O MTT é um ensaio simples e reprodutível colorimétrico para avaliação de viabilidade celular com base na redução do MTT amarelo e produção de formazan insolúvel em água roxa. Aqui, a viabilidade de células MCF-7 sobre o tratamento de nanogenomedicine foi avaliada.
Abstract
Citotoxicidade da nanogenomedicine futurista (eg, curtas de RNA interferente e antisense) pode prejudicar o seu desenvolvimento clínico. Desses, o medicamento baseadas em genes e / ou seu portador pode provocar toxicidade celular. Para avaliação de citotoxicidade, uma metodologia comum é em grande parte dependente de utilização de 3 – (4, 5-dimetil-2-tiazolil) -2, 5-difenil-2H-tetrazolium brometo de ensaio (MTT), que tem sido amplamente utilizado como uma abordagem colorimétrico baseado na atividade das enzimas desidrogenase mitocondrial nas células. Na presente investigação, MCF-7 foram inoculadas em células de 96 poços da placa e em 50% confluência foram tratados com nanopolyplexes diferentes e submetidos a ensaio de MTT após 24 horas. MTT solúvel em água amarela é metabolizado pelas células metabolicamente ativas para o formazan insolúvel em água roxa, que é mais dissolvido em dimetilsulfóxido pH e Sornson s tampão 10.5. O produto resultante pode ser quantificado por espectrofotometria utilizando um leitor de placas a 570 nm.
Protocol
MCF-7 semeadura em 96 poços da placa: MCF-7 células foram cultivadas em 25 t frasco em meio contendo Médio Modified Dulbecco Águia (DMEM), 10% FBS, 100 U / ml de penicilina e 100 estreptomicina mcg / ml a 37 ° C com 5% de CO 2, 95% ar e umidade completa. Uma vez alcançada a 90% confluência, eles foram destacados utilizando 0,05% de tripsina / EDTA e contadas por meio de azul de tripano e hemocitômetro. Essas células foram então ressuspendidas a uma concentração de 4 × 1…
Discussion
O ensaio de MTT é considerado um método versátil e, consequentemente, a viabilidade das células poderia ser avaliada após vários tratamentos. A produção de formazan resultante parece ser proporcional ao nível do metabolismo energético nas células. Portanto, é possível medir as células metabolicamente ativados, mesmo na ausência de proliferação celular. A quantidade de formazan produzido é proporcional à quantidade de MTT no meio de incubação. Enquanto, a concentração de MTT que é necessário para…
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer Tecnologia de Células-Tronco e empresas Shahid Ghazi Tabriz, respectivamente, para a prestação de DMEM sem água vermelha e estéril para injeção de fenol como presentes.
Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. J. Vis. Exp. (26), e1191, doi:10.3791/1191 (2009).