Transdução para Rotular células tumorais PDX: Introduzindo lentivírus expressando marcador fluorescente na célula tumoral in vitro
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hanna, C., et al. Rotulagem de Xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama com repórteres rastreáveis para estudos de crescimento de tumores e metástase. J. Vis. Exp. (2016).
O vídeo a seguir descreve uma técnica de transdução para rotular (xenoenxertos derivados do paciente) células tumorais PDX, que é usada para introduzir lentivírus expressando proteína verde-fluorescente e repórteres de luciferase na célula tumoral in vitro.
Protocol
1. Transdução de células tumorais derivadas do PDX Centrífuga dissociada células tumorais a 300 g x 5 min e resuspend em mídia mammosfera de 2 ml. Conte células viáveis usando exclusão azul trypan (Resuspend células digeridas em tampão de lavagem de 5 ml e conte células viáveis e não viáveis usando exclusão azul trypan. Resumidamente, misture 50 μl de células e 50 μl de azul trypan e conte células de exceção trypan-azul usando um hemótmetro). Prepare 10 ml de mídia de mammosfer…
Representative Results
Figura 1: Rastreamento da Eficiência de Transdução em Células PDX Dissociadas. A) Células dissociadas por PDX enriquecidas para células epiteliais humanas (esgotamento de Lin+) 24 horas após a transdução com partículas lentiviras pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro. B) Células dissociadas pDX de um experimento separado, sem enriquecimento celular epitelial, 72 horas após a transdução…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Citar este artículo
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).