Toxicité cellulaire des Nanogenomedicine dans la lignée cellulaire MCF-7: test MTT
Summary
Le test MTT est un test simple et reproductible colorimétriques pour l'évaluation de la viabilité cellulaire basé sur la réduction du MTT jaune et la production d'eau formazan violet insoluble. Ici, la viabilité des cellules MCF-7 sur le traitement des nanogenomedicine a été évalué.
Abstract
La cytotoxicité de l'nanogenomedicine futuristes (par exemple, petits ARN interférents et antisens) peuvent entraver son développement clinique. Parmi ces derniers, la médecine fondée sur les gènes et / ou son transporteur peut susciter une toxicité cellulaire. Pour l'évaluation de la cytotoxicité telle, une méthodologie commune est largement tributaire de l'utilisation de la 3 – (4, 5-diméthyl-2-thiazolyl) -2, 5-diphényl-2H-tétrazolium (MTT) qui a été largement utilisé comme une approche colorimétrique basé sur l'activité des enzymes déshydrogénases mitochondriales dans les cellules. Dans cette enquête, cellules MCF-7 ont été inoculés dans plaque de 96 puits et à 50% de confluence, ils ont été traités avec nanopolyplexes différents et soumis à des test MTT après 24 heures. Eau MTT solubles jaune est métabolisé par les cellules métaboliquement actives pour le formazan violet insoluble dans l'eau, qui est encore dissous dans du tampon pH diméthylsulfoxyde et Sornson s 10.5. Le produit résultant peut être quantifiée par spectrophotométrie en utilisant un lecteur de plaque à 570 nm.
Protocol
Discussion
Le test MTT est réputé être une méthode souple et donc la viabilité des cellules peut être évaluée sur divers traitements. La production de formazan résultante semble être proportionnelle au niveau du métabolisme énergétique des cellules. Par conséquent, il est possible de mesurer les cellules métaboliquement actives même en l'absence de prolifération cellulaire. La quantité de formazan produite est proportionnelle à la quantité de MTT dans le milieu d'incubation. Alors, la concentration de M…
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier technologie des cellules souches et Shahid Ghazi entreprises Tabriz, respectivement, pour fournir de l'eau DMEM sans rouge de phénol et stériles pour l'injection comme cadeaux.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
References
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Recherche en cancérologie. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
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- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
