Das Protokoll beschreibt den gezielten Knockdown der Genexpression bei Zebrafischen durch Morpholino-Injektion im Schwanz.
Protocol
1. Morpholino-Injektion Am Tag vor der Injektion des Morpholino, machen Sie eine Injektionsplatte (Abbildung 1). Achten Sie darauf, eine Kerbe an einem Ende des Brunnens auszuschneiden, was hilft, den Fisch für das Mikroinjektionsverfahren zu stabilisieren. Das fluorescein-markierte Morpholino auf die richtige Konzentration (empfohlen ab 1,2 mM) verdünnen und 5 Minuten in ein 65 °C-Wasserbad geben. Laden Sie die Nadel mit dem Morpholino(Hinweis:</…
Representative Results
Abbildung 1. A. Schematische der Injektionsplatte, die aus Agarose hergestellt wird und einen kleinen Brunnen enthält, um den Fisch während der Mikroinjektion des Morpholinos zu halten. Abbildung 2. Schematische Morpholino-Mikroinjektion. A. Legen Sie den Fisch in das Gerich…
Materials
Morpholino
GeneTools, LLC
Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump
World Precision Instruments, Inc.
PV830
Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator
World Precision Instruments, Inc.
MMJR
Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter
World Precision Instruments, Inc.
1B100F-4
These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder
World Precision Instruments, Inc.
5430-ALL
Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller
Sutter Instrument Co.
P-97
Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope
Leica, Nikon, Zeiss
Number varies depending on the manufacturer
Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol
Sigma-Aldrich
77861-1L
Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).