L'applicazione di permanente legatura dell'arteria cerebrale media nel mouse
Summary
Dell'arteria cerebrale media (MCA) legatura è una tecnica per lo studio ischemia cerebrale focale in modelli animali. In questo metodo, l'arteria cerebrale media è esposta da craniotomia e legato da cauterizzazione. Questo metodo dà volumi infarto altamente riproducibili e un aumento post-operatorio tassi di sopravvivenza rispetto ad altri metodi disponibili.
Abstract
Ischemia cerebrale focale è tra il tipo più comune di ictus osservato nei pazienti. A causa della rilevanza clinica c'è stato un lungo lavoro per sviluppare modelli animali adatti a studiare gli eventi che si svolgono durante l'insulto ischemico. Queste tecniche sono transitori o permanenti, i modelli di ischemia focale o globale usando molti diversi modelli animali, con i roditori più comuni sono.
Il metodo di legatura permanente MCA, che viene anche definito come pMCAo in letteratura è ampiamente utilizzato come modello di ischemia focale nei roditori 1-6. Questo metodo è stato originariamente descritto per i ratti da Tamura et al. nel 1981 7. In questo protocollo una craniotomia è stato utilizzato per accedere alla MCA e le regioni prossimali sono state occluse da elettrocoagulazione. Il infarti coinvolgere soprattutto le regioni corticali e striatali volte a seconda della posizione della occlusione. Questa tecnica è ormai ben consolidata e utilizzata in molti laboratori 8-13. L'uso precoce di questa tecnica ha portato alla definizione e descrizione del "core infarto" e "penombra" 14-16, ed è spesso utilizzata per valutare il potenziale neuroprotettivo composti 10, 12, 13, 17. Anche se gli studi iniziali sono stati condotti nel ratto, legatura permanente MCA è stato utilizzato con successo nei topi con lievi modifiche 18-20.
Questo modello produce infarti riproducibile e un aumento post-tassi di sopravvivenza. Circa l'80% degli ictus ischemico negli esseri umani avvengono in zona MCA 21 e quindi questo è un modello molto importante per gli studi di ictus. Attualmente, c'è una scarsità di trattamenti efficaci a disposizione dei pazienti colpiti da ictus, e quindi c'è bisogno di buoni modelli per testare potenziali composti farmacologici e valutare i risultati fisiologici. Questo metodo può essere utilizzato anche per studiare i meccanismi intracellulari di risposta all'ipossia in vivo.
Qui, vi presentiamo l'intervento legatura MCA in un mouse C57/BL6. Descriviamo la preparazione pre-chirurgica, la chirurgia legatura MCA e 2,3,5 trifeniltetrazolio cloruro (TTC) colorazione per la quantificazione dei volumi di infarto.
Protocol
Discussion
Il metodo di legatura permanente MCA dà volumi infarto altamente riproducibili e un aumento post-operatorio tassi di sopravvivenza rispetto ad altri metodi disponibili. La facilità e la breve durata (~ 30 min) della procedura di renderlo ancora più pratico. Il metodo è ampiamente utilizzato sia in topi e ratti.
Questa tecnica richiede un intervento chirurgico invasivo sotto uno stereomicroscopio. Pertanto, l'esperienza nella gestione sotto un microscopio e perfezionare una craniotomi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
La tecnica chirurgica è stata originariamente acquisite nel laboratorio del Dr. William D. Hill presso il Medical College of Georgia. Gli autori desiderano inoltre ringraziare il dottor David A. Rempe e Landa Prifti per l'utilizzo della fotocamera dissezione. Questa ricerca è stata sostenuta da NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 e AHA 30815697D.
Materials
| NAME | COMPANY AND CATALOGUE NUMBER |
|---|---|
| A. Solutions and Chemicals | |
| Povidone-Iodine Solution, Surgical Scrub | Aplicare, 82-209 |
| 70% Ethanol | Koptec, V1001 |
| 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma, T8877 |
| 4% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences, 159SP |
| Phosphate Buffered Saline, pH:7.4 | Made and sterilized in the lab. |
| Mineral Oil | PML Microbiologicals, R6570 |
| Isofluorane | The Butler Company, 029405 |
| Buprenorphine (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 |
| Artificial tears | The Butler Company, 007312 |
| Recovery Gel | Clear H2O, 72-01-5022 |
| B. Surgical Materials and Equipment | |
| C57/BL6 mouse, 10-12 weeks old | The colony was bred in the university vivarium |
| 100% oxygen tank | Airgas |
| Anesthetic Vaporizer and Flow meter | Surgivet, Model 100 |
| Heating Pad with Rectal Probe | Fine Science Tools, TR200 |
| Dissecting microscope | Zeiss, Stemi 2000 |
| Heating panel | Petco Services Ltd. 0307-013 |
| Small Vessel Cauterizer Set | Fine Science Tools, 18000-00 |
| Mini Peristaltic Pump | Harvard Apparatus, MPII |
| 1ml syringe | BD, 329650 |
| 18G needle | Becton Dickinson, 305196 |
| Surgical 5.0 Nylon Suture | Ethilon, 698H |
| Sectioning Block | Kent Scientific, 1mm |
| Single Edge Razor Blades | Electron Microscopy Sciences, 71962 |
| Label Tape | Scienceware, Bel-art Products F13463-2075 |
| Gauze Sponges | Kendall Curity 2252, Johnson and Johnson 6415 |
| Cotton Tip Applicators | Puritan 806-WCL |
| C. Surgery Tools | |
| Surgical Spring Scissors | Fine Science Tools 15003-08 |
| Microdissecting forceps angled | Fine Science Tools 5/45 |
| Microdissecting forceps curved | Fine Science Tools 5 Ti |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools 14568-12 |
| Curved bone rongeur | Fine Science Tools 16021-14 |
| Hartman Hemostat Curved | Fine Science Tools 13003-10 |
Table 1. The list of materials, tools and chemicals used for the MCA ligation procedure. A. Solutions and Chemicals, B. Surgical Materials and Equipment, C. Surgery Tools.
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