Tossicità cellulare di Nanogenomedicine in MCF-7 Linea Cell: saggio MTT
Summary
Il test MTT è un test semplice e riproducibile colorimetrici per la valutazione della vitalità cellulare basato sulla riduzione di MTT giallo e produzione di formazan insolubili in acqua viola. Qui, la vitalità delle cellule MCF-7 dopo il trattamento di nanogenomedicine è stata valutata.
Abstract
Citotossicità della nanogenomedicine futuristico (per esempio, a breve RNA interferente e antisenso) può ostacolare il suo sviluppo clinico. Di questi, il gene-based medicine e / oi suoi vettore può provocare la tossicità cellulare. Per la valutazione della citotossicità tale, una metodologia comune dipende in gran parte l'utilizzo del 3 – (4, 5-dimetil-2-tiazolil) -2, 5-difenil-2H-tetrazolio bromuro (MTT) che è stato ampiamente utilizzato come un approccio colorimetrico basato su l'attività degli enzimi deidrogenasi mitocondriale nelle cellule. In questa inchiesta, cellule MCF-7 sono stati inoculati in piastra a 96 pozzetti e al 50% confluenza sono stati trattati con nanopolyplexes diversi e sottoposti a test MTT dopo 24 ore. MTT solubile in acqua gialla viene metabolizzato dalle cellule metabolicamente attivo alla insolubile in acqua viola formazan, che viene ulteriormente disciolto in tampone pH dimetilsolfossido e Sornson s 10.5. Il prodotto risultante può essere quantificata con spettrofotometria utilizzando un lettore di piastre a 570 nm.
Protocol
Discussion
Il test MTT è considerato un metodo versatile e di conseguenza la vitalità delle cellule potrebbe essere valutato su vari trattamenti. La produzione di formazan risultante sembra essere proporzionale al livello del metabolismo energetico nelle cellule. Pertanto, è possibile misurare le cellule metabolicamente attiva anche in assenza della proliferazione cellulare. La quantità di formazan prodotta è proporzionale alla quantità di MTT nel mezzo di incubazione. Mentre, la concentrazione di MTT che è necessario per o…
Acknowledgements
Gli autori desiderano ringraziare tecnologia delle cellule staminali e Shahid Ghazi aziende Tabriz, rispettivamente per la fornitura di DMEM senza rosso fenolo e acqua sterile per preparazioni iniettabili come regali.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
References
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Recherche en cancérologie. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
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- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
