia del fondo oculare a colori 29. I limiti di questo metodo includono la combinazione di AMD atrofica e neovascolare in uno stadio di “AMD tardiva”. Inoltre, l’MGS comporta la rimozione della retina neurosensoriale prima della foto-documentazione della coroide RPE. Questo passaggio rimuove gli SDD a vari gradi30,31 e rimuove la corrispondenza spaziale della retina esterna e del suo sistema di supporto. Pertanto, gli sforzi per collegare la domanda metabolica e la segnalazione dalla retina alla patologia nella RPE-coroide possono essere ostacolati. Il sistema Utah ha implementato MMI utilizzando la fotografia a colori ex vivo e l’OCT per classificare gli occhi destinati alla dissezione in regioni per l’estrazione di RNA e proteine32. Sebbene preferibile alle estrazioni a coppa oculare intera, l’area di 3 mm di diametro a più alto rischio di progressione AMD33,34 rappresenta solo il 25% di un punch centrato sulla fovea di 6 mm di diametro. Pertanto, le tecniche in grado di localizzare i risultati in riferimento alla fovea, come il sezionamento seriale per l’immunoistochimica, sono vantaggiose.
Protocol
Representative Results
Discussion
Utilizzando un approccio di screening basato sulla popolazione durante un periodo di 16 mesi nell’era pre-COVID, è stato possibile procurarsi 75 occhi di donatori con AMD. Tutti sono stati recuperati con un breve DtoP e messi in scena utilizzando MMI ancorato OCT. Il criterio di età (>80 anni) è al di fuori della fascia di età tipica per i recuperi di tessuto destinati a cornee trapiantabili. Nonostante l’età avanzata, i nostri criteri hanno portato gli occhi in tutte le fasi di AMD. Molti fenotipi RPE sono comuni a…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringraziamo Heidelberg Engineering per la strumentazione e il design del titolare oculare originale, Richard F. Spaide MD per l’introduzione all’imaging multimodale basato su OCT, Christopher Girkin MD per aver facilitato l’accesso ai dispositivi di imaging clinico e David Fisher per la Figura 1. Il recupero degli occhi dei donatori umani per la ricerca è stato sostenuto dalle sovvenzioni del National Institutes of Health (NIH) R01EY06019 (C.A.C.), P30 EY003039 (Pittler), R01EY015520 (Smith) R01EY027948 (C.A.C., T.A.) R01EY030192 (Li), R01EY031209 (Stambolian) e U54EY032442 (Spraggins), IZKF Würzburg (N-304, T.A.), EyeSight Foundation of Alabama, International Retinal Research Foundation (C.A.C.), Arnold and Mabel Beckman Initiative for Macular Research (C.A.C.) e Research to Prevent Blindness AMD Catalyst (Schey).
Materials
| Beakers, 250 mL | Fisher | # 02-540K | |
| Bottles, 1 L, Pyrex | Fisher | # 10-462-719 | storage for preservative |
| Bunsen burner or heat source | Eisco | # 17-12-818 | To melt wax |
| Camera, digital | Nikon D7200 | D7200 | |
| Computer and storage | Apple | iMac Pro; 14 TB external hard drive | Image storage |
| Container, insulated | Fisher | # 02-591-45 | For wet ice |
| Containers, 2 per donor, 40 mL | Fisher | Sameco Bio-Tite 40 mL # 13-711-86 | For preservative |
| Crucible, quartz 30 mL | Fisher | # 08-072D | Hold globe for photography |
| Cylinder, graduate, 250 mL | Fisher | # 08-549G | |
| Disinfectant cleaning supplies | https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html | ||
| Eye holder with lens and mounting bracket | contact J. Messinger | jeffreymessinger@uabmc.edu | custom modification of Heidelberg Engineering original design |
| Face Protection Masks | Fisher | # 19-910-667 | |
| Forceps, Harmon Fix | Roboz | # RS-8247 | |
| Forceps, Micro Adson | Roboz | # RS-5232 | |
| Forceps, Tissue | Roboz | # RS-5172 | |
| Glass petri dish, Kimax | Fisher | # 23064 | |
| Gloves Diamond Grip | Fisher | # MF-300 | |
| Gowns GenPro | Fisher | # 19-166-116 | |
| Image editing software | Adobe | Photoshop 2021, Creative Suite | |
| KimWipes | Fisher | # 06-666 | |
| Lamps, 3 goosenecks | Schott Imaging | # A20800 | |
| Microscope, stereo | Nikon | SMZ 1000 | for dissection |
| Microscope, stereo | Olympus | SZX9 | color fundus photography |
| Paraformaldehyde, 20% | EMS | # 15713-S | for preservative; dilute for storage |
| pH meter | Fisher | # 01-913-806 | |
| Phosphate buffer, Sorenson’s, 0.2 M pH 7.2 | EMS | # 11600-10 | |
| Ring flash | B & H Photo Video | Sigma EM-140 DG | |
| Ruby bead, 1 mm diameter | Meller Optics | # MRB10MD | |
| Safety Glasses 3M | Fisher | # 19-070-940 | |
| Scanning laser ophthalmoscope | Heidelberg Engineering | HRA2 | |
| Scissors, curved spring | Roboz | # RS-5681 | |
| Sharps container | Fisher | # 1482763 | |
| Shutter cord, remote | Nikon | MC-DC2 | |
| Spectral Domain OCT device | Heidelberg Engineering | Spectralis HRA&OCT | https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf |
| Stainless steel ball bearing, 25.4 mm diameter | McMaster-Carr | # 9529K31 | |
| Tissue marking dye, black | Cancer Diagnostics Inc | # 0727-1 | |
| Tissue slicer blades | Thomas Scientific | # 6767C18 | |
| Trephine, 18-mm diameter | Stratis Healthcare | # 6718L | |
| TV monitor (HDMI) and cord for digital camera | B&H Photo Video | BH # COHD18G6PROB | for live viewing and remote camera display features |
| Wax, pink dental | EMS | # 72670 | |
| Wooden applicators | Puritan | # 807-12 |
References
- Spaide, R. F., et al. Consensus nomenclature for reporting neovascular age-related macular degeneration data: Consensus on neovascular age-related macular degeneration nomenclature study group. Ophthalmology. 127 (5), 616-636 (2020).
- Spaide, R. F., Ooto, S., Curcio, C. A. Subretinal drusenoid deposits a.k.a. pseudodrusen. Survey of Ophthalmology. 63 (6), 782-815 (2018).
- Curcio, C. A., Zanzottera, E. C., Ach, T., Balaratnasingam, C., Freund, K. B. Activated retinal pigment epithelium, an optical coherence tomography biomarker for progression in age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (6), 211-226 (2017).
- Cao, D., et al. Hyperreflective foci, OCT progression indicators in age-related macular degeneration, include transdifferentiated retinal pigment epithelium. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 62 (10), 34 (2021).
- Zanzottera, E. C., et al. Visualizing retinal pigment epithelium phenotypes in the transition to geographic atrophy in age-related macular degeneration. Retina. 36, S12-S25 (2016).
- Edwards, M. M., et al. Subretinal glial membranes in eyes with geographic atrophy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (3), 1352-1367 (2017).
- Zhang, Z., Shen, M. M., Fu, Y. Combination of AIBP, apoA-I, and aflibercept overcomes anti-VEGF resistance in neovascular AMD by inhibiting arteriolar choroidal neovascularization. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 63 (12), 2 (2022).
- Jiang, M., et al. Microtubule motors transport phagosomes in the RPE, and lack of KLC1 leads to AMD-like pathogenesis. Journal of Cell Biology. 210 (4), 595-611 (2015).
- Collin, G. B., et al. Disruption of murine Adamtsl4 results in zonular fiber detachment from the lens and in retinal pigment epithelium dedifferentiation. Human Molecular Genetics. 24 (24), 6958-6974 (2015).
- Curcio, C. A., Medeiros, N. E., Millican, C. L. The Alabama Age-related Macular Degeneration Grading System for donor eyes. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 39 (7), 1085-1096 (1998).
- Bastek, J. V., Siegel, E. B., Straatsma, B. R., Foos, R. Y. Chorioretinal juncture. Pigmentary patterns of the peripheral fundus. Ophthalmology. 89 (12), 1455-1463 (1982).
- Lewis, H., Straatsma, B. R., Foos, R. Y., Lightfoot, D. O. Reticular degeneration of the pigment epithelium. Ophthalmology. 92 (11), 1485-1495 (1985).
- Lewis, H., Straatsma, B. R., Foos, R. Y. Chorioretinal juncture. Multiple extramacular drusen. Ophthalmology. 93 (8), 1098-1112 (1986).
- Sarks, J. P., Sarks, S. H., Killingsworth, M. C. Evolution of geographic atrophy of the retinal pigment epithelium. Eye. 2 (5), 552-577 (1988).
- Sarks, J. P., Sarks, S. H., Killingsworth, M. C. Evolution of soft drusen in age-related macular degeneration. Eye. 8 (3), 269-283 (1994).
- Ghazi, N. G., Dibernardo, C., Ying, H. S., Mori, K., Gehlbach, P. L. Optical coherence tomography of enucleated human eye specimens with histological correlation: Origin of the outer "red line". American Journal of Ophthalmology. 141 (4), 719-726 (2006).
- Brown, N. H., et al. Developing SDOCT to assess donor human eyes prior to tissue sectioning for research. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 247 (8), 1069-1080 (2009).
- Helb, H. M., et al. Clinical evaluation of simultaneous confocal scanning laser ophthalmoscopy imaging combined with high-resolution, spectral-domain optical coherence tomography. Acta Ophthalmologica. 88 (8), 842-849 (2010).
- Spaide, R. F., Curcio, C. A. Drusen characterization with multimodal imaging. Retina. 30 (9), 1441-1454 (2010).
- Naghavi, M., et al. From vulnerable plaque to vulnerable patient: a call for new definitions and risk assessment strategies: Part 1. Circulation. 108 (14), 1664-1672 (2003).
- Garcia-Garcia, H. M., Gonzalo, N., Regar, E., Serruys, P. W. Virtual histology and optical coherence tomography: from research to a broad clinical application. Heart. 95 (16), 1362-1374 (2009).
- Strouthidis, N. G., et al. Comparison of clinical and spectral domain optical coherence tomography optic disc margin anatomy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50 (10), 4709-4718 (2009).
- Sarks, S. H. Ageing and degeneration in the macular region: A clinico-pathological study. British Journal of Ophthalmology. 60 (5), 324-341 (1976).
- Sura, A. A., et al. Measuring the contributions of basal laminar deposit and Bruch’s membrane in age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 61 (13), 19 (2020).
- Chen, L., Messinger, J. D., Kar, D., Duncan, J. L., Curcio, C. A. Biometrics, impact, and significance of basal linear deposit and subretinal drusenoid deposit in age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 62 (1), 33 (2021).
- Litts, K. M., et al. Clinicopathological correlation of outer retinal tubulation in age-related macular degeneration. JAMA Ophthalmology. 133 (5), 609-612 (2015).
- Olsen, T. W., Feng, X. The Minnesota grading system of eye bank eyes for age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45 (12), 4484-4490 (2004).
- Mano, F., Sprehe, N., Olsen, T. W. Association of drusen phenotype in age-related macular degeneration from human eye-bank eyes to disease stage and cause of death. Ophthalmology Retina. 5 (8), 743-749 (2021).
- Age-related eye disease study research group. The Age-Related Eye Disease Study system for classifying age-related macular degeneration from stereoscopic color fundus photographs: The Age-Related Eye Disease Study Report Number 6. American Journal of Ophthalmology. 132 (5), 668-681 (2001).
- Arnold, J. J., Sarks, S. H., Killingsworth, M. C., Sarks, J. P. Reticular pseudodrusen. A risk factor in age-related maculopathy. Retina. 15 (3), 183-191 (1995).
- Olsen, T. W., Bottini, A. R., Mendoza, P., Grossniklausk, H. E. The age-related macular degeneration complex: linking epidemiology and histopathology using the Minnesota grading system (the inaugural Frederick C. Blodi Lecture). Transactions of the American Ophthalmological Society. 113, (2015).
- Owen, L. A., et al. The Utah protocol for postmortem eye phenotyping and molecular biochemical analysis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 60 (4), 1204-1212 (2019).
- Wang, J. J., et al. Ten-year incidence and progression of age-related maculopathy: The Blue Mountains Eye Study. Ophthalmology. 114 (1), 92-98 (2007).
- Joachim, N., Mitchell, P., Burlutsky, G., Kifley, A., Wang, J. J. The incidence and progression of age-related macular degeneration over 15 years: The Blue Mountains Eye Study. Ophthalmology. 122 (12), 2482-2489 (2015).
- Pang, C., Messinger, J. D., Zanzottera, E. C., Freund, K. B., Curcio, C. A. The onion sign in neovascular age-related macular degeneration represents cholesterol crystals. Ophthalmology. 122 (11), 2316-2326 (2015).
- Keilhauer, C. N., Delori, F. C. Near-infrared autofluorescence imaging of the fundus: Visualization of ocular melanin. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (8), 3556-3564 (2006).
- Curcio, C. A., Saunders, P. L., Younger, P. W., Malek, G. Peripapillary chorioretinal atrophy: Bruch’s membrane changes and photoreceptor loss. Ophthalmology. 107 (2), 334-343 (2000).
- Curcio, C. A. Imaging maculopathy in the post-mortem human retina. Vision Research. 45 (28), 3496-3503 (2005).
- Brinkmann, M., et al. Histology and clinical lifecycle of acquired vitelliform lesion, a pathway to advanced age-related macular degeneration. American Journal of Ophthalmology. 240, 99-114 (2022).
- Ramtohul, P., et al. Bacillary layer detachment: Multimodal imaging and histologic evidence of a novel optical coherence tomography terminology. Literature review and proposed theory. Retina. 41 (11), 2193-2207 (2021).
- Wilson, J. D., Foster, T. H. Mie theory interpretations of light scattering from intact cells. Optics Letters. 30 (18), 2442-2444 (2005).
- Ghazi, N. G., Green, W. R. Pathology and pathogenesis of retinal detachment. Eye. 16 (4), 411-421 (2002).
- Berlin, A., et al. Correlation of optical coherence tomography angiography of type 3 macular neovascularization with corresponding histology. JAMA Ophthalmology. 140 (6), 628-633 (2022).
- Berlin, A., et al. Histology of type 3 macular neovascularization and microvascular anomalies in anti-VEGF treated age-related macular degeneration. Ophthalmology Science. 3 (3), 100280 (2023).
- Schaal, K. B., et al. Outer retinal tubulation in advanced age-related macular degeneration: optical coherence tomographic findings correspond to histology. Retina. 35 (7), 1339-1350 (2015).
- Chen, L., et al. Histology and clinical imaging lifecycle of black pigment in fibrosis secondary to neovascular age-related macular degeneration. Experimental Eye Research. 214, 108882 (2022).
- Balaratnasingam, C., et al. Histologic and optical coherence tomographic correlations in drusenoid pigment epithelium detachment in age-related macular degeneration. Ophthalmology. 124 (1), 644-656 (2017).
- Curcio, C. A., et al. Subretinal drusenoid deposits in non-neovascular age-related macular degeneration: Morphology, prevalence, topography, and biogenesis model. Retina. 33 (2), 265-276 (2013).
- Owsley, C., et al. Biologically guided optimization of test target location for rod-mediated dark adaptation in age-related macular degeneration: ALSTAR2 baseline. Ophthalmology Science. 3 (2), 100274 (2023).
- Anderson, D. M. G., et al. The molecular landscape of the human retina and supporting tissues by high resolution imaging mass spectrometry. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 31 (12), 2426-2436 (2020).
- Lee, J., Yoo, M., Choi, J. Recent advances in spatially resolved transcriptomics: challenges and opportunities. BMB Reports. 55 (3), 113-124 (2022).
- Diabetes. Alabama Public Health Available from: https://www.alabamapublichealth.gov/healthrankings/diabetes.html (2022)
- Francis, J. H., et al. Swept-source optical coherence tomography features of choroidal nevi. American Journal of Ophthalmology. 159 (1), 169-176 (2015).
- Inoue, M., Dansingani, K. K., Freund, K. B. Progression of age-related macular degeneration overlying a large choroidal vessel. Retina Cases Brief Reports. 10 (1), 22-25 (2016).
- Jaffe, G. J., et al. Imaging features associated with progression to geographic atrophy in age-related macular degeneration: CAM Report 5. Ophthalmology Retina. 5 (9), 855-867 (2021).
