의 형광 라벨링 Drosophila 심장 구조
Summary
여기 우리는 유충과 성인에서 심장 튜브의 다양한 요소의 형광 라벨을위한 기본 프로토콜을 설명<em> Drosophila melanogaster</em>. 이러한 표본은 형광등이나 공촛점 현미경을 통해 이미지에 적합합니다. 이 기술은 강력한 모델 유기체에서 마음의 기능의 세부 구조 분석을 수 있습니다.
Abstract
<em> Drosophila melanogaster</em> 등의 혈관이나 심장 수축성 cardiomyocytes, 성인에서 심장 벽, 지원 alary의 근육과, 복부 세로 근육 세포의 레이어의 각 측면을 따라 정렬 pericardial 세포의 단일 레이어로 구성된 관형 구조입니다. 수축성 섬유의 집 myofibrils과 세포외 기질의 구성 요소와 상호 작용하는 동종 cytoskeletal / submembranous 단백질 단지의 밀도가 높은 포장 번들을 포함하여 근육 cytoarchitecture의 성분을 보존. 여기를 해부 애벌레와 준 그대로 성인의 마음에서 고정 특히 심근 원소의 형광 라벨을위한 프로토콜을 설명<em> Drosophila</em>. 특히, 우리는 애벌레 마음에 F – 굴지 sarcomeric 및 α – actinin의 라벨을 보여줍니다. 또한, 우리는 야생의 유형 성인의 마음에 성인 파리를 표현하고 α – actinin과 pericardin, 유형 IV 세포외 기질의 콜라겐 마이 오신 – GFP에서 F – 굴지과 α – actinin의 라벨 수행합니다. 특히주의는 취급을 최소화하고 심장병 튜브 및 관련 조직의 무결성을 유지하기위한 기회를 최적화 세미 그대로 성인의 마음에 마운트 전략에 주어집니다. 이러한 준비는 형광 및 공촛점 현미경을 통해 이미지에 적합합니다. 전반적으로,이 절차는 강력한 유전자 다루기 쉬운 모델 시스템에서 심장의 구조적 특성주의하고 자세한 분석을 위해 수 있습니다.
Protocol
Discussion
여기서 우리는 Drosophila melanogaster의 지느러미 선박 및 형광 또는 공촛점 현미경을 통해 이미지를위한 관련 조직을 준비하고 얼룩을위한 유용한 프로토콜을 제시한다. 우리도 세련되고 일반적으로 애벌레와 어른 Drosophila의 심장 튜브의 현장 이미지에 잘 해결을 허용 효과적으로 얼룩을 위해 우리가 실험실에서 고용 단계 간결한 계정을 제공합니다. 기타 약식 형태로 2, 3, 4?…
Acknowledgements
저자는이 원고의 준비에 관한 중요 읽고 도움이 제안 SI 번스타인 (샌디에고 주립 대학)을 주셔서 감사합니다. 이 작품은 SI 번스타인, SDSU,와 R. Bodmer, BIMR에 NIH 교부금에 의해 지원되었다;와 미국 심장 협회의 미국 서부 제휴에서 G. 포글러와 A. Cammarato에 박사후 교제로.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich® | E4378 | |
| Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich® | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen™ | A12381 | |
| Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories, Inc. | H-1200 | |
| Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
References
- Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. Drosophila larval NMJ dissection. J Vis Exp. , (2009).
- Molina, M. R., Cripps, R. M. Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells. Mech Dev. 1, 51-59 (2001).
- Dulcis, D., Levine, R. B. Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster. J Neurosci. 2, 271-280 (2005).
- Zeitouni, B. Signalling pathways involved in adult heart formation revealed by gene expression profiling in Drosophila. PLoS Genet. 10, 1907-1921 (2007).
- Robertson, C. W. The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological change. J. Morphol. 2, 351-399 (1936).
- Miller, A. . The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster. , (1950).
- Rizki, T. M. The circulatory system and associated cells and tissues. , (1978).
- Cammarato, A. Myosin transducer mutations differentially affect motor function, myofibril structure, and the performance of skeletal and cardiac muscles. Mol Biol Cell. 2, 553-562 (2008).
- Taghli-Lamallem, O. Dystrophin deficiency in Drosophila reduces lifespan and causes a dilated cardiomyopathy phenotype. Aging Cell. 2, 237-249 (2008).
- Kelso, R. J. a database documenting a GFP protein-trap insertion screen in Drosophila melanogaster. Nucleic Acids Res. 32, D418-D420 (2004).
- Dietzl, G. A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila. Nature. 7150, 151-156 (2007).
- Mery, A. The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function. J Exp Biol. 211, 15-23 (2008).
