Cellulär toxicitet av Nanogenomedicine i MCF-7 Cell Line: MTT assay
Summary
MTT-analysen är en enkel och reproducerbar kolorimetriska analys för utvärdering av cellviabiliteten bygger på reduktion av gula MTT och produktion av vatten olösliga lila formazanförening. Här har livskraft MCF-7 celler vid behandling av nanogenomedicine utvärderats.
Abstract
Cytotoxicitet av den futuristiska nanogenomedicine (t.ex. korta störande RNA och antisens) kan hämma den kliniska utvecklingen. Av dessa kan genbaserade medicin och / eller dess bärare framkalla cellulära toxicitet. För bedömning av sådana cytotoxicitet, är en gemensam metod till stor del beroende på användning av 3 – (4, 5-Dimetyl-2-tiazolyl) -2, 5-difenyl-2H-tetrazolium bromid (MTT) analys som har använts i stor omfattning som en kolorimetrisk synsätt som bygger på aktiviteten av mitokondriell dehydrogenas enzymer i celler. I det här aktuella undersökningen var MCF-7 celler inokuleras i 96-brunnars platta och 50% confluency de behandlades med olika nanopolyplexes och utsätts för MTT analys efter 24 timmar. Vattenlöslig gula MTT metaboliseras av metaboliskt aktiva celler till vatten olösliga lila formazanförening, vilket ytterligare löses i dimetylsulfoxid och Sornson buffert pH 10,5. Den resulterande produkten kan kvantifieras med spektrofotometri på en platta läsare vid 570 nm.
Protocol
Discussion
MTT-analysen anses vara en mångsidig metod och därmed lönsamheten för de celler kan utvärderas på olika behandlingar. Produktionen av resulterande formazanförening verkar stå i proportion till graden av energiomsättningen i cellerna. Därför är det möjligt att mäta metaboliskt aktiverade celler även i frånvaro av cellproliferation. Mängden formazanföreningen produceras är proportionell mot mängden MTT i inkubationstiden mediet. Medan producerade koncentrationen av MTT som krävs för att uppnå maxima…
Acknowledgements
Författarna vill tacka för teknik stamceller och Shahid Ghazi Tabriz företag respektive för att ge DMEM utan fenol rött och sterilt vatten för injektion som gåvor.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
References
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Recherche en cancérologie. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
- Yang, M. Energy and Redox States in the C6 Glioma Cells Following Acute Exposure to Zn, Se +4 , and Se +6 and the Correlation with Apoptosis. Toxicology Mechanisms and Methods. 16 (1), 13-13 (2006).
- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
