Nanogenomedicine在MCF - 7细胞的细胞毒性：MTT法
Summary
MTT法是一种简便，重现性好比色法测定细胞活力评价的基础上减少黄色的MTT和不溶于水，紫色的甲臜的生产。在这里，nanogenomedicine治疗后，MCF – 7细胞的可行性进行了评估。
Abstract
未来派nanogenomedicine（例如，短干扰RNA和反义）的细胞毒性，可能妨碍其临床发展。这些基因为基础的医药和/或它的载体可能会引起细胞毒性。对于评估等的细胞毒作用，常见的方法是在很大程度上依赖利用3 – （4,5 – 二甲基-2 – 噻唑基）-2，5 – 二苯基- 2H -四氮唑溴（MTT）法已被广泛用作比色的方法，在细胞线粒体脱氢酶的酶的活性的基础上。在当前的调查，MCF – 7细胞接种在96孔板和50％汇合，他们与不同的nanopolyplexes对待，并受到24小时后，以MTT法检测。水溶性的黄色的MTT代谢的代谢活跃的细胞，不溶于水的紫色的甲臜，这是进一步溶解在二甲基亚砜和Sornson的缓冲区pH值10.5。由此产生的产品是可以量化的使用酶标仪在570 nm处一个分光。
Protocol
MCF – 7播种在96孔板： MCF – 7细胞分别培养在25吨的烧瓶中包含在37贝科的修改鹰的中等（DMEM），10％胎牛血清，100单位/毫升青霉素，和100微克/毫升链霉素中等°彗星与5％的CO 2，95％空气和完整的湿度。一旦达到〜90％汇合，他们分离用0.05％胰蛋白酶/ EDTA，并通过台盼蓝和血球计数。这些细胞，然后悬浮在浓度为4 × 10 4细胞/厘米2，补充到96孔板，8道移?…
Discussion
MTT法被认为是一个通用的方法，可以根据各种治疗方法的评估和相应的细胞的可行性。由此产生的甲臜的生产似乎是在细胞能量代谢水平成正比。因此，它是可能的措施，甚至在细胞增殖的情况下的代谢活性的细胞。产生的甲臜量在孵化介质的MTT量是成正比的。虽然，这是要求达到最高金额的甲臜的MTT浓度产生的可能发生变化后，利用不同的细胞系。此外，使用这种检测，可以检测到非常小的活…
Acknowledgements
作者想承认干细胞技术和大不里士沙希德亚瓦尔公司分别提供DMEM培养液无酚红和无菌水注射作为礼物。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
References
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Recherche en cancérologie. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
- Yang, M. Energy and Redox States in the C6 Glioma Cells Following Acute Exposure to Zn, Se +4 , and Se +6 and the Correlation with Apoptosis. Toxicology Mechanisms and Methods. 16 (1), 13-13 (2006).
- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
Citer Cet Article
Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. J. Vis. Exp. (26), e1191, doi:10.3791/1191 (2009).