הפרוטוקול מתאר הפלה ממוקדת של ביטוי גנים בזברה על ידי הזרקת מורפולינו בזנב.
Protocol
1. הזרקת מורפולינו יום לפני הזרקת המורפולינו, הכינו צלחת הזרקה (איור 1). הקפד לחתוך חריץ בקצה אחד של הבאר, אשר מסייע לייצב את הדגים עבור הליך microinjection. מדללים את המורפולינו המתויג בפלואורסצנטין לריכוז הנכון (ממליצים להתחיל עם 1.2 מ”מ) ומניחים באמבט מים של 65 מעלות צלז…
Representative Results
איור 1. א. סכמטי של צלחת ההזרקה, אשר עשוי agarose ומכיל באר קטנה להחזיק את הדגים במהלך microinjection של מורפולינו. איור 2. סכמטי של מיקרו-לינקציה של מורפולינו. א. מניח…
Materials
Morpholino
GeneTools, LLC
Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump
World Precision Instruments, Inc.
PV830
Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator
World Precision Instruments, Inc.
MMJR
Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter
World Precision Instruments, Inc.
1B100F-4
These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder
World Precision Instruments, Inc.
5430-ALL
Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller
Sutter Instrument Co.
P-97
Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope
Leica, Nikon, Zeiss
Number varies depending on the manufacturer
Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol
Sigma-Aldrich
77861-1L
Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).