Toxicidade celular de Nanogenomedicine em MCF-7 Linhagem Celular: MTT
Summary
O MTT é um ensaio simples e reprodutível colorimétrico para avaliação de viabilidade celular com base na redução do MTT amarelo e produção de formazan insolúvel em água roxa. Aqui, a viabilidade de células MCF-7 sobre o tratamento de nanogenomedicine foi avaliada.
Abstract
Citotoxicidade da nanogenomedicine futurista (eg, curtas de RNA interferente e antisense) pode prejudicar o seu desenvolvimento clínico. Desses, o medicamento baseadas em genes e / ou seu portador pode provocar toxicidade celular. Para avaliação de citotoxicidade, uma metodologia comum é em grande parte dependente de utilização de 3 – (4, 5-dimetil-2-tiazolil) -2, 5-difenil-2H-tetrazolium brometo de ensaio (MTT), que tem sido amplamente utilizado como uma abordagem colorimétrico baseado na atividade das enzimas desidrogenase mitocondrial nas células. Na presente investigação, MCF-7 foram inoculadas em células de 96 poços da placa e em 50% confluência foram tratados com nanopolyplexes diferentes e submetidos a ensaio de MTT após 24 horas. MTT solúvel em água amarela é metabolizado pelas células metabolicamente ativas para o formazan insolúvel em água roxa, que é mais dissolvido em dimetilsulfóxido pH e Sornson s tampão 10.5. O produto resultante pode ser quantificado por espectrofotometria utilizando um leitor de placas a 570 nm.
Protocol
Discussion
O ensaio de MTT é considerado um método versátil e, consequentemente, a viabilidade das células poderia ser avaliada após vários tratamentos. A produção de formazan resultante parece ser proporcional ao nível do metabolismo energético nas células. Portanto, é possível medir as células metabolicamente ativados, mesmo na ausência de proliferação celular. A quantidade de formazan produzido é proporcional à quantidade de MTT no meio de incubação. Enquanto, a concentração de MTT que é necessário para…
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer Tecnologia de Células-Tronco e empresas Shahid Ghazi Tabriz, respectivamente, para a prestação de DMEM sem água vermelha e estéril para injeção de fenol como presentes.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
References
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Recherche en cancérologie. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
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- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
