L'application de la ligature permanente artère cérébrale moyenne chez la souris
Summary
L'artère cérébrale moyenne (MCA) ligature est une technique pour étudier l'ischémie cérébrale focale chez des modèles animaux. Dans cette méthode, l'artère cérébrale moyenne est exposée par craniotomie et ligaturée par cautérisation. Cette méthode donne les volumes d'infarctus hautement reproductible et une augmentation des taux de survie post-opératoires par rapport aux autres méthodes disponibles.
Abstract
Ischémie cérébrale focale est parmi les plus fréquentes d'accident vasculaire cérébral chez les patients. En raison de la signification clinique, il ya eu un effort prolongé pour développer des modèles animaux appropriés pour étudier les événements qui se déroulent pendant l'insulte ischémique. Ces techniques comprennent transitoire ou permanent, des modèles d'ischémie focale ou globale à l'aide de nombreux modèles animaux différents, avec les rongeurs les plus communs étant.
La méthode la ligature permanente MCA qui est également désigné comme pMCAo dans la littérature est largement utilisé comme un modèle d'ischémie focale chez les rongeurs 1-6. Cette méthode a été initialement décrit pour le rat par Tamura et al. en 1981 7. Dans ce protocole une craniotomie a été utilisé pour accéder à la MCA et les régions proximales ont été occultées par électrocoagulation. L'infarctus impliquer les régions essentiellement corticale et parfois striés selon l'emplacement de l'occlusion. Cette technique est maintenant bien établi et utilisé dans de nombreux laboratoires 8-13. L'utilisation précoce de cette technique ont conduit à la définition et la description du «noyau d'infarctus» et «pénombre» 14-16, et il est souvent utilisé pour évaluer le potentiel des composés neuroprotecteurs 10, 12, 13, 17. Bien que les études initiales ont été effectuées chez le rat, la ligature permanente MCA a été utilisé avec succès chez la souris avec de légères modifications 18-20.
Ce modèle donne des infarctus reproductibles et augmenté les taux de survie après. Environ 80% des AVC ischémiques chez l'homme se produisent dans la région de MCA 21 et donc c'est un modèle très pertinent pour les études de course. Actuellement, il ya un manque de traitements efficaces disponibles pour les patients d'AVC, et il existe donc un besoin de bons modèles pour tester le potentiel des composés pharmacologiques et évaluer les résultats physiologiques. Cette méthode peut également être utilisé pour étudier les mécanismes intracellulaires de réponse hypoxie in vivo.
Ici, nous présentons la ligature MCA dans une souris C57/BL6. Nous décrivons la préparation pré-chirurgicale, la ligature MCA et 2,3,5 chlorure de triphényltétrazolium (TTC) coloration pour la quantification des volumes d'infarctus.
Protocol
Discussion
La méthode la ligature permanente MCA donne volumes d'infarctus hautement reproductible et une augmentation des taux de survie post-opératoires par rapport aux autres méthodes disponibles. La facilité et la courte durée (~ 30 min) de la procédure de la rendre encore plus pratique. La méthode est largement utilisée dans les souris et les rats.
Cette technique nécessite une chirurgie invasive sous un stéréomicroscope. Par conséquent, expérience dans l'exploitation sous un …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
La technique chirurgicale a été initialement acquis dans le laboratoire du Dr William D. Hill au Medical College of Georgia. Les auteurs tiennent également à remercier le Dr David A. Rempe et Landa Prifti pour l'utilisation de la caméra de dissection. Cette recherche a été financée par le NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 et AHA 30815697D.
Materials
| NAME | COMPANY AND CATALOGUE NUMBER |
|---|---|
| A. Solutions and Chemicals | |
| Povidone-Iodine Solution, Surgical Scrub | Aplicare, 82-209 |
| 70% Ethanol | Koptec, V1001 |
| 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma, T8877 |
| 4% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences, 159SP |
| Phosphate Buffered Saline, pH:7.4 | Made and sterilized in the lab. |
| Mineral Oil | PML Microbiologicals, R6570 |
| Isofluorane | The Butler Company, 029405 |
| Buprenorphine (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 |
| Artificial tears | The Butler Company, 007312 |
| Recovery Gel | Clear H2O, 72-01-5022 |
| B. Surgical Materials and Equipment | |
| C57/BL6 mouse, 10-12 weeks old | The colony was bred in the university vivarium |
| 100% oxygen tank | Airgas |
| Anesthetic Vaporizer and Flow meter | Surgivet, Model 100 |
| Heating Pad with Rectal Probe | Fine Science Tools, TR200 |
| Dissecting microscope | Zeiss, Stemi 2000 |
| Heating panel | Petco Services Ltd. 0307-013 |
| Small Vessel Cauterizer Set | Fine Science Tools, 18000-00 |
| Mini Peristaltic Pump | Harvard Apparatus, MPII |
| 1ml syringe | BD, 329650 |
| 18G needle | Becton Dickinson, 305196 |
| Surgical 5.0 Nylon Suture | Ethilon, 698H |
| Sectioning Block | Kent Scientific, 1mm |
| Single Edge Razor Blades | Electron Microscopy Sciences, 71962 |
| Label Tape | Scienceware, Bel-art Products F13463-2075 |
| Gauze Sponges | Kendall Curity 2252, Johnson and Johnson 6415 |
| Cotton Tip Applicators | Puritan 806-WCL |
| C. Surgery Tools | |
| Surgical Spring Scissors | Fine Science Tools 15003-08 |
| Microdissecting forceps angled | Fine Science Tools 5/45 |
| Microdissecting forceps curved | Fine Science Tools 5 Ti |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools 14568-12 |
| Curved bone rongeur | Fine Science Tools 16021-14 |
| Hartman Hemostat Curved | Fine Science Tools 13003-10 |
Table 1. The list of materials, tools and chemicals used for the MCA ligation procedure. A. Solutions and Chemicals, B. Surgical Materials and Equipment, C. Surgery Tools.
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