Protokol, zebra balıklarındaki gen ekspresyonunun kuyruğa morfosin enjeksiyonu ile hedefli olarak nakavt edildiğini açıklar.
Protocol
1. Morfosin Enjeksiyonu Morfolinin enjekte edilmeden bir gün önce, bir enjeksiyon plakası yapın (Şekil 1). Kuyunun bir ucunda, mikroenjeksiyon prosedürü için balığı stabilize etmeye yardımcı olan bir çentik kestiğinize emin olun. Floresan etiketli morfoinoyu uygun konsantrasyonda seyreltin (1,2 mM ile başlamanızı tavsiye eder) ve 5 dakika boyunca 65 °C’lik bir su banyosuna yerleştirin. İğneyi morfoino ile yükleyin(not:…
Representative Results
Şekil 1. A. Agarose’dan yapılan ve morfotin mikroenjeksiyonu sırasında balığı tutmak için küçük bir kuyu içeren enjeksiyon plakasının şeması. Şekil 2. Morfotin mikroenjeksiyon şeması. A. Balıkları, balığın sabit kalmasına yardımcı olacak şekilde kuy…
Materials
Morpholino
GeneTools, LLC
Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump
World Precision Instruments, Inc.
PV830
Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator
World Precision Instruments, Inc.
MMJR
Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter
World Precision Instruments, Inc.
1B100F-4
These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder
World Precision Instruments, Inc.
5430-ALL
Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller
Sutter Instrument Co.
P-97
Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope
Leica, Nikon, Zeiss
Number varies depending on the manufacturer
Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol
Sigma-Aldrich
77861-1L
Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).