غير الجراحية التقطير داخل الرغامى من الفئران مع تحليل الرئتين والعقد الليمفاوية والرئة التي تصريف التدفق الخلوي
Summary
نحن لتوضيح غير الجراحية تسليم مواد الاختبار في الرئتين من الفئران تخدير عن طريق القصبة الهوائية. هذا الأسلوب يسمح الرئة التعرض لمسببات الأمراض البكتيرية والفيروسية ، السيتوكينات ، والأجسام المضادة ، والخرز ، والمواد الكيميائية ، أو الأصباغ. ونحن كذلك وصف حصاد وتجهيز الرئتين والعقد اللمفاوية استنزاف الرئة (LDLNs) لالتدفق الخلوي.
Abstract
الخلايا البلعمية السنخية مثل الضامة ، والخلايا الجذعية الرئة (أقل البلدان نموا) عينة من مولدات المضادات باستمرار المسافات السنخية في الرئتين. أقل البلدان نموا ، على وجه الخصوص ، ومن المعروف أن تهاجر إلى العقد اللمفية استنزاف الرئة (LDLNs) حيث يقدمون مستضدات استنشاقها لخلايا T المبادرة استجابة مناسبة في مأمن من مجموعة متنوعة من immunogens 1،2. لنموذج التفاعلات بين الرئتين ومولدات المضادات الجوية في الفئران ، ويمكن أن تدار الأنف مستضدات 1،3،4 ، intratracheally 5 أو 6 كما الهباء. تسليم كل مسار ينطوي على مهارات فنية متميزة والقيود التي يجب النظر فيها قبل تصميم التجربة. على سبيل المثال ، والتعرض للرذاذ الأنف والرئتين لمستضدات يسلم على حد سواء ، والجهاز التنفسي العلوي. وبالتالي يمكن الوصول إلى مستضدات الأنسجة اللمفاوية المرتبطة الأنف (NALT) 7 ، تعقيد يحتمل تفسير النتائج. بالإضافة إلى ذلك ، قد البلع ، والعطس ومعدل التنفس من الفأرة يؤدي أيضا إلى عدم الاتساق في جرعات تسليمها. رغم أنه قد يكون من المفضل اشتراك في الجهاز التنفسي العلوي لبعض الدراسات والتجارب التي يمكن أن تعقد مع التركيز على الأحداث بدأت تحديدا في الرئتين. في هذا الإعداد ، داخل الرغامى (عليه) هو الطريق الأفضل لأنها توفر مواد الاختبار مباشرة إلى الرئتين ويتجاوز NALT. العديد من بروتوكولات الحقن أنها تنطوي على التنبيب إما أعمى من القصبة الهوائية من خلال تجويف الفم أو التعرض الجراحية من القصبة الهوائية للوصول إلى الرئتين. هنا ، نحن تصف ، بما يتفق بسيطة وغير الجراحية لأنها طريقة تقطير. هو تصور فتح القصبة الهوائية باستخدام المنظار ، ويتم بعد ذلك إدخال إبرة عازمة بالتزقيم مباشرة في القصبة الهوائية للتربة من تسليم. وصفنا أيضا إجراءات للحصاد وتجهيز LDLNs والرئتين لتحليل الاتجار المستضد بواسطة التدفق الخلوي.
Protocol
Discussion
وقد استخدمت ونحن على هذا البروتوكول لدراسة الاتجار من عصيات الجمرة الخبيثة من الرئتين إلى LDLNs. لتطبيقات مماثلة ، يجب أن يكون عدد جزيئات تسليمها الى الرئتين يتم اختيارها بعناية بحيث يمكن الكشف عن مواد تحقن في LDLNs بواسطة التدفق الخلوي. لدينا أيضا استخدمت بنجاح هذه …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| 70μm Cell stariner | BD | ||
| Aniline Blue | Fisher | A967-25 | |
| Animal Feeding needle | Popper and Sons Inc | 7920 | |
| Collagenase | Sigma | C2139 | |
| Collagenase TypeIV | Worthington | ||
| Collagenase D | Roche | 11088974103 | |
| DPBS | Invitrogen | 14190 | |
| Fluoresbrite YG Microspheres (0.5μm) | Polysciences, Inc | 17152 | |
| HBSS without Calcium chloride and magnesium chloride | Invitrogen | 14170 | |
| Ketamine HCl (100mg/ml) | Hospira Inc | ||
| Laryngoscope Blade | PennCentury, Inc | For Model LS-1 | Refer to www.penncentury.com |
| Lightweight Fiber Optic Laryngoscope | WelchAllyn | 80814 | |
| Red Fluorescent Beads (0.5μm) | Invitrogen | F8812 | For i.p injection |
| Xylazine (100mg/ml) | Lloyd Laboratories |
References
- Grayson, M. H. Controls for lung dendritic cell maturation and migration during respiratory viral infection. J Immunol. 179, 1438-1438 (2007).
- GeurtsvanKessel, C. H., Lambrecht, B. N. Division of labor between dendritic cell subsets of the lung. Mucosal Immunol. 1, 442-442 (2008).
- Bar-Haim, E. Interrelationship between dendritic cell trafficking and Francisella tularensis dissemination following airway infection. PLoS Pathog. 4, e1000211-e1000211 (2008).
- Kim, T. S., Braciale, T. J. Respiratory dendritic cell subsets differ in their capacity to support the induction of virus-specific cytotoxic CD8+ T cell responses. PLoS One. 4, e4204-e4204 (2009).
- Bakocevic, N., Worbs, T., Davalos-Misslitz, A., Forster, R. T cell-dendritic cell interaction dynamics during the induction of respiratory tolerance and immunity. J Immunol. 184, 1317-1317 (2010).
- Thomas, R. J. Influence of particle size on the pathology and efficacy of vaccination in a murine model of inhalational anthrax. J Med Microbiol. , (2010).
- Kiyono, H., Fukuyama, S. NALT- versus Peyer’s-patch-mediated mucosal immunity. Nat Rev Immunol. 4, 699-699 (2004).
- Parungo, C. P. Lymphatic drainage of the peritoneal space: a pattern dependent on bowel lymphatics. Ann Surg Oncol. 14, 286-286 (2007).
- Jakubzick, C., Helft, J., Kaplan, T. J., Randolph, G. J. Optimization of methods to study pulmonary dendritic cell migration reveals distinct capacities of DC subsets to acquire soluble versus particulate antigen. J Immunol Methods. 337, 121-121 (2008).
- Higgins, D. M. Relative levels of M-CSF and GM-CSF influence the specific generation of macrophage populations during infection with Mycobacterium tuberculosis. J Immunol. 180, 4892-4892 (2008).
- Kool, M. Alum adjuvant boosts adaptive immunity by inducing uric acid and activating inflammatory dendritic cells. J Exp Med. 205, 869-869 (2008).
- Costa, D. L., Lehmann, J. R., Harold, W. M., Drew, R. T. Transoral tracheal intubation of rodents using a fiberoptic laryngoscope. Lab Anim Sci. 36, 256-256 (1986).
- Takahashi, S., Patrick, G. Patterns of lymphatic drainage to individual thoracic and cervical lymph nodes in the rat. Lab Anim. 21, 31-31 (1987).
- Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: Descriptive study and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J Immunol Methods. 312, 12-12 (2006).
