マウスの永久中大脳動脈結紮の応用
Summary
中大脳動脈（MCA）ライゲーションは、動物モデルでの局所脳虚血を研究する技術です。この方法では、中大脳動脈は開頭術によって公開されており、焼灼によって連結した。このメソッドは、非常に再現性の梗塞量と利用可能な他の方法に比べて増加した術後の生存率を与える。
Abstract
局所脳虚血は、患者に見られる脳卒中の最も一般的なタイプのひとつです。臨床的意義による虚血性傷害の間に展開するイベントを研究するために適切な動物モデルを開発するための長期の努力がなされている。これらの技術は、最も一般的なげっ歯類で、多くの異なる動物モデルを用いて一時的または永続的な、局所またはグローバル虚血モデルが含まれています。
また、文献でpMCAoと呼ばれる永久的なMCAのライゲーション法は、げっ歯類1-6の局所的虚血モデルとして広く使用されています。このメソッドは当初、田村らによりラットに記述されていた。 1981年7インチこのプロトコルでは開頭はMCAにアクセスするために使用され、近位領域は、電気凝固法によって閉塞させた。梗塞は閉塞の位置に応じて、主に皮質と時々線条体領域を含む。この手法は、今や十分に確立し、多くの研究室8-13に使用されています。この技術の早期使用は、"梗塞コア"と"半影"14から16の定義と記述につながった、とそれはしばしば潜在的な神経保護化合物10、12、13、17を評価するために使用されます。初期の研究はラットで行われたが、恒久的なMCAの結紮は、若干の修正18から20を有するマウスで正常に使用されています。
このモデルは、再現性梗塞と増加後の生存率が得られます。ヒトの虚血性脳卒中の約80％は、MCA領域21で発生するので、これは、脳卒中の研究のために非常に関連したモデルです。現在、脳卒中患者が利用できる効果的な治療の不足があるため、潜在的な薬理学的化合物をテストし、生理学的アウトカムを評価する良いモデルが必要である。このメソッドは、 生体内でも細胞内の低酸素応答のメカニズムを研究するために使用することができます。
ここで、我々は、C57/BL6マウスにおけるMCAの結紮術を紹介。我々は術前準備、MCAの結紮術および梗塞体積の定量化のための2,3,5塩化トリフェニルテトラゾリウム（TTC）染色を説明します。
Protocol
このプロトコルは、研究における動物の倫理的な使用（UCAR）に捧げられたロチェスター委員会の大学により承認された。無菌技術は、プロトコル中に従うべきである。滅菌手袋とマスクを使用する必要があります。 すべての機器、材料、化学物質、およびプロトコル中に使用されるツールは、表1で説明されています。 1。術前準備最初の24?…
Discussion
永久的なMCAのライゲーション法は再現性の高い梗塞量と利用可能な他の方法に比べて増加した術後の生存率を与える。手続きの容易さと、短い期間（〜30分）は、さらに実践的なもの。法が広く、マウスとラットの両方で使用されています。
この手法は、実体顕微鏡下低侵襲手術が必要になります。そのため、顕微鏡下で動作し、成功した開頭術を完璧に経験が不可欠で…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
手術手技は、もともとはジョージア医科大学の博士ウィリアムD.ヒルの研究室に買収された。また、作者は解剖のカメラの使用のためにデビッドA. RempeとランダPriftiを感謝したいと思います。この研究はNIH NS041744、NS051279、F31 NS064700とAHA 30815697Dによってサポートされていました。
Materials
| NAME | COMPANY AND CATALOGUE NUMBER |
|---|---|
| A. Solutions and Chemicals | |
| Povidone-Iodine Solution, Surgical Scrub | Aplicare, 82-209 |
| 70% Ethanol | Koptec, V1001 |
| 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma, T8877 |
| 4% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences, 159SP |
| Phosphate Buffered Saline, pH:7.4 | Made and sterilized in the lab. |
| Mineral Oil | PML Microbiologicals, R6570 |
| Isofluorane | The Butler Company, 029405 |
| Buprenorphine (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 |
| Artificial tears | The Butler Company, 007312 |
| Recovery Gel | Clear H2O, 72-01-5022 |
| B. Surgical Materials and Equipment | |
| C57/BL6 mouse, 10-12 weeks old | The colony was bred in the university vivarium |
| 100% oxygen tank | Airgas |
| Anesthetic Vaporizer and Flow meter | Surgivet, Model 100 |
| Heating Pad with Rectal Probe | Fine Science Tools, TR200 |
| Dissecting microscope | Zeiss, Stemi 2000 |
| Heating panel | Petco Services Ltd. 0307-013 |
| Small Vessel Cauterizer Set | Fine Science Tools, 18000-00 |
| Mini Peristaltic Pump | Harvard Apparatus, MPII |
| 1ml syringe | BD, 329650 |
| 18G needle | Becton Dickinson, 305196 |
| Surgical 5.0 Nylon Suture | Ethilon, 698H |
| Sectioning Block | Kent Scientific, 1mm |
| Single Edge Razor Blades | Electron Microscopy Sciences, 71962 |
| Label Tape | Scienceware, Bel-art Products F13463-2075 |
| Gauze Sponges | Kendall Curity 2252, Johnson and Johnson 6415 |
| Cotton Tip Applicators | Puritan 806-WCL |
| C. Surgery Tools | |
| Surgical Spring Scissors | Fine Science Tools 15003-08 |
| Microdissecting forceps angled | Fine Science Tools 5/45 |
| Microdissecting forceps curved | Fine Science Tools 5 Ti |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools 14568-12 |
| Curved bone rongeur | Fine Science Tools 16021-14 |
| Hartman Hemostat Curved | Fine Science Tools 13003-10 |
Table 1. The list of materials, tools and chemicals used for the MCA ligation procedure. A. Solutions and Chemicals, B. Surgical Materials and Equipment, C. Surgery Tools.
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Cite This Article
Colak, G., Filiano, A. J., Johnson, G. V. The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse. J. Vis. Exp. (53), e3039, doi:10.3791/3039 (2011).