Transducción para etiquetar células tumorales PDX: Introducción de Lentivirus que expresa marcador fluorescente en la célula tumoral in vitro
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Hanna, C., et al. Etiquetado de xenoinjertos derivados del cáncer de mama con reporteros trazables para estudios de crecimiento tumoral y metástasis. J. Vis. Exp. (2016).
El siguiente video describe una técnica de transducción a las células tumorales PDX (xenoinjertos derivados del paciente), que se utiliza para introducir lentivirus que expresan proteína verde fluorescente y reporteros luciferasas en la célula tumoral in vitro.
Protocol
1. Transducción de células tumorales derivadas de PDX Centrífuga disociado células tumorales a 300 g x 5 min y resuspend en medios mamosfera de 2 ml. Contar celdas viables utilizando la exclusión azul trypan (Resuspend digested cells in 5 ml wash buffer y contar células viables y no viables utilizando la exclusión azul trypan. Brevemente, mezcle 50 μl de células y 50 μl de color azul tripán y cuente las células que excluyen el trypan-blue utilizando un hemociclo). Preparar 10 ml de soporte…
Representative Results
Figura 1: Seguimiento de la eficiencia de transducción en celdas PDX disociadas. A) Células disociadas por PDX enriquecidas para células epiteliales humanas (agotamiento lin+) 24 horas después de la transducción con partículas lentivirales pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro. B) Células disociadas por PDX de un experimento separado, sin enriquecimiento de células epiteliales, 72 horas desp…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Citar este artículo
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).