Die Anwendung des dauerhaften mittleren Hirnarterie Ligation in der Maus
Summary
A. cerebri media (MCA) Ligation ist eine Technik, fokaler zerebraler Ischämie im Tiermodell zu studieren. Bei dieser Methode ist die mittlere Hirnarterie durch Kraniotomie freigelegt und ligiert durch Kauterisation. Diese Methode liefert gut reproduzierbare Infarktvolumen und erhöhte postoperative Überlebensrate im Vergleich zu anderen Methoden zur Verfügung.
Abstract
Fokaler zerebraler Ischämie ist eine der häufigsten Form des Schlaganfalls bei Patienten gesehen. Durch die klinische Bedeutung hat es eine längere Anstrengung, um geeignete Tiermodelle zu entwickeln, um die Ereignisse, die während der ischämischen Insult entfalten Studie. Diese Techniken umfassen vorübergehend oder bleibend, fokale oder globale Ischämie Modelle mit vielen verschiedenen Tiermodellen, die häufigsten sind Nagetiere.
Die permanente MCA Ligationsmethode die auch als pMCAo ist in der Literatur wird weitgehend als fokale Ischämie-Modell in Nagetieren 1-6 verwendeten. Diese Methode wurde ursprünglich für die Ratten durch Tamura et al. im Jahr 1981 sieben. In diesem Protokoll eine Kraniotomie wurde verwendet, um Zugriff auf die MCA und der proximalen Regionen durch Elektrokoagulation waren verschlossen. Die Infarkte betreffen meist kortikale und manchmal striatalen Regionen, je nach Lage der Okklusion. Diese Technik ist inzwischen gut etabliert und wird in vielen Labors 8-13. Der frühe Einsatz dieser Technik führte zur Definition und Beschreibung von "Infarktkern" und "Penumbra" 14-16, und es wird oft benutzt, um potenzielle neuroprotektive Verbindungen 10, 12, 13, 17 zu bewerten. Obwohl die anfänglichen Studien an Ratten durchgeführt wurden, hat permanent MCA Ligation erfolgreich an Mäusen mit leichten Modifikationen 18-20 verwendet.
Dieses Modell liefert reproduzierbare Infarkte und eine erhöhte post-Überlebensraten. Etwa 80% der ischämischen Schlaganfälle bei Menschen in der MCA Bereich 21 passieren und somit ist dies ein sehr wichtiges Modell für Schlaganfall-Studien. Derzeit gibt es einen Mangel an wirksamen Therapien zur Verfügung Schlaganfall-Patienten, und somit gibt es einen Bedarf für gute Modelle, um potenzielle pharmakologische Verbindungen testen und zu evaluieren physiologische Ergebnisse. Diese Methode kann auch für die intrazelluläre Hypoxie Reaktionsmechanismen in vivo verwendet werden.
Hier präsentieren wir die MCA Ligation Operation in einem C57/BL6 Maus. Wir beschreiben die präoperative Vorbereitung, MCA Ligation Chirurgie und 2,3,5 Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC)-Färbung für die Quantifizierung der Infarktgröße Bände.
Protocol
Discussion
Die permanente MCA Ligationsmethode gibt gut reproduzierbare Infarktvolumen und erhöhte postoperative Überlebensrate im Vergleich zu anderen Methoden zur Verfügung. Die Leichtigkeit und der kurzen Dauer (~ 30 min) des Verfahrens machen es noch praktischer. Die Methode ist weit verbreitet in Mäusen und Ratten verwendet.
Diese Technik erfordert einen invasiven Chirurgie unter einem Stereomikroskop. Deshalb ist Erfahrung im Betrieb unter einem Mikroskop und Perfektionierung einer erfolgreic…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die chirurgische Technik wurde ursprünglich im Labor von Dr. William D. Hill am Medical College of Georgia erworben. Die Autoren möchten auch Dr. David A. Rempe und Landa Prifti für die Nutzung der Dissektion Kamera danken. Diese Arbeit wurde vom NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 und AHA 30815697D unterstützt.
Materials
| NAME | COMPANY AND CATALOGUE NUMBER |
|---|---|
| A. Solutions and Chemicals | |
| Povidone-Iodine Solution, Surgical Scrub | Aplicare, 82-209 |
| 70% Ethanol | Koptec, V1001 |
| 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma, T8877 |
| 4% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences, 159SP |
| Phosphate Buffered Saline, pH:7.4 | Made and sterilized in the lab. |
| Mineral Oil | PML Microbiologicals, R6570 |
| Isofluorane | The Butler Company, 029405 |
| Buprenorphine (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 |
| Artificial tears | The Butler Company, 007312 |
| Recovery Gel | Clear H2O, 72-01-5022 |
| B. Surgical Materials and Equipment | |
| C57/BL6 mouse, 10-12 weeks old | The colony was bred in the university vivarium |
| 100% oxygen tank | Airgas |
| Anesthetic Vaporizer and Flow meter | Surgivet, Model 100 |
| Heating Pad with Rectal Probe | Fine Science Tools, TR200 |
| Dissecting microscope | Zeiss, Stemi 2000 |
| Heating panel | Petco Services Ltd. 0307-013 |
| Small Vessel Cauterizer Set | Fine Science Tools, 18000-00 |
| Mini Peristaltic Pump | Harvard Apparatus, MPII |
| 1ml syringe | BD, 329650 |
| 18G needle | Becton Dickinson, 305196 |
| Surgical 5.0 Nylon Suture | Ethilon, 698H |
| Sectioning Block | Kent Scientific, 1mm |
| Single Edge Razor Blades | Electron Microscopy Sciences, 71962 |
| Label Tape | Scienceware, Bel-art Products F13463-2075 |
| Gauze Sponges | Kendall Curity 2252, Johnson and Johnson 6415 |
| Cotton Tip Applicators | Puritan 806-WCL |
| C. Surgery Tools | |
| Surgical Spring Scissors | Fine Science Tools 15003-08 |
| Microdissecting forceps angled | Fine Science Tools 5/45 |
| Microdissecting forceps curved | Fine Science Tools 5 Ti |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools 14568-12 |
| Curved bone rongeur | Fine Science Tools 16021-14 |
| Hartman Hemostat Curved | Fine Science Tools 13003-10 |
Table 1. The list of materials, tools and chemicals used for the MCA ligation procedure. A. Solutions and Chemicals, B. Surgical Materials and Equipment, C. Surgery Tools.
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