Morpholino инъекции: метод нокдаун Целевой экспрессии генов для изучения функции в Зебрафиш

Abstract

Источник: Хайд Д.Р. и др. In vivo Электропорация Morpholinos в регенерирующих взрослых Зебрафиш Хвост Fin. J. Vis. Exp. (2012)

Протокол описывает целевой нокдаун экспрессии генов у зебры путем инъекции морфолино в хвост.

Protocol

1. Инъекция Морфолино За день до введения морфолино сделайте инъекционной пластины(рисунок 1). Убедитесь в том, чтобы вырезать выемку на одном конце хорошо, что помогает стабилизировать рыбу для микроинъекции процедуры. Разбавить морфолино с тегами флуореск…

Representative Results

Рисунок 1. A. Схема инъекционной пластины, которая изготовлена из агарозы и содержит небольшой колодец для удержания рыбы во время микроинъекции морфолино. Рисунок 2.</s…

Materials

Morpholino	GeneTools, LLC		Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump	World Precision Instruments, Inc.	PV830	Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator	World Precision Instruments, Inc.	MMJR	Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter	World Precision Instruments, Inc.	1B100F-4	These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder	World Precision Instruments, Inc.	5430-ALL	Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller	Sutter Instrument Co.	P-97	Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope	Leica, Nikon, Zeiss	Number varies depending on the manufacturer	Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol	Sigma-Aldrich	77861-1L	Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia