Doku Mühendisliği Aljinat mikropartiküllerin ile Thermogelling Poli (N-izopropil) -graft-kondroitin Sülfat Kompozitlerin Sentezi
Summary
poli (N-izopropil akrilamid) -graft-kondroitin sülfat oluşan enjekte edilebilir doku mühendisliği iskelesi (PNIPAAm-g-CS) içeren aljinat mikro hazırlandı. Özellikleri ve in vitro biyouyumluluk şişme yapışma mukavemeti, bu çalışmada incelenmiştir. Burada geliştirilen karakterizasyon teknikleri diğer thermogelling sistemleri için geçerli olabilir.
Abstract
Enjekte edilebilir Biyo materyaller, bir sıvı olarak vücut içine ve yerinde katılaşmaya edilebilir implante edilebilir maddeler olarak tanımlanır. Bu gibi malzemeler, minimal invaziv ve kolay bir şekilde düzensiz şekilli kusurlar boşluk doldurucu katı oluşturan implante edilen klinik avantaj sağlar. Enjekte biyomalzemeler yaygın doku mühendisliği için iskeleler olarak incelenmiştir. Bununla birlikte, vücudun bazı yük taşıyan alanların onarımı için, örneğin vertebral disk gibi iskeleleri yapışkan özelliklere sahip olmalıdır. Bu kuvvetler, yeterli aktarımı sağlayan hareketi esnasında çıkış riskini en aza indirmek ve çevreleyen doku ile yakın temas sağlayacaktır. Burada, termal olarak hassas bir poli (N-izopropil akrilamid) oluşan bir iskele hazırlanmasını ve tanımlanmasını -graft-kondroitin sülfat (PNIPAAM-g-CS) ve aljinat mikro açıklar. PNIPAAm-g-CS kopolimeri aljinat içine oda sıcaklığında su içinde viskoz bir çözelti oluşturure parçacıkları yapışma geliştirmek için askıya alınır. 30 ° C civarında daha düşük kritik çözelti sıcaklığı (LCST'nin), üzerinde, kopolimer mikro etrafında katı bir jel oluşturur. Biz dikkate PNIPAAm-g-CS geri dönüşümlü faz geçişi almaya standart biyomateryaller karakterizasyon prosedürleri adapte var. Sonuçlar% 5 olarak 50 ya da 75 mg / ml aljinat parçacıklarının ilave edilmesi, (a / h) PNIPAAm-g-CS çözeltiler, tek başına PNIPAAm-GCS çekme dayanımı (p <0.05) dört katına göstermektedir. alginat mikro parçacıkların dahil edilmesi de önemli ölçüde doku defektlerinin içinde boşluk doldurucu jel korumak için yardımcı PNIPAAm-g-CS şişme kapasitesi (p <0.05) arttırır. Son olarak, 2,3-bis-in vitro Toksikoloji deney kiti sonuçları (2-metoksi-4-nitro-5-sülfofenil) -2H-tetrazolyum-5-karboksanilid (XTT) ve canlı / ölü canlılığı deneyi göstermektedir yapışkan hayatta kalma ve kapsüllü İnsan Embriyonik Böbrek çoğalmasını destekleme yeteneğine sahip (HEK) 293 c5 gün boyunca arşın.
Introduction
Enjekte edilebilir Biyo materyaller uygun bir sıvı olarak vücuda verilen ve yerinde katılaşmaya edilebilir olanlardır. Bu tür malzemeler onlar hücreler 5 için üç boyutlu geçici ekstraselüler matriks olarak etkilenen sitede 1-4 ve hareket için kapsüllü hücreleri sunmak için kullanılan rejeneratif tıp, yaygın uygulanmıştır. implantasyon için cerrahi işlemler, minimal invaziv ve katı faz düzensiz özel boyutlu implantlar için ihtiyacı ortadan kaldırarak, doku defektleri şeklinde dolgu çünkü hasta için, enjektabl biyomateryaller avantajlıdır.
Enjekte edilebilirlik çeşitli mekanizmalar aracılığıyla sağlanabilir. Dış faktörler, pH gibi hücreler ve biyolojik olarak aktif moleküllerin 6-8 kapsülleyen jeller oluşturmak için bir tetikleyici olarak incelenmiştir. Ancak, pH tüm fizyolojik ortamlarda kullanmak için en uygun tetikleyici olmayabilir. Başka geleneksel alternaenjekte edilebilirliği ulaşmak için tive yerinde kimyasal polimerizasyonu veya çapraz bağlantı kullanmaktadır. Bir grup, amonyum persülfat ve N, N, N ', N' tetrametiletilendiamin oluşan suda çözünür bir redoks sistemi geliştirilmiştir ve polietilen glikol ve poli (propilen), 9,10 glikol oluşan makromerleri reaksiyona sokmak için kullanılır. Zan ve ark., 11, gelişmiş enjekte çitosan polivinilalkol ağları glutaraldehit ile çapraz bağlanmış. Bu gibi sistemlerde, reaktif bileşenlerin sitotoksisitesi, özellikle hücre kapsülleme ile ilgili uygulamalar için, göz önünde bulundurulmalıdır. Ayrıca, ekzotermik polimerizasyon polimerik kemik 12,13 çimentolar için rapor edilmiştir çevreleyen doku, uzlaşmaya yeterince yüksek sıcaklıklara üretmek olabilir.
Yine başka enjekte edilebilir polimer sistemleri tetikleyici sıcaklık ile sıvıdan katı hale gelen bir değişiklik sergilediği geliştirilmiştir. thermogelling sistemleri olarak bilinen bu aqueo vardırUS in situ oluşumu 14 elde etmek için kimyasal uyarıcı monomerler, veya çapraz bağlayıcı maddeler gerektirmeyen polimer solüsyonları. Bunun yerine, genellikle fizyolojik sıcaklığa yakın oluşan bir faz geçişi, bir fiziksel çapraz bağları olan üç boyutlu bir ağın oluşumuna neden olur. Pluronic F127 olarak poloksamerler ilaç dağıtım 15-17 ve hücre kapsülleme 18,19 thermogelling için en çok çalışılan polimerler arasında yer almaktadır. Bununla birlikte, iyi Bu jeller, fizyolojik koşullar altında kararlılık eksikliği olduğu kabul edilmektedir. Çalışmalar zincir uzatıcı 20 veya kimyasal çapraz bağlayıcı 21,22 kullanarak artan istikrar göstermiştir. Bununla birlikte, bu reaktiflerin kullanımı, hücre kapsüllenmesi için malzeme potansiyelini sınırlamaktadır.
Poli (N-izopropil akrilamid) doku mühendisliği ve ilaç teslimat 14 önemli ilgi görmüştür sentetik thermogelling polimerdir. poli sulu çözeltiler (N-izopropilylacrylamide) (PNIPAAm), bir düşük kritik çözelti sıcaklığı (LCST'nin) gösteren, tipik olarak yaklaşık 32 meydana gelen – 34 ° C 23,24. LCST'nin altında, su PNIPAAm zincirleri nemlendirir. Geçiş sıcaklığının üstünde, polimer zehirli monomer veya çapraz bağlayıcı kullanılmadan dramatik faz ayrılması 25-27 ve bir katı jel oluşumu ile sonuçlanarak, hidrofobik hale gelir. Ancak, PNIPAAm homopolimerler zayıf elastik özellikler sergiler nedeniyle hidrofobiklik 28 fizyolojik sıcaklıkta az su tutun. Bu çalışmada, enzimatik degradasyon 29 anti-enflamatuar aktivite 30,31, ve artan su ve besin emilimi 32 potansiyel sunmaktadır PNIPAAm ağı içine kovalent kondroitin sülfat dahil seçin. CS PNIPAAm kopolimerleri aşılanmış kopolimere (PNIPAAm-g-CS) oluşturulması için metakrilat-işlevselleştirilmiş CS mevcudiyetinde monomer NIPAAm polimerleştirilmesiyle laboratuvarımızda hazırlandı. beckopolimerin, düşük çapraz bağlanma yoğunluğu ause, PNIPAAm-g-CS bağlı LCST'nin 29, oda sıcaklığında su içinde yapışkan bir çözelti ve fizyolojik sıcaklıkta elastik bir jel oluşturur. polimer çözeltileri nedeniyle geçiş geri dönüşümlü tekrar LCST'nin altında soğutma ile akışkan hale gelir.
Bu PNIPAAm-g-CS, mekanik uygun olabilir özellikleri, parçalanabilirliği, insan embriyonik böbrek (HEK) hücre proliferasyonu ile 293 hücreleri 29, bir doku mühendisliği iskelesi olarak işlev potansiyeline sahip olduğunu göstermiştir. Ancak, bu tür intervertebral disk gibi belirli yük taşıyan alanlarda, doku mühendisliği iskeleleri çıkığı 33 riskini ortadan kaldırmak için çevredeki disk dokusu ile önemli bir arayüz oluşturmak için yeteneğine sahip olmalıdır. Bu arayüz, implant ve doku 33 arasındaki ara yüzey boyunca kuvvet yeterli aktarımı için de gereklidir. Çalışmalarımızın, biz askıya almış birlginate PNIPAAm-g-CS sulu çözeltiler içinde mikropartikülleri ve jelasyon doku 34 çevreleyen yapışma sağlamak mikropartiküller, lokalize olduğu bulunmuştur. Bu yazıda thermogelling, yapışkan polimer hazırlanması için adımları özetlemektedir. canlılığı için standart biyomateryaller karakterizasyonu, hücre görüntüleme teknikleri ve tahliller dikkate polimerin sıcaklık duyarlılığı ve faz geçiş reversibilite almaya adapte edilmiştir. Bu yazıda anlatılan enjektabl polimer Bu yazıda tarif edilenler dışında ilaç dağıtım ve doku mühendisliği uygulamaları için geniş bir potansiyele sahiptir. Ayrıca, burada açıklanan karakterizasyon yöntemleri diğer thermogelling sistemlere uygulanabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
hidrojel mikropartikül kompozit sentezleme ve yapıştırıcı gücü değerlendirmek, yetenek ve hücresel biyouyumluluk şişme birkaç kritik adımlar vardır. PNIPAAm-g-CS serbest radikal polimerizasyonu kondroitin sülfat başarılı methacrylation monomer bileşenlerinin tam çözülmesini, ve oksijensiz reaksiyon koşulları gerektirir. Yerli intervertebral disk dokusunun 29 benzer mekanik özelliklere sahip kopolimerler üretmek için, önceki çalışmada, gösterilmiştir, çünkü reaksiyon karı?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar minnetle yapıştırıcı çekme test protokolünün geliştirilmesi Dr. Jennifer Kadlowec yardım kabul etmek istiyorum.
Bu yayında bildirilen Araştırma Artrit ve Kas-iskelet ve Cilt Hastalıkları Ulusal Enstitüsü ve Ödül Numarası 1R15 AR 063920-01 altında Biyomedikal Görüntüleme ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Biyomühendislik Ulusal Enstitüsü tarafından desteklenmiştir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.
Materials
| N-isopropylacrylamide, 99%, pure, stabilized | Acros Organics | 2210-25-5 | Refrigerate and remove stabilier with hexane |
| Chondroitin sulfate A sodium salt (from bovine trachea) | Sigma-Aldrich | 39455-18-0 | Refrigerate |
| Hexanes | Fisher Scientific | H302-4 | Store in a flammable cabinet |
| 50% (w/w) sodium hydroxide | Fisher Scientific | SS254-1 | Caustic in nature |
| Methacrylic anhydride | Sigma-Aldrich | 276685 | Strong fumes; use in a fume hood |
| Acetone | Fisher Scientific | A18-4 | Chill in a refrigerator prior to use |
| Nitrogen Gas | Praxair | 7727-37-9 | Part Number: NI 4.8, cylinder style T, 99.998% pure nitrogen (Argon may be used as an alternative inert gas) |
| Tetramethylethylenediamine, 99% extra pure | Acros Organics | 110-18-9 | |
| Ammonium persulfate | Sigma Aldrich | A3678 | Hygroscopic and degrades in the presence of water |
| Phosphate buffered saline tablets | Fisher Scientific | BP2944 | Keep dry |
| Alginic acid, sodium salt | Acros Organics | 177775000 | Use heat to aid in dissolving |
| Calcium chloride dihydrate | Fisher Scientific | C79 | |
| Canola oil | Local store | Obtain from a local store | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | 93773 | |
| 70% (v/v) Isopropoanol | Fisher Scientific | A416-4 | |
| Porcine ears | Haine's Pork Shop | Obtain from a local butcher | |
| Sodium Chloride | Fisher Scientific | S271-3 | |
| Human embryonic kidney 293 cells | ATCC | ATCC CRL-1573 | Store in liquid nitrogen for long-term use |
| DMEM: 1X, high glucose, no pyruvate | Life Technologies | 11965126 | Refrigerate |
| Fetal bovine serum | Life Technologies | 10082-147 | Refrigerate |
| Penn Strep: 10,000 U/ml | Life Technologies | 15140-122 | Refrigerate |
| Trypsin-EDTA: 0.5%, 10X | Life Technologies | 15400-054 | Refrigerate |
| Methanol | VWR | AAA44571-K7 | |
| Live/Dead Cell viability kit | Life Technologies | L3224 | Light sensitive, keep frozen |
| XTT cell viability kit | Sigma Aldrich | TOX2-1KT | Light sensitive, keep frozen |
| Clear DMEM: 1X, high glucose, no phenol | Life Technologies | 21063-029 | Refrigerate |
| Dulbecco's PBS: 1X | Life Technologies | 14190136 | Refrigerate |
| Sodium citrate | EMD | SX0445-1 | |
| Positive displacement pipette | BrandTech Scientific, INC | 2702904 | Dispenses 100 – 500 µL and comes with attachable tips |
| No 3. Stainless Steel scalpel handle | Sigma Aldrich | S2896 | |
| Miltex sterile surgical blades | Fisher Scientific | 12-460-440 | Size 10 |
| Power gem homogenizer | Fisher Scientific | 08-451-660 | Model # 125 |
| Porcelain mortar and pestle | Sigma Aldrich | Z247464 | Holds 50 mL |
| FreeZone 1 L benchtop freeze dry system | Labconco | 7740020 | Freeze samples prior to use |
| Oil sealed rotary vane pump | Edwards | A65301906 | Model # RV5 |
| Incubating orbital shaker | VWR | 12620-946 | Model # 980153 |
| Benchtop refrigerated centrifuge | Forma Scientific, INC | Model # 5682 | |
| Heated ovens | VWR | Model # 1235PC | |
| 2 N force gauge | Shimpo | FGV-0.5XY | Model # FGV-0.5XY |
| E-force test stand | Shimpo | FGS-200PV | Model # FGS-200PV |
| Tissue culture swinging bucket centrifuge | Beckman Coulter | 366830 | Model #6S-6KR |
| Tissue culture microcentrifuge | Eppendorf | Model #5415C | |
| Hemacytometer set | Hausser Scientific | 3720 | Requires replacement cover glass slips |
| Slide warmer | Lab Scientific | XH-2022 | Model # XH-2002 |
| Portable heating lamp | Underwriters Laboratories | Helps to maintain polymer temperature at 37°C | |
| Inverted fluorescent microscope | Zeiss | Model Axiovert 25 CFL | |
| Heated water bath | VWR | Model # 1235PC | |
| Rocking platform | VWR | Series 100 | |
| Multiskan FC microtiter plate reader | Thermo Scientific | Type 357 | |
| Cell culture incubator | VWR | Model # 2350T | |
| Purifier class II biosafety cabinet | Labconco | Delta Series |
Referencias
- Bidarra, S.J., Barrias, C.C., & Granja, P.L. Injectable alginate hydrogels for cell delivery in tissue engineering. Acta Biomater. 10, 1646-1662 (2014).
- Choi, J. et al. Human extracellular matrix (ECM) powders for injectable cell delivery and adipose tissue engineering. J. Control. Release. 139, 2-7 (2009).
- Selvam, S., Pithapuram, M.V., Victor, S.P., & Muthu, J. Injectable in situ. forming xylitol-PEG-based hydrogels for cell encapsulation and delivery. Colloid Surface B. 126, 35-43 (2015).
- Park, K.M., Lee, S.Y., Joung, Y.K., Na, J.S., Lee, M.C., & Park, K.D. Thermosensitive chitosan-pluronic hydrogel as an injectable cell delivery carrier for cartilage regeneration. Acta Biomater. 5., 1956-1965 (2009).
- Ren, K., He, C., Xiao, C., Li, G., & Chen, X. Injectable glycopolypeptide hydrogels as biomimetic scaffolds for cartilage tissue engineering. Biomaterials. 51, 238-249 (2015).
- Chiu, Y.L., et al. pH-triggered injectable hydrogels prepared from aqueous N-palmitoyl chitosan: In vitro. characteristics and in vivo. biocompatibility. Biomaterials. 30, 4877-4888 (2009).
- Shim, W.S., et al. pH- and temperature-sensitive, injectable, biodegradable block copolymer hydrogels as carriers for paclitaxel. Int. J. Pharm. 331, 11-18 (2007).
- Singh, N.K., & Lee, D.S. In situ. gelling pH- and temperature-sensitive biodegradable block copolymer hydrogels for drug delivery. J. Control. Release. 193, 214-227 (2014).
- Wang, B., Zhu, W., Zhang, Y., Yang, Z., & Ding, J. Synthesis of a chemically-crosslinked thermo-sensitive hydrogel film and in situ encapsulation of model protein drugs. React. Funct. Polym. 66, 509-518 (2006).
- Zhu, W., & Ding, J. Synthesis and characterization of a redox-initiated, injectable, biodegradable hydrogel. J. Appl. Polym. Sci. 99, 2375-2383 (2006).
- Zan, J., Chen, H., Jiang, G., Lin, Y., & Ding, F. Preparation and properties of crosslinked chitosan thermosensitive hydrogel for injectable drug delivery systems. J. Appl. Polym. Sci. 101, 1892-1898 (2006).
- Togawa, D., Bauer, T.W., Lieberman, I.H., & Takikawa, S. Histologic evaluation of human vertebral bodies after vertebral augmentation with polymethyl methacrylate. Spine. 28, 1521-1527 (2003).
- Berman, A.T., Reid, J.S., Yanicko, D.R., Sih, G.C., & Zimmerman, M.R. Thermally induced bone necrosis in rabbits: relation to implant failure in humans. Clin. Orthop. Relat. R. 186, 284-292 (1984).
- Kretlow, J.D., Klouda, L., & Mikos, A.G. Injectable matrices and scaffolds for drug delivery in tissue engineering. Adv Drug. Deliver. Rev. 59, 263-273 (2007).
- Ye, F., Yaghmur, A., Jensen, H., Larsen, S.W., Larsen, C., & Ostergaard, J. Real-time UV imaging of drug diffusion and release from Pluronic F127 hydrogels. Eur. J. Pharm. Sci. 43, 236-243 (2011).
- Akash, M.S., & Rehman, K. Recent progress in biomedical applications of pluronic (PF127): Pharmaceutical perspectives. J. Control Release. 209, 120-138 (2015).
- Sellers, D.L., Kim, T.H., Mount, C.W., Pun, S.H., & Horner, P.J. Poly(lactic-co-glycolic) acid microspheres encapsulated in Pluronic F-127 prolong hirudin delivery and improve functional recovery from a demyelination lesion. Biomaterials. 35, 8895-8902 (2014).
- Jung, H., Park, K., & Han, D.K. Preparation of TGF-β1-conjugated biodegradable pluronic F127 hydrogel and its application with adipose-derived stem cells. J. Control. Release. 147, 84-91 (2010).
- Lee, S.Y., & Tae, G. Formulation and in vitro characterization of an in situ gelable, photo-polymerizable pluronic hydrogel suitable for injection. J. Control. Release. 119, 313-319 (2007).
- Chen, Y.Y., Wu, H.C., Sun, J.S., Dong, G.C., & Wang, T.W. Injectable and thermoresponsive self-assembled nanocomposite hydrogel for long-term anticancer drug delivery. Langmuir. 19, 3721-3729 (2013).
- Cellesi, F., Tirelli, N., & Hubbell, J.A. Materials for cell encapsulation via a new tandem approach combining reverse thermal gelation and covalent crosslinking. Macromol. Chem. Physic. 203, 1466-1472 (2002).
- Cellesi, F., Tirelli, N., & Hubbell, J.A. Towards a fully-synthetic substitute of alginate: development of a new process using thermal gelation and chemical cross-linking. Biomaterials. 25, 5115-5124 (2004).
- Hirokawa, Y., & Tanaka, T. Volume phase transition in a nonionic gel. J. Chem. Phys. 81, 6379-6380 (1984).
- Freitas, R., & Cussler, E.L. Temperature sensitive gels as extraction solvents. Chem. Eng. Sci. 42, 97-103 (1987).
- Schild, H., & Tirrel, D.A. Microcalorimetric detection of lower critical solution temperatures in aqueous polymer solutions. J. Chem. Phys. 94, 4352-4356 (1990).
- Yagi, Y., Inomata, H., & Saito, S. Solubility parameter of an N-isopropylacrylamide gel. Macromol. 25, 2997-2998 (1992).
- Illmain, F., Tanaka, T., & Kokufuta, E. Volume transition in a gel driven by hydrogen bonding. Nature. 349, 400-401 (1990).
- Vernengo, J., Fussell, G.W., Smith, N.G., & Lowman, A.M. Evaluation of novel injectable hydrogels for nucleus pulposus replacement. J. Biomed. Mater. Res. B. 84, 64-69 (2008).
- Wiltsey, C., et al. Characterization of injectable hydrogels based on poly(N-isopropylacrylamide)-g-chondroitin sulfate with adhesive properties for nucleus pulposus tissue engineering. J. Mater. Sci-Mater. M. 24, 837-847 (2013).
- Ronca, F., Palmieri, L., Panicucci, P., & Ronca G. Anti-inflammatory activity of chondroitin sulfate. Osteoarthr. Cart. 6, 14-21 (1998).
- Pipitone, V. Chondroprotection with chondroitin sulfate. Drug. Exp. Clin. Res. 17, 3-7 (1991).
- Moss, M., Kruger, G.O., & Reynolds, D.C. The effect of chondroitin sulfate on bone healing. Oral Surg. Oral Med. O. 20, 795-801 (1965).
- Nerurkar, N., Elliott, D.M., & Mauck, R.L. Mechanical design criteria fo intervertebral disc tissue engineering. J. Biomech. 43, 1017-1030 (2010).
- Wiltsey, C., et al. Thermogelling bioadhesive scaffolds for intervertebral disk tissue engineering: Preliminary in vitro comparison of aldehyde-based versus alginate microparticle-mediated adhesion. Acta Biomater. 16, 71-80 (2015).
- Xia, Y., Yin, X., Burke, N., & Stover, H. Thermal response of narrow-disperse poly(N-isopropylacrylamide) prepared by atom transfer radical polymerization. Macromol. 38, 5937-5943 (2005).
- Liu, Q., Zhang, P., Qing, A., Lan, Y., & Lu, M. Poly(N-isopropylacrylamide) hydrogels with improved shrinking kinetics by RAFT polymerization. Polymer. 47, 2330-2336 (2006).
- Lemoine, D., Wauters, F., Bouchend'homme, S., & Preat, V. Preparation and characterization of alginate microspheres containing a model antigen. Int. J. Pharm. 176, 9-19 (1998).
- Dang, T.D., & Joo, S.W. Preparation of tadpole-shaped calcium alginate microparticles with sphericity control. Colloid. Surface. B. 102, 766-771 (2013).
- Moebus, K., Siepmann, J., & Bodmeier, R. Novel preparation techniques for alginate-polaxamer microparticles controlling protein release on mucosal surfaces. Eur. J. Pharm. Sci. 45, 358-366 (2012).
- Lih, E., Lee, J.S., Park, K.M., Park, & K.D. Rapidly curable chitosan-PEG hydrogels as tissue adhesives for hemostasis and wound healing. Acta Biomater. 8, 3261-3269 (2012).
- Urban, J., & Maroudas, A. Swelling of the intervertebral disc in vitro. Connect. Tissue Res. 9, 1-10 (1981).
- Ma, H.L., Hung, S.C., Lin, S.Y., Chen, Y.L., & Lo, W.H., Chondrogenesis of human mesenchymal stem cells encapsulated in alginate beads. J. Biomed. Mater. Res. A. 64, 273-281 (2003).
- Leslie, S.K., et al. Controlled release of rat adipose-derived stem cells from alginate microbeads. Biomaterials. 34, 8172-8184 (2013).
- Peroglio, M., Eglin, D., Benneker, L.M., Alini, M., & Grad, S. Thermoreversible hyaluronan-based hydrogel supports in vitro. and ex vivo. disc-like differentiation of human mesenchymal stem cells. Spine J. 13, 1627-1639 (2013).
- Chen, J.P., & Cheng, T.H. Thermo-responsive chitosan-graft-poly(N-isopropylacrylamide) injectable hydrogel for cultivation of chondrocytes and meniscus cells. Macromol. Biosci. 6, 1026-1039 (2006).
- Schoichet, M.S., Li, R.H., White, M.L., & Winn, S.R. Stability of hydrogels used in cell encapsulation: an in vitro. comparison of alginate and agarose. Biotechnol. Bioeng. 50, 374-381 (1996).
- Dai, J., Wang, H., Liu, G., Xu, Z., Li, F., & Fang, H. Dynamic compression and co-culture with nucleus pulposus cells promotes proliferation and differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells. J. Biomech. 47, 966-972 (2014).
- Feng, G., et al. Effects of hypoxias and scaffold architecture on rabbit mesenchymal stem cell differentiation towards a nucleus pulposus-like phenotype. Biomaterials. 32, 8182-8189 (2011).
- Feng, G., et al. Hypoxia differentially regulates human nucleus pulposus and annulus fibrosus cell extracellular matrix production in 3D scaffolds. Osteoarth. Cartilage. 21, 582-588 (2013).
