הזרקת מורפולינו: שיטה להפלת ביטוי גנים היעד ללמוד פונקציה ב Zebrafish
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: הייד D.R., ואח ‘. בתוך vivo אלקטרופולציה של Morpholinos לתוך סנפיר זברה למבוגרים מתחדשת. ג’יי ויס אקספ. (2012)
הפרוטוקול מתאר הפלה ממוקדת של ביטוי גנים בזברה על ידי הזרקת מורפולינו בזנב.
Protocol
1. הזרקת מורפולינו יום לפני הזרקת המורפולינו, הכינו צלחת הזרקה (איור 1). הקפד לחתוך חריץ בקצה אחד של הבאר, אשר מסייע לייצב את הדגים עבור הליך microinjection. מדללים את המורפולינו המתויג בפלואורסצנטין לריכוז הנכון (ממליצים להתחיל עם 1.2 מ”מ) ומניחים באמבט מים של 65 מעלות צלז…
Representative Results
איור 1. א. סכמטי של צלחת ההזרקה, אשר עשוי agarose ומכיל באר קטנה להחזיק את הדגים במהלך microinjection של מורפולינו. איור 2. סכמטי של מיקרו-לינקציה של מורפולינו. א. מניח…
Materials
| Morpholino | GeneTools, LLC | Morpholino should be custom designed to your protein of interest | |
| Micro-injection pump | World Precision Instruments, Inc. | PV830 | Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used |
| Micro-manipulator | World Precision Instruments, Inc. | MMJR | Right-handed (MMJL for lefthanded) |
| Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-4 | These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle |
| Needle holder | World Precision Instruments, Inc. | 5430-ALL | Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket |
| Needle puller | Sutter Instrument Co. | P-97 | Other micropipette/needle pullers should also work |
| Microscope | Leica, Nikon, Zeiss | Number varies depending on the manufacturer | Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators |
| 2-Phenoxyethanol | Sigma-Aldrich | 77861-1L | Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia |
Citar este artículo
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).