سمية Nanogenomedicine الخلوية في الخط الخليوي MCF - 7 : فحص MTT
Summary
وفحص MTT هو مقايسة سهلة وقابلة للتكرار اللونية لتقييم جدوى الخلية على أساس الحد من MTT الصفراء وانتاج المياه formazan الأرجواني المستعصية. هنا ، وقد تم تقييم جدوى خلايا MCF – 7 على علاج nanogenomedicine.
Abstract
قد السمسة من nanogenomedicine مستقبلية (قصيرة مثل الحمض النووي الريبي التدخل والعقاقير) تعيق تطوره السريري. من هذه ، قد الطب الجيني على أساس و / أو حاملة انتزاع السمية الخلوية. لتقييم هذه السمسة ، منهجية مشتركة تعتمد إلى حد كبير على الاستفادة من 3 — (4 ، 5 – 2 – ثنائي ميثيل thiazolyl) -2 ، 5 ثنائي الفينيل – 2H – tetrazolium بروميد (MTT) مقايسة التي استخدمت على نطاق واسع نهج اللونية القائمة على نشاط الإنزيمات نازعة الميتوكوندريا في الخلايا. في هذا التحقيق الحالية ، تم تلقيح خلايا MCF – 7 – 96 في طبق بشكل جيد وبنسبة 50 ٪ confluency انهم عوملوا مع nanopolyplexes مختلفة ويتعرضون للفحص MTT بعد 24 ساعة. يتم استقلاب الماء MTT الصفراء للذوبان من قبل خلايا نشطة في عملية التمثيل الغذائي formazan المياه الأرجواني غير قابلة للذوبان ، والتي حلت في زيادة درجة الحموضة عازلة dimethylsulfoxide وSornson ق 10.5. ويمكن قياس هذا المنتج الناتجة من القياس الطيفي باستخدام قارئ لوحة في 570 نانومتر.
Protocol
Discussion
يعتبر فحص MTT أن يكون الأسلوب تنوعا ، وبالتالي يمكن تقييم الجدوى من الخلايا على العلاجات المختلفة. إنتاج formazan الناتجة يبدو متناسبا مع مستوى الأيض الطاقة في الخلايا. ولذلك ، فمن الممكن لقياس خلايا تنشيط عملية الأيض حتى في حالة عدم وجود تكاثر الخلايا. كمية إنتاج formazan يتن…
Acknowledgements
فإن الكتاب أن نعترف تقنية الخلايا الجذعية وشركات غازي شهيد تبريز على التوالي لتوفير المياه الفينول DMEM دون الحمراء ومعقم للحقن كهدايا.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
References
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Recherche en cancérologie. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
- Yang, M. Energy and Redox States in the C6 Glioma Cells Following Acute Exposure to Zn, Se +4 , and Se +6 and the Correlation with Apoptosis. Toxicology Mechanisms and Methods. 16 (1), 13-13 (2006).
- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
