마우스에 영구 중간 대뇌 동맥 내고의 응용
Summary
중간 대뇌 동맥 (MCA) 내고 동물 모델에 초점 대뇌 국소 빈혈을 연구하는 기술입니다. 이 방법에서는, 중간 대뇌 동맥 craniotomy에 의해 노출 소작된에 의해 출혈도 잡았. 이 방법은 높은 재현성 경색 볼륨과 사용 가능한 다른 방법에 비해 증가 이후 수술 생존 속도를 제공합니다.
Abstract
초점 대뇌 국소 빈혈 환자에서 볼 뇌졸중의 가장 일반적인 유형 중 하나입니다. 때문에 임상 중요성에 허혈성 모욕하는 동안 펼쳐 이벤트를 연구하기 위해 적절한 동물 모델을 개발하기 위해 장기간 노력하고있다. 이러한 기법은 가장 일반되는 설치류와 다양한 동물 모델을 사용하여 과도하거나 영구적인 초점 또는 글로벌 국소 빈혈 모델을 포함합니다.
또한 문학 pMCAo로 불리는 영구 MCA의 결합 방법은 설치류 1-6에 초점 국소 빈혈 모델로 광범위하게 사용됩니다. 이 방법은 원래 타무라 외 의해 쥐에 대해 설명했다. 1981 7인치 이 프로토콜에서는 craniotomy은 MCA와 근위 지역이 electrocoagulation에 의해 occluded되었습니다 액세스하는 데 사용되었다. infarcts는 폐색의 위치에 따라 대부분 피질과 때로는 striatal 지역을 포함하고 있습니다. 이 기술은 이제 잘 설립하여 많은 실험실 8-13에서 사용됩니다. 이 기술의 조기 사용 "경색 코어"와 "penumbra"14-16의 정의 및 설명을 주도하고, 그것은 종종 잠재 neuroprotective 화합물 10, 12, 13, 17을 평가하는 데 사용됩니다. 초기 연구는 쥐에서 수행 되었으나, 영구 MCA의 결합은 약간의 수정을 18-20로 생쥐에서 성공적으로 사용되었습니다.
이 모델은 재현성 infarcts 증가 후 생존 속도를 산출. 인간의 허혈성 뇌졸중의 약 80 %가 MCA 지역 21 일이되므로이 뇌졸중 연구의 관련성이 매우 모델입니다. 현재 뇌졸중 환자에 사용할 효과적인 치료법의 소수가, 따라서 잠재적인 약리 화합물을 테스트하고 생리적 결과를 평가하는 좋은 모델 필요가있다. 이 방법은 생체내 세포에서 hypoxia 응답 메커니즘을 연구하고 사용할 수 있습니다.
여기, 우리는 C57/BL6 마우스에서 MCA의 내고 수술을 제시한다. 우리는 미리 수술 준비, MCA의 결합 수술과 경색 볼륨 부량 위해 2,3,5 Triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 얼룩을 설명합니다.
Protocol
Discussion
영구 MCA의 결합 방법은 높은 재현성 경색 볼륨과 사용 가능한 다른 방법에 비해 증가 이후 수술 생존 속도를 제공합니다. 절차의 간편하고 짧은 기간 (~ 30 분)는 더욱 실용적합니다. 방법은 널리 마우스 및 쥐 모두에서 사용됩니다.
이 기술은 stereomicroscope 아래 침략 수술을 필요로합니다. 따라서 현미경으로 운영하고 성공적인 craniotomy을 완성 경험이 필수적입니다. 실험이 수?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
수술 기술은 원래 조지아 메디컬 대학에서 박사 윌리엄 D. 힐의 연구실에 인수되었다. 저자는 또한 절개 카메라의 사용에 대한 데이빗 A. Rempe 및 란다 Prifti 감사하고 싶습니다. 이 연구는 NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 및 AHA 30815697D 지원했다.
Materials
| NAME | COMPANY AND CATALOGUE NUMBER |
|---|---|
| A. Solutions and Chemicals | |
| Povidone-Iodine Solution, Surgical Scrub | Aplicare, 82-209 |
| 70% Ethanol | Koptec, V1001 |
| 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma, T8877 |
| 4% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences, 159SP |
| Phosphate Buffered Saline, pH:7.4 | Made and sterilized in the lab. |
| Mineral Oil | PML Microbiologicals, R6570 |
| Isofluorane | The Butler Company, 029405 |
| Buprenorphine (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 |
| Artificial tears | The Butler Company, 007312 |
| Recovery Gel | Clear H2O, 72-01-5022 |
| B. Surgical Materials and Equipment | |
| C57/BL6 mouse, 10-12 weeks old | The colony was bred in the university vivarium |
| 100% oxygen tank | Airgas |
| Anesthetic Vaporizer and Flow meter | Surgivet, Model 100 |
| Heating Pad with Rectal Probe | Fine Science Tools, TR200 |
| Dissecting microscope | Zeiss, Stemi 2000 |
| Heating panel | Petco Services Ltd. 0307-013 |
| Small Vessel Cauterizer Set | Fine Science Tools, 18000-00 |
| Mini Peristaltic Pump | Harvard Apparatus, MPII |
| 1ml syringe | BD, 329650 |
| 18G needle | Becton Dickinson, 305196 |
| Surgical 5.0 Nylon Suture | Ethilon, 698H |
| Sectioning Block | Kent Scientific, 1mm |
| Single Edge Razor Blades | Electron Microscopy Sciences, 71962 |
| Label Tape | Scienceware, Bel-art Products F13463-2075 |
| Gauze Sponges | Kendall Curity 2252, Johnson and Johnson 6415 |
| Cotton Tip Applicators | Puritan 806-WCL |
| C. Surgery Tools | |
| Surgical Spring Scissors | Fine Science Tools 15003-08 |
| Microdissecting forceps angled | Fine Science Tools 5/45 |
| Microdissecting forceps curved | Fine Science Tools 5 Ti |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools 14568-12 |
| Curved bone rongeur | Fine Science Tools 16021-14 |
| Hartman Hemostat Curved | Fine Science Tools 13003-10 |
Table 1. The list of materials, tools and chemicals used for the MCA ligation procedure. A. Solutions and Chemicals, B. Surgical Materials and Equipment, C. Surgery Tools.
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