荧光标记的果蝇心结构
Summary
在这里，我们描述了从幼虫和成虫心管的不同元素的荧光标记的一个基本协议<em>果蝇</em>。这些标本非常适合通过荧光或共聚焦显微镜成像。这种技术允许一个强大的模式生物的心功能的详细的结构分析。
Abstract
“<em>果蝇</em>背船只，或心脏，是一个收缩的心肌，心包细胞沿心墙，支持alary肌肉和在成人，腹纵肌细胞层两侧排列的单层组成的管状结构。收缩纤维的房子保守的肌肉细胞结构成分，包括肌原纤维和细胞骨架/ submembranous蛋白复合物，与同源的细胞外基质的组成部分相互作用束密密麻麻。在这里，我们描述了从解剖的幼虫和半完整的成人心中的一个固定的协议，特别是心肌元素的荧光标记<em>果蝇</em>。具体来说，我们表现出的肌节的F -肌动蛋白和α-辅肌动蛋白在幼虫心中的标签。此外，我们执行标签的F -肌动蛋白和α-辅肌动蛋白，肌球蛋白GFP表达成蝇和α-辅肌动蛋白和pericardin，IV型细胞外基质的胶原蛋白，在野生型成人的心。特别注意的是，以一个半完整的成人心中的安装策略，最大限度地减少了处理和优化的机会，为维护心管及相关组织的完整性。这些准备工作都适合通过荧光和共聚焦显微镜成像。总体而言，这个程序允许的心从一个强大的基因听话的模型系统的结构特点周密细致的分析。
Protocol
Discussion
在这里，我们提出了一个协议， 准备和染色果蝇背血管和组织通过荧光或共聚焦显微镜成像。我们提供一个简洁的细化和有效的染色， 允许在幼虫和成虫果蝇心管原位成像解决通常在我们的实验室工作的步骤帐户。其他缩写形式2，3，4所描述的类似的方法。
实施染色过程时，重要的额外细节需要考虑。例如，与其他生物材料中发现，相当<…
Acknowledgements
作者感谢SI伯恩斯坦（圣迭戈州立大学）批判性阅读和有益的建议，关于这个手稿的准备。这项工作是由美国国立卫生研究院拨款支持SI伯恩斯坦，SDSU的，和R.博德默，BIMR;和一个博士后奖学金从西方国家的美国心脏协会联盟G. Vogler和A. Cammarato。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich® | E4378 | |
| Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich® | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen™ | A12381 | |
| Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories, Inc. | H-1200 | |
| Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
References
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