MTT 분석은 노란색 MTT의 감소와 물 불용성 보라색 formazan의 생산을 기반으로 세포 생존 능력 평가를위한 간단하고 재현성 colorimetric 분석이다. 여기 nanogenomedicine 치료시 MCF – 7 세포의 생존 능력이 평가되었습니다.
Abstract
미래 nanogenomedicine (예, 짧은 간섭 RNA와 안티 센스)의 세포 독성은 임상 개발을 방해 수 있습니다. 이들 중, 유전자 기반의 의학 및 / 또는 이동 통신사에서 세포 독성을 이끌어 수 있습니다. 이러한 세포 독성 평가를위한 일반적인 방법론 3의 활용에 따라 크게 좌우된다 – (4, 5 – 디메틸 – 2 – thiazolyl) 널리 사용되었습니다 -2, 5 – 디페닐 – 2 시간 – tetrazolium 브로마이드 (MTT) 분석 세포 mitochondrial 탈수소 효소의 활동을 기반으로하는 colorimetric 접근. 이 현재 조사에서, MCF – 7 세포는 96 – 웰 플레이트에 주사했다 50 % confluency에서 그들은 서로 다른 nanopolyplexes 대우했다, 24 시간 후 MTT 분석을 들어서는. 수용성 황색 MTT는 더욱 dimethylsulfoxide 및 Sornson의 버퍼 산도 10.5에 녹아있는 물에 불용성 보라색 formazan에 metabolically 활성 세포에 의해 대사됩니다. 결과 제품은 570 nm의에서 플레이트 판독기를 사용하여 분광 광도법으로 계량하실 수 있습니다.
Protocol
96 – 웰 플레이트에 MCF – 7 시딩 : MCF – 7 세포는 37 Dulbecco의 수정된 이글의 중간 (DMEM) 10 % FBS, 100 U / ML 페니실린, 100 μg / ML 스트렙토 마이신을 포함하는 배지에서 25 T – 플라스크에 교양되었습니다 ° C 5% CO 2, 95 %를 공기와 습기 완료. 일단 ~ 90 % confluency에 도달, 그들은 0.05 % 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)를 사용하여 분리하고 trypan 파란색과 hemocytometer에 의해 …
Discussion
MTT 분석은 다양한 방법으로 간주하고 이에 따라 세포의 생존은 다양한 치료시 평가 수 있습니다. 결과 formazan의 생산은 세포의 에너지 대사의 수준에 비례하는 것 같아요. 따라서도 세포 증식의 부재에 metabolically 활성 세포를 측정할 수 있습니다. 생산 formazan의 양은 배양 매체에서 MTT의 금액에 비례합니다. 동안 formazan의 최대 금액을 달성하는 데 필요한 MTT의 농도는 다른 세포 라인의 활용도에 따…
Acknowledgements
저자는 선물로 주입에 대한 페놀 빨간색과 멸균 물없이 DMEM을 제공하는 각각 줄기 세포 기술과 샤히드 Ghazi 타브 리즈 회사를 인정하고 싶습니다.
Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. J. Vis. Exp. (26), e1191, doi:10.3791/1191 (2009).