Introduction
1990'ların ortalarında, kalkınma SOD1-G93A transgenik fare modeli Amyotrofik lateral skleroz (ALS) 1 en yaygın olarak kullanılan hayvan modeli olmuştur beri. Bu transjenik fare modeli, genetik olarak amino asit 93 (G93A) alanin mutasyona ALS ilişkili glisin barındıran insan Cu / Zn süperoksit dismutaz 1 (SOD1) geni, bir mutant formu aşın ifade etmek üzere geliştirilmiş. G93A mutasyonu topluca makyaj ailesel ALS vakalarının 2 yaklaşık beşte biri SOD1 genindeki mutasyonlar biridir.
SOD1-G93A modeli, bu nihai birlikte, bu tür motor nöron kaybı, ilerleyici kas güçsüzlüğü ve atrofi gibi insanlarda ALS patolojik özellikleri birçok özetlediği çünkü ALS onun bariz genetik bağlantıya ek olarak ALS ilaç geliştirme araştırma beygir haline gelmiştir felç ve ölüm 3. Genellikle transjenik hayvan modellerinde olduğu gibi olsa da, doğal bir iki oradaSOD1-G93A fareler ile bağlantılı rahatsızlık derecesinde değişkenliğin. Scott ve ark. En az 24 çöp eşleştirilmiş cinsiyet dengeli farelerin Kusaklara 4 biyolojik değişkenlik yarattığı gürültüyü aşmak için uyuşturucu etkinlik çalışması tasarımlarda gerekli olduğunu tespit ettik. Agresif hastalığın ilerlemesi ve günlük izleme ihtiyacı ile birlikte bu çalışmalarda gerekli hayvanların çok sayıda nöromusküler gücünü ve işlevini ölçmek için mükellef, zaman alıcı ve potansiyel stresli tekniklerin kullanılmasını yasaklayan (örneğin, elektromiyografi, kavrama kuvveti, rotorod , vs.). Bunun yerine, güvenilir hızlı bir şekilde SOD1-G93A farelerin kas fonksiyonunu değerlendirir in vivo tarama aracı ihtiyacını vurgulamaktadır.
ALS TDI bir protokol ortalama fare başına en az 30 sn SOD1-G93A farelerin kas fonksiyonlarının değerlendirilmesi güvenilir sağlar geliştirildi. Bu protokol, encompabasında ve video Bu raporda açıklanan basit bir nörolojik skorlama sistemi (NeuroScore) kullanarak hindlimb fonksiyonun günlük değerlendirmesini de kapsar. Hindlimb açıkları erken SOD1-G93A farelerin 5,6 hastalığın nörolojik belirtisi bildirdi çünkü NeuroScore hindlimb fonksiyonu odaklanmıştır. Dahası, ALS TDI tarafından geliştirilen protokol parezi (hafif veya kısmi felç), ilerlemesi ve felç şiddetinin başlangıç tarafsız bir değerlendirme sağlar ve hastalığın ilerlemesinde ilaca bağlı değişiklikleri belirlemek için yeterli hassastır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm deneyler Hayvanların Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından açıklanan protokollere uygun olarak yürütülmektedir ve ALS TDI kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Hayvanlar, Konut ve Araştırma Tasarımı
Not:. SOD1-G93A fare koloni başlangıçta Gumey ve diğerleri 7 tarafından üretilen yüksek kopya B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur suşundan elde edilmiştir. Koloni şu anda vahşi tip C57BL / 6-SJL F1 dişilerle transgenik C57BL / 6-SJL erkek kapısı tarafından muhafaza ediliyor. F1 hayvanlar B6 dişilerle SJL erkek geçerek üretilir. Fareler yaş 35-45 günde ALS TDI haftalık sevk edilir.
- Farenin en az bir hafta bir çalışmaya vermeden önce (18-23 ° C ve% 40-60 nem arasındaki bir sıcaklıkta 12 saat ışık / karanlık döngüsü) hayvan tesisine alıştırıldı izin verir.
- Ev erkek SOD1-G93A mikrofongrup erkek savaşmak eğilimi ev sahipliği beri kafes başına e bir fare. Kafes başına iki adede kadar Evi dişi SOD1-G93A fareler. Plastik kulübe şeklinde çevresel zenginleştirme sağlar. Fareler su / gıda, içme ilaç yönetimini gerektiren bir çalışmanın parçası olmadıkça, yiyecek ve su ad libitum sağlayın. Bu gibi durumlarda, oranı ve kayıt gıda ve su.
- Yaş gününde 50 civarında bir ilaç etkinlik çalışmaya başlamak ve 64 çöp eşleştirilmiş cinsiyet dengeli fareler (kohort başına 32) içerir. Son olarak, çalışmalar yürüten araştırmacılar deneysel koşullara kör olduğundan emin olun.
Not: Bu tipik bir ilaç etkinlik çalışması ancak önce ya da sonra çalışmaya başlamak için tercih olabilir terapötik müdahale türüne göre yaş gününde 50 başlar önerilir.
Not: kohort başına 32 fare cinsiyete özgü ilaç etkilerini tespit etmek güç olan bir çalışma. Cinsiyete özgü karşılaştırmalar gerekiyorsa, kohort başına 24 fare, genel ilaç etkisini tespit etmek için yeterli olacaktır.
2. Vücut Ağırlığı
- Günlük gram onda biri bir hassasiyetle çalışmalarda tüm fareler için rekor vücut ağırlıkları. Not: Vücut ağırlığı hastalığın ilerlemesi ve kronik ilaç tedavisinin doğabilecek halsizlik hassas bir göstergesidir.
- Fare vücut ağırlıkları dolayısıyla, sabahları daha yüksek olması, bir gün süresince önemli ölçüde değişebilir, her gün aynı zamanda etrafında onları kaydedin.
3. Nörolojik Puanlama Sistemi (NeuroScore)
- Günlük olarak, aşağıdaki üç koşullar altında fare gözlemleyerek her bir fare için değerlendirilmesi nörolojik puanları (NS) bir sekans dahilinde gerçekleştirilebilir: b) fare) yürümeye bırakıldı ve parezi c başlamasından sonra a), fare kuyruk tarafından askıya Fare yan yerleştirilir.
- Kuyruk süspansiyon testi için, gıda havzası uzak, 1-2 sn evlerine kafes tel üstünden kuyruk tabanından fareyi yaklaşık 1.5 "tutun atıl ikenarka ayaklarında Erving. Süspansiyon testi 3 kez tekrarlayın ve en tutarlı sonucu kaydedin.
- Yürüme testi, bazı çekiş ve 25 cm yürüme mesafesi sağlayan temiz bir yüzeye üzerinde fare koyun (örn., Bir kağıt havlu kaymasını önlemek için aşağı bantlanmış). Onun yürüyüşü izlerken fare 75 cm toplam (kağıt havlu 3X uzunluğu) yürümek için izin verin.
- "Doğrulma refleksi" test için sol veya sağ tarafına fare koyun ve bir kronometreler her iki taraftan yardımsız kendini yukarı sağa süresini ölçmek kullanarak. Not: Bu testin sadece bir deneme gereklidir.
- 0'dan 4. Not bağımsız bir ölçekte (sol veya sağ) Her hindlimb of NS belirleyin: Sağ hindlimb NS 1 iken Örneğin 0 puan, 1, sol hindlimb NS 0 olduğunu gösterir.
- (Tablo 1'de verilmiştir özet) gözlem aşağıdaki kümesine karşılık gelen nörolojik puanları (0-4) atayın:
- Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 0 (Ön-semptomatik) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb normal yayvan yani sunar, tam uzakta yanal orta hatta uzanan ve 2 saniye bu pozisyonda kalır veya uzun. Fare yürümeye izin, normal yürüyüş görülmektedir.
- Fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb anormal yayvan, yani sunar, bu çökmüş veya kısmen yanal orta hatta doğru çöktü YA o kuyruk süspansiyon sırasında titreyen VEYA o geri çekilir edilir: gözlenmektedir aşağıdaki eğer NS 1 (İlk semptomlar) atama / sıktı. Fare yürümeye izin verildiğinde normal VEYA biraz yavaş yürüme görülmektedir.
- Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 2 (parezi başlangıcı) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb çok uzanan değil, kısmen ya da tamamen yıkılmış olduğunu. (Hala ortak hareket olabilir). Fare yürümeye izin verildiğinde, hindlimb ileri mot için kullanılıriyon ancak ayak 90 cm yürüyüş sırasında en az iki kez aşağı doğru kıvrılıp VEYA ayak herhangi bir parçası kafes alt / masa boyunca sürükleyerek. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş olduğunda, İKİ taraftan 10 saniye içinde kendini sağa yapabiliyor.
- Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 3 (Felç) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb VEYA minimal eklem hareket içinde sert felç var. Fare yürümeye izin verildiğinde öne Ancak hindlimb ileri hareket için kullanılan DEĞİLDİR hareket vardır. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş olduğunda, İKİ taraftan 10 saniye içinde kendini sağa yapabiliyor. Not: Nadiren, felç başlangıcından sonra, idrar nem arka ayaklarında görünebilir. Tedavi edilmeyen idrar nem idrar "yanık" ve deri lezyonları neden olabilir. Saç kırpma yoluyla idrar nem davranın, ılık su idrar çıkarmak ıslatırken uygulamak ve yavaşça kuru kurulayın. Cilt lezyonları varsa Antibiyotik uygulanırtic merhem.
- Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 4 (İnsanca son nokta) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, arka ayaklarında sert felç var. Fare yürümeye izin verildiğinde, hiçbir ileri hareket yoktur. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş edildiğinde, YA taraftan 10 saniye içinde kendini sağa mümkün değildir. Yani, refleksi yokluğu.
4. Veri Girişi ve Analizi
- Bir ilaç etkinlik çalışması sırasında, bir Laboratuar Bilgi Yönetim Sistemi (LIMS) her bir fare için veya ticari olarak satılan elektronik tablo yazılımı içine toplanan verileri girin.
Not: ALS TDI geliştirilen LIMS yazılım dahili çalışmalardan toplanan tüm veriler için merkezi bir depo, ALS TDI müfettişler için zamanla bu veriler elverişli erişilebilir hale getirmek. LIMS, tüm çalışma günlerinde geri soyu, vücut ağırlığı veya nörolojik skoru, eşsiz kimliği ile, herhangi bir bireysel fare izlerve ömrü boyunca kaydetti başka gözlemleriniz içerir. LIMS sonuçta daha sonraki analizler için kullanılan bir elektronik tablo oluşturur. - Bir ilaç etkinlik çalışmasında, yani tüm fareler insancıl uç noktasına ulaştığında, kullanım tablosu programı (Malzeme Tabloya bakınız) Sol ve sağ hindlimb NS ortalamasını alarak her gün için, her bir fare için kombine NS hesaplamak tamamlanmasının ardından . Sonra, her fare ve her bir fare, belirli bir NS geçirdiği gün sayısı her NS ortanca yaşı hesaplamak.
- İstatistiksel yazılımı elektronik tablo yazılımı veri alma yoluyla zaman içinde NS genel değişimleri analiz (Malzeme Tablo). Regresyon etkileri gibi medyan NS yaşı ve uyuşturucu tedavi ile, beklenen NS tahmin sıralı lojistik regresyon modeli kullanılarak bu verileri takınız. Log-rank ki-kare testi kullanılarak etkisi olabilirlik olasılığını tahmin ve NS ilerlemesi üzerine uyuşturucu tedavi etkisi istatistiksel olup olmadığını belirlemekly anlamlı (adım-adım talimatlar için İletişim Kod Dosyası bakınız).
Not: Bir p-değeri <0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmektedir.
Not: İstatistiksel analiz yöntemi NS veri ve bireysel fareler için NS yörüngeleri değişken doğası sıralı doğasını saygılıdır. Bireysel NS yörüngeleri yeterli NS tepkilerin yansıtıcı olmayan NS zaman ilişkili grup ortalamaları sonuçlanan belirgin farklı olabilir, çünkü tercih edilir. Buna ek olarak, bazı durumlarda, NS özellikle sıfır-bir aralığında değişebilir. - Son olarak, kullanım grafik yazılımı ilaç ile tedavi edilen ve kontrol hayvanları için grafikler "Ordinal NS Medyan Yaş vs NS Beklenen" oluşturmak için (Malzeme Tabloya bakınız) (Şekil 2; Yan Kod adım adım talimatlar için Dosya bakınız). Uygun y-ekseninden hastalığın başlangıcından (i ortalama yaşı enterpolasyonlayarak ilaç ile tedavi edilen ve kontrol grupları arasında vardiya tahmin etmek bu grafikleri kullanabilirsiniz.e., x-ekseninde NS 2).
Not: İki grup arasında ortalama yaş farkı ilaca bağlı değişimi temsil ve etkinin büyüklüğü pratik bir önlem olarak kabul edilir.
Not: Semptomatik hastalığın ilerlemesini yavaşlattı göstermektedir beklenen NS vs ortanca yaş eğrisi sağa kaymalar. Tersine, beklenen NS vs ortanca yaş eğrisi sola kaymalar semptomatik hastalığın ilerlemesini hızlandırılmış göstermektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
2014 değerlendirildi sırasında 90 erkek ve 94 dişi olmayan tedavi SOD1-G93A fareler için nörolojik puanı verileri ALS TDI okudu. Sonuçlar kadınlara oranla NS 1 de yaşamlarının büyük bir oranda kanıtladığı gibi erkek fareler genellikle, dişi farelere göre daha agresif bir hastalık ilerlemesini sahip olduğunu göstermektedir. NS 2 ve NS 3 cinsiyetler arasında neredeyse eşit sıklıkta görülür. O "normal" bir fenotip olarak kabul edilir, çünkü NS 0 analize dahil edilmiştir. NS 4 de sadece bir SOD1-G93A farenin ömrü (Tablo 2 ve Şekil 1) kez oluşabilir tanım gereği çıkarılmıştır.
NS veriler SOD1-G93A farelerde test bileşiği TDI173 bir ALS hastalığın ilerlemesi etkinlik farmakolojik bir çalışmadan sunulmaktadır (n = cinsiyet / muamele başına 16, 64, toplam fare). Veri c sıralı regresyon analizi tarafından yakalanan şekilde Şekil 2'de, nörolojik hastalığın ilerlemesi oranı sunulmuşturBu tarifnamede ayrıntılı NeuroScore protokolü kullanılarak aptured. TDI173-ile tedavi edilmiş farelerde, araçla tedavi edilen kontrol ile karşılaştırılmıştır. Cinsiyet ayrı ayrı analiz edildi, ancak cinsiyet birleşti zaman istatistiksel anlamlılık ulaşıldığında istatistiksel olarak anlamlı farklılık gözlenmedi. Sağkalım Kaplan-Meier analizi, hatta sıralı lojistik istatistiksel analiz gibi benzer eğilimler gösteren rağmen, cinsiyetler (Şekil 3) birleşti bile önemli farklılıklar ortaya çıkarmak için yeterince duyarlı değildi.
| NS 1 | Hindlimb çökmüş veya kısmen yanal orta hatta doğru çöktü YA o kuyruk süspansiyon sırasında titreyen VEYA o sıktı / geri çekilir edilir anormal yayvan, yani sunar. | Normal VEYA biraz daha yavaş yürüme. | NA |
| NS 2 | Hindlimb kısmen veya tamamen çok uzanan değil, yıkılmıştır. Orada olabilir sthasta eklem hareketi olarak. | Hindlimb ancak ayak kafes alt / masa boyunca sürükleyerek bir 75 cm yürüyüş VEYA ayağın herhangi bir bölümü sırasında en az iki kez aşağı doğru kıvırın ileri hareket için kullanılır. | Fare HER taraftan 10 saniye içinde kendini sağa yapabiliyor. |
| NS 3 | Hindlimb VEYA minimal eklem hareket içinde rijit felç. | İleri hareket ancak hindlimb ileri hareket için kullanılan DEĞİLDİR. | Fare HER taraftan 10 saniye içinde kendini sağa yapabiliyor. |
| NS 4 | Arka ayaklarında Rijit felç. | Hiçbir ileri hareket. | Fare YA taraftan 10 saniye içinde kendini sağa mümkün değildir. |
Tablo 1: nörolojik puanları atamak için kullanılan fenotipik gözlemlerin özeti.
| NS1 sıklığı | NS2 sıklığı | NS3 sıklığı | ||||
| Erkek | Dişi | Erkek | Dişi | Erkek | Dişi | |
| Farelerin sayısı | 90 | 94 | 90 | 94 | 90 | 94 |
| Minimum | 12 | 5 | 1 | 1 | 0 | 0 |
| % 25 | 29 | 16 | 4 | 4 | 0 | 0 |
| Orta değer | 37 | 27.5 | 5 | 5 | 1 | 1 |
| % 75 | 44 | 37.5 | 7.5 | 6.5 | 2.5 | 3 |
| En yüksek | 61 | 60 | 28 | 11 | 8 | 9 |
Tablo 2: ölünceye kadar yaş gününde 50 günlük attı olmayan tedavi SOD1-G93A farelerin NS verilerinin frekans analizi. Dağılımlar NS 1, 2, ve 3 için hesaplanmıştır.
2014 yılında Şekil 1. Bizim koloni arıtılmamış SOD1-G93A farelerin nüfus her fare için her anormal NeuroScore harcanan gün sayısının grafiksel gösterimi (erkek n = 90, kadın n = 94) için aynı. Skor frekansları Fareler her olası NS için temsil edilir. NS 4 olay yalnızca tanımı gereği her farenin bir kez ömür boyu oluşabilir ihmal edilmiştir. Daha büyük bir versio görmek için buraya tıklayınız Bu rakamın n.
Şekil 2 çöp Bahisler araç-tedavi edilen kontrol farelerine TDI173 ile tedavi edilen farelerin (kırmızı çizgi) nörolojik hastalık ilerlemesini karşılaştıran tipik sıralı lojistik istatistiksel analiz grafiği.. (Mavi çizgi, Bildirilen p-değerleri log-rank ki-kare testi temsil) tıklayınız Burada bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için.
. Şekil 3 çöp eşleştirilmiş araç-tedavi edilen kontrol farelerine TDI173 ile tedavi edilen farelerin (kırmızı çizgi) ömrünü karşılaştıran tipik Kaplan-Meier analizi grafiği (mavi çizgi, Bildirilen p-değerleri log-rank testi temsil).jove.com/files/ftp_upload/53257/53257fig3large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu yazıda, doğru uygulandığı takdirde, güvenilir SOD1-G93A farelerde hastalığın ilerlemesini değerlendirmek ve ilaca bağlı değişikliklerin belirlenmesi yeteneğine sahip, hızlı ve basit bir video protokol açıklar. Farklı gruplar SOD1-G93A farelerin 8-10 için fenotipik skorlama sistemleri geliştirdiler ederken, sık sık prosedürü hakkında yeterli bilgi sağlamak ve replikasyon için yetersiz kalmaktadır yok. Sonuç olarak, skorlama sistemleri nadiren onları geliştiren belirli bir grup dışında kullanılmaktadır. Bu raporda, video ile detaylı bir el yazması kombinasyonu böylece diğer laboratuvarlar tarafından kabul edilecek protokol izin ve farklı ortamlarda gerçekleşen çalışmalar arasında karşılaştırma sağlayan puanlama belirsizlikleri ve inter-deneyci değişkenliği en aza indirir.
NeuroScore olarak anılacaktır, bu raporda açıklanan nörolojik skorlama sistemi, tam sayısal değerler belirti ve sy setleri atfedilen sıralı veri oluştururmptoms sırada hastalık şiddetinin kurulması dışında hiçbir anlamı yoktur. Bu durumda, NS 0 en şiddetli hastalık durumudur ve NS 4 fareler ile en ağır hastalık durumu ya da nöromüsküler hastalığa ikincil morbidite yaklaşıyor ise, normal hindlimb işlevine sahip bir fare anlamına gelmektedir. Puanlama sistemi semptomatik eşikleri kullanan olsa da, her sıra NS değeri videoda yakalanan ve bu raporda alındı birçoğu olası klinik sunumlar geniş bir yelpazede kapsar.
NS 1 fare fare ölçüde değişebilir SOD1-G93A farelerde hastalığın erken belirtileri spektrumunu kapsar. Bazı fareler, diğerleri hindlimb titreme göstermek ve hatta hindlimb retraksiyon veya kopça gösterisi sırasında orta hatta doğru çöken arka ayaklarında ile anormal yayvan sergiler. Ayrıca, hastalığın erken evrelerinde bazı farelerin NS SOD1-G93A farelerin frekansı olarak, Şaşmaz olsa NS 1 ve 0 arasında birkaç gün boyunca dalgalanma olabilirkez NS 1 artar ve tarif edilen farklı fenotip daha fazlasını içerir ve. Ortalama olarak, erkek ve dişi SOD1-G93A fareler genellikle bu aşamada 37 ve 28 gün sırasıyla geçirmek.
NS 2 parezi (hafif veya kısmi felç) başlangıcını temsil eder ve patoloji varlığı için yadsınamaz bir kanıt sağlar. Bu NS1 bazen mevcut olan bir doğal tipte fare için nadir değildir, NS 2 yalnızca SOD1-G93A farelerde görülür. Aynı NS 1, NS 2 belirti ve bulguları bir spektrum yakalar. NS 2 erken evre sunumda fare ayaktan ve enerjik. NS 2 A daha gelişmiş sunum taşımak için ciddi sınırlı yeteneği olan bir fare ortaya koymaktadır. Gıda pelet kafes altında yer almalıdır veya hidratlı yiyecekler sağlanmalıdır, böylece arka ayaklarında Gelişmiş parezi, kafesin üstünde yiyecek ve su ulaşmasını fareler önleyebilir. Ayrıca, uzun sipper tüpleri su şişeleri konulmalıdır. SOD1-G93A fareler typicaLly bu aşamada 5 gün geçirmek.
NS 3 tam hindlimb felç anlamına ve tüm hesapları belirlemek ve skor en kolay fenotip olduğunu. NS 3 kapsadığı felç semptomları sarkık ya da spastik ya olabilir, ancak genellikle spastik olan edebilir. Bu noktada, fareler çok hasta ve sık sık kontrol edilmelidir. Ortalama olarak, SOD1-G93A fareler, bu aşamada 1 ila 2 gün geçirmek.
NS 4 münhasıran NS 0-3 gibi hindlimb işlevine bağlı değildir "düzeltilmesi refleksinin" yokluğunu gösterir ama bunun yerine farenin tüm vücut welness yansıtır. Normal "doğrulma refleksi" göstermek için bir fare yeteneği motivasyon, enerji, aynı zamanda arka ayaklarında, ön ayakları ve karın olmak üzere çok sayıda kas gruplarının işlevini gerektirir. Bu farelerde bu hastalığın ilerlemesi çoğu zaman simetrik bir tarafı m üzerine konulduğunda başarıyla doğrulma refleksini tamamlayabilen bir fare dikkat etmek önemlidiray diğer tarafta yerleştirildiğinde bunu yaparken verilemezdi. Bu her iki tarafta test gerçekleştirmek ve iki tarafında kendini düzeltmeye başarısız olursa fare euthanize için, hayvanların insanca tedavi ve çalışmanın bütünlüğü açısından, bu nedenle önemlidir.
NS 4 ötenazi tarihini tanımlayan ve varsayılan olarak doğrudan sağkalım verileri ile hizalar. Ancak, genel hastalık ilerlemesi, NS sıralı regresyon analizi ile tanımlanan, tamamen Kaplan-Meier sağkalım eğrileri ve vücut ağırlığı verileri ile örtüşüyor olmayabilir. Bazı tedavi yaklaşımları hastalığın başlamasını ya da semptomları etkileyebilir, ama genel ömrü etkileyecek başarısız olabilir.
Bu raporda derinlemesine ele olmasa da, vücut ağırlığı ancak diyetler farklılıklardan çarpık olabilir SOD1-G93A hastalık başlangıcını ve ilerlemesini değerlendirmek için NS kombinasyon halinde kullanılabilir başka bir önlem olabilir ve ödem ya da etkisi neden olan terapötik seçebilirsiniz yağ metabolizması 11,12.
13 tezahür ve motor açıkları, NeuroScore tarafından yakalanan olmayan bir fenotip hindlimb olmayabilir. Bu protokolün bir başka sınırlaması için tasarlanmış ve yüksek kopya SOD1-G93A farelerin için geçerlidir olduğu gerçektir. Düşük kopya SOD1-G93A fare 14 veya TDP-43 fare 15,16 gibi tecrübemizle, ALS diğer fare modellerinde hastalığın klinik sunumu, içinde, yüksek kopya SOD1-G93A fareler ve bu NS sisteminde farklıdır Bu modeller için kötü uygun olabilir. Bu nedenle, bu çalışmalar atanarak önce farelerin transgen kopya sayısını belirlemek ve yüksek kopya pozitif kontrol farelerinin eşit olup olmadığını kontrol etmek önemlidir. Bize ne olursa olsun, yararlarıBu nörolojik skorlama sistemi ing sınırlamaları ağır basar ve bu video protokolü ALS araştırmacılar için mükemmel bir eğitim aracı olarak hizmet verebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur strain | The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME | 002726 | Strain of mice used in this study |
| Breeders | Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA | Colony maintainance | |
| Scale | Navigator OHAUS, Parsippany, NJ | Model N14120 | Used to weigh mice |
| Nutra-GelH | Bio-Serv, Flemington, NJ | #S4798 | Wet food provided to sick mice |
| Irradiated Lab Animal Diet | Harlan, Indianapolis, IN | 2918-111914M | Chow diet |
| Lab-grade Sani-chips | Harlan Teklad, Indianapolis, IN | 7090 | Bedding |
| JMPH | SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, NC | v10.0.2 | Statistical software |
| Microsoft Excel | Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA | Excel 2013 (v 15.0) | Spreadsheet software |
| GraphPad Prism 5 | GraphPad software Inc., La Jolla, CA | v5.4 | Graphing software |
| Mouse Huts | Bio-Serv, Flemington, NJ | K3272 | For environmental enrichment |
References
- Gurney, M. E., et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).
- Rosen, D. R., et al. Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis. Nature. 362 (6415), 59-62 (1993).
- Gurney, M. E. The use of transgenic mouse models of amyotrophic lateral sclerosis in preclinical drug studies. J Neurol Sci. 152, Suppl. 1 (6415), (1997).
- Scott, S., et al. Design, power, and interpretation of studies in the standard murine model of ALS. Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).
- Hegedus, J., Putman, C. T., Gordon, T. Time course of preferential motor unit loss in the SOD1 G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis. Neurobiol. Dis. 28 (2), 154-164 (2007).
- Gordon, T., Ly, V., Hegedus, J., Tyreman, N. Early detection of denervated muscle fibers in hindlimb muscles after sciatic nerve transection in wild type mice and in the G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis. Neurol. Res. 31 (1), 28-42 (2009).
- Gurney, M. E., et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).
- Kim, K., Moore, D. H., Makriyannis, A., Abood, M. E. AM1241, a cannabinoid CB2 receptor selective compound, delays disease progression in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis. Eur. J. Pharmacol. 542 (1-3), 1-3 (2006).
- Weydt, P., Hong, S. Y., Kliot, M., Moller, T. Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS. Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).
- Azari, M. F., et al. Behavioural and anatomical effects of systemically administered leukemia inhibitory factor in the SOD1(G93A G1H) mouse model of familial amyotrophic lateral sclerosis. Brain Res. 982 (1), 92-97 (2003).
- Guan, Y., et al. Thiazolidinediones expand body fluid volume through PPARgamma stimulation of ENaC-mediated renal salt absorption. Nat. Med. 11 (8), 861-866 (2005).
- Savcheniuk, O. A., et al. The effect of probiotic therapy on development of experimental obesity in rats caused by monosodium glutamate. Fiziol. Zh. 60 (2), 63-69 (2014).
- Smittkamp, S. E., Brown, J. W., Stanford, J. A. Time-course and characterization of orolingual motor deficits in B6SJL-Tg(SOD1-G93A)1Gur/J mice. Neuroscience. 151 (2), 613-621 (2008).
- C, M., Gurney, M. E. A low expressor line of transgenic mice carrying a mutant human Cu,Zn superoxide dismutase (SOD1) gene develops pathological changes that most closely resemble those in human amyotrophic lateral sclerosis. Acta Neuropathol. 93 (6), 537-550 (1997).
- Wegorzewska, I., Baloh, R. H. TDP-43-based animal models of neurodegeneration: new insights into ALS pathology and pathophysiology. Neurodegener. Dis. 8 (4), 262-274 (2011).
- Hatzipetros, T., et al. C57BL/6J congenic Prp-TDP43A315T mice develop progressive neurodegeneration in the myenteric plexus of the colon without exhibiting key features of ALS. Brain Res. 1584, 59-72 (2014).
